El trasplante ortotópico aórtica en los ratones para el Estudio de la Enfermedad Vascular

Resumen

Se describe una técnica en la que se trasplanta una sección de la aorta abdominal de un ratón ortotópicamente a justo por debajo de las arterias renales en un receptor alogénico o singénico. Esta técnica puede ser útil en estudios en que se considera el trasplante de las grandes arterias de tamaño uniforme ventajosa.

Resumen

Procedimientos vasculares que implican anastomosis en el ratón se cree generalmente que ser difícil y depende en gran medida de la habilidad del cirujano individual. Esto es cierto en gran medida, pero hay una serie de principios importantes que puede reducir la dificultad de estos procedimientos y aumentar la reproducibilidad. Trasplante aórtico ortotópico es un excelente procedimiento en el que aprender estos principios, ya que implica sólo dos de extremo a extremo anastomosis, pero requiere una buena técnica de sutura y la manipulación de los vasos para el éxito consistente. Este procedimiento comienza con la adquisición de una longitud de aorta abdominal de un animal donante, seguido por la división de la aorta nativa en el receptor. La aorta adquiridos se coloca entonces entre los extremos divididos de la aorta receptor y se sutura en su lugar con extremo a extremo anastomosis. Para lograr este objetivo con éxito requiere un alto grado de concentración, buenas herramientas, una mano firme y una apreciación de la facilidad con lavasculatura de un ratón puede ser dañada, resultando en trombosis. El aprendizaje de estos importantes principios es lo que ocupa la mayor parte del tiempo el principiante al aprender microcirugía en los roedores pequeños. A lo largo de este protocolo, nos referimos a estos puntos importantes. Este modelo puede ser utilizado para estudiar la enfermedad vascular en una variedad de diferentes sistemas experimentales ^1-8. En el contexto que se muestra aquí, que es la más utilizada para el estudio de la enfermedad después del trasplante vascular, una común complicación a largo plazo del trasplante de órgano sólido en el que la hiperplasia intimal se produce dentro del aloinjerto. La ventaja principal del modelo es que facilita análisis morfométricos cuantitativos y el vaso trasplantado se encuentra contiguo al recipiente endógeno, que puede servir como un control adicional ^9. La técnica mostrada aquí es la más utilizada para los ratones de peso 18-25 gramos. Hemos acumulado la mayor parte de nuestra experiencia en el uso de la C57BL/6J, BALB / cJ, y las cepas C3H/HeJ.

Protocolo

1. Preparación prequirúrgica

1. Los procedimientos quirúrgicos, no importa cuán cuidadosamente hecho, dan lugar a un estrés significativo. Para minimizar los efectos del estrés tal y para maximizar las reservas, los animales deben ser mantenidos en el vivero durante al menos 72 horas antes de su uso ^10,11.
2. Instrumentos quirúrgicos, gasas y torundas deben ser estériles. No es necesario el uso de guantes estériles proporcionan sólo las puntas de la sutura toque instrumentos o el campo operatorio.
3. Para la hemostasia, es imperativo que las presiones de sujeción son el mínimo necesario. Daños en el vaso debido a la presión excesiva o....

Resultados

La figura 1 muestra un injerto aórtico. Las flechas blancas indican las líneas de sutura. Un injerto de patente mostrará un pulso visible. Figura 2 indica un experimento típico en el que se siguió la supervivencia receptor durante un periodo de 56 días. Un grupo consistía en ratones receptores de tipo salvaje (C57BL / 6 x FVB) transplantados con ratones BALB / c aorta. El otro grupo, designado "KO" se compone de los destinatarios (C57BL / 6 x FVB) deficientes en la expresión d.......

Discusión

Los modelos de ratón de trasplante aórtico proporcionar una serie de ventajas porque los ratones son muy definidas inmunogenéticamente ^9,12,13, y que puedan ser fácilmente manipulados para alterar la expresión de genes específicos, si se desea. Como se ha señalado en la introducción, la cirugía vascular en el ratón es más difícil que la mayoría de los modelos, debido al tamaño de los vasos. Incluso las grandes arterias, tales como la aorta son por lo general no más de 100-200 m de diámetro interior, de modo q.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Artículo	Empresa	N º de catálogo
Abrazaderas vasculares	Herramientas Artes Ciencias	00396-01 (Tamaño B-1)
Dumont Pinzas	Herramientas Artes Ciencias	11293-00
10-0 Needled microsutura	AROSurgical	TK-107038
Tijera recta	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5620
Cauterizador de baja temperatura	Beaver-Visitec Internacional	8441000
Auto retractor	World Precision Instruments	14240