Aislamiento de células T CD4 + de los ganglios linfáticos del ratón utilizando Miltenyi Purificación MACS

Summary

Aislamiento de linfocitos utilizando el kit de Miltenyi MAC es una manera confiable para purificar las células de todo homogeneizados de tejido linfoide. Células purificadas utilizando el sistema de Miltenyi suelen ser ≥ 96% de pureza. Este sentido, demuestran las medidas adoptadas para aislar las células CD4 + T, uno de los kits que se ofrecen por Miltenyi.

Abstract

Aislamiento de las células de la fuente primaria es un paso necesario en muchos protocolos más complejos. Miltenyi ofrece kits para aislar las células de varios organismos incluyendo los humanos, primates no humanos, ratas y, como se describe aquí ratones. Con bolas magnéticas basadas en la separación de células permite, ya sea para la selección positiva (o agotamiento de las células), así como la selección negativa. Este sentido, demuestran la selección negativa de CD4 he tocado ni na + células T colaboradoras. El uso de este protocolo estándar que suele purificar las células que son CD4 ≥ 96% puro + / CD3 +. Este protocolo se utiliza en conjunción con el protocolo de disección y 2-Photon imagen de los ganglios linfáticos periféricos en ratones publicado en el número 7 de Jove, para la purificación de las células T y otros tipos de células para la transferencia adoptiva con fines de imagen. A pesar de que no demostró el análisis FACS en este video de protocolo, se recomienda comprobar la pureza total de células aisladas con los anticuerpos apropiados a través de la FACS. Además, se demuestra que el método no estéril de aislamiento de células T. Si las células estériles son necesarios para su particular aplicación de usuario final, asegúrese de hacer todos los procedimientos se demuestra en la capilla de cultivo de tejidos en condiciones estándar de estéril. Gracias por su atención y buena suerte con tus propios experimentos!

Protocol

Por favor, lea y siga el protocolo incluido en el kit de Miltenyi o en línea en http://www.miltenyibiotec.com/ .

....

Discussion

Aislamiento de las células de la fuente primaria es un paso necesario en muchos protocolos más complejos. Miltenyi ofrece kits para aislar las células de varios organismos incluyendo los humanos, primates no humanos, ratas y, como se describe aquí ratones. Con bolas magnéticas basadas en la separación de células permite, ya sea para la selección positiva (o agotamiento de las células), así como la selección negativa. Este sentido, demuestran la selección negativa de CD4 he tocado ni na + células T colaboradoras. El uso de este protocolo est.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
MACS Tampón	Reactivo	Ninguno	Ninguno	Prepárese según lo descrito por Miltenyi.
Kit de aislamiento de células T CD4+: Reactivo de aislamiento intacto		Miltenyi Biotec	130-090-860	Para usar con el sistema Miltenyi.
Solución salina estéril tamponada con fosfato (PBS)	Reactivo			para uso en la preparación de tampón MACS.
Placa de cultivo Corning de 35 mm no tratada con TC	Otros	430588 de Corning		utilizados en la preparación de una suspensión de una sola célula.
Herramienta de filtro de células de 70 micras		BD Biosciences	352350	Se utiliza en la preparación de una suspensión de una sola célula.
Jeringa de 6 mL		Tyco Healthcare, Covidien	8881516051	Se utiliza en la preparación de una suspensión de una sola célula.
10x Dulbecco' s Solución salina tamponada con fosfato (DPBS)	Reactivo	Invitrogen	14200-075	Para uso en lisis de glóbulos rojos.
Reactivo de agua estéril		Sigma-Aldrich	W4502	Para uso en la lisis de glóbulos rojos.