En este artículo se describe la administración de Lux-etiquetado Bacterias a ratones y posteriores In vivo Análisis utilizando imágenes IVIS bioluminiscencia.
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Artículo de método
Imágenes bacteriana Bioluminiscente
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
Este video describe el uso de todo el cuerpo bioluminesce formación de imágenes (BLI) para el estudio del tráfico bacteriana en ratones vivos, con énfasis en el uso de bacterias en terapia génica y celular para el cáncer. Las bacterias presentes una clase de vector atractivo para la terapia del cáncer, que posee una capacidad natural para crecer preferentemente dentro de los tumores después de la administración sistémica. Las bacterias genéticamente para expresar el gen lux casete permiso BLI detección de las bacterias y al mismo tiempo sitios de tumor. La ubicación y los niveles de las bacterias dentro de los tumores con el tiempo puede ser fácilmente examinado, visualizado en dos o tres dimensiones. El método es aplicable a una amplia gama de especies bacterianas y tipos de tumores de xenoinjertos. En este artículo se describe el protocolo para el análisis de bacterias bioluminiscentes en ratones portadores de tumores subcutáneos. La visualización de las bacterias comensales en el tracto gastrointestinal (GIT) por BLI también se describe. Este potente y barato, imágenes en tiempo real representación estrategiats un método ideal para el estudio de las bacterias in vivo en el contexto de la investigación del cáncer, en terapia génica particular, y las enfermedades infecciosas. Este video muestra el procedimiento para el estudio de lux-etiquetados E. coli en ratones vivos, lo que demuestra la lectura espacial y temporal alcanzable BLI utilizar con el sistema IVIS.
Protocolo
1. La inducción de tumores
- Para la inducción de tumores de rutina, la dosis tumorígena mínima de células suspendidas en 200 l de medio de cultivo libre de suero se inyecta por vía subcutánea (sc) en el flanco de la infección libre de 6-8 semanas de edad hembras Balb / C o ratones atímicos MF1-nu/nu n = 6 (Harlan, Oxfordshire, Reino Unido) (1 x 10 6 células 4T1) utilizando una aguja de jeringa de calibre 21-. La viabilidad de las células utilizadas para la inoculación fue mayor que 95% según se determinó por recuento visual usando un hemocitómetro y la exclusión del colorante azul de tripano (Gibco).
- Después del establecimiento del tumo....
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Discusión
En el contexto de la terapia génica, la utilización de agentes biológicos para la entrega de genes terapéuticos a los pacientes ha demostrado una gran promesa 3-5. Al igual que los virus, las propiedades biológicas innatas de bacterias permitir el suministro eficiente de ADN a células o tejidos, en particular en el contexto del cáncer. Se ha demostrado que las bacterias son naturalmente capaces de homing a los tumores por administración sistémica que resulta en niveles altos de replicación a nivel local, ya s.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer el apoyo pertinente a este manuscrito de la Comisión Europea del Séptimo Programa Marco (PIOF-GA-2009-255.466) y el Consejo de Investigación en Salud de Irlanda (HRA_POR/2010/138). Lux-etiquetados E. coli fue una especie de regalo del doctor Cormac Gahan, University College Cork.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Línea celular 4T1 | ATCC | CRL-2539 | Mama singénico modelo de cáncer derivado de un surja espontáneamente BALB / c tumor mamario |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco modificada de Eagle |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 para imágenes 2D; Spectrum IVIS para 3D. | |
| Caldo Luria Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Crecimiento medio para E. coli |
| Eritromicina | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiótico |
| Estreptomicina | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiótico |
| MF1nu/nu ratones | Harlan (UK) | 069 (nu) / 070 (nu / +) | HSD: atímicos Nude-Foxn1nu |
| Ratones Balb / c | Harlan (UK) | 066 | Haplotipo: H-2 d |
| Aguja Gavage | Vet tecnología Solutions (Reino Unido) | DE009 | 22G x 38 mm aguja sonda recta |
| Jeringa para inyección IV | BD Biosciences | 309309 a 1 ml | La insulina jeringa con 28 G x ½ pulgada micro-fina aguja intravenosa. |
| Jeringa para la inoculación del tumor | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ aguja pulgadas |
Referencias
- Cronin, M., et al. High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting. PLoS One. 7, e30940(2012).
- Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. Three-dimensional reconstructio....
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Reimpresiones y permisos
