Un modo eficaz de aislar los linfocitos de ratón tracto genital se describe. Este método tiene la ventaja de digestión enzimática y separación por gradiente de Percoll para permitir el aislamiento eficiente. Esta técnica es también adaptable a para su uso en otras especies
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Artículo de método
Aislamiento de linfocitos de ratón del tracto genital Mucosa
En este artículo
Resumen
Resumen
Las superficies mucosas, incluso en los tractos gastrointestinales, urogenitales y respiratorias, ofrecen puertas de entrada para los patógenos, como los virus y las bacterias 1. Mucosas también son sitios inductivos en el huésped para generar inmunidad contra los agentes patógenos, tales como las placas de Peyer en el tracto intestinal y el tejido linforreticular nasal asociada en el tracto respiratorio. Esta característica única hace inmunidad de la mucosa como actor fundamental del sistema de defensa del huésped. Muchos estudios se han centrado en los sitios de la mucosa gastrointestinal y respiratorio. Sin embargo, ha habido muy poca investigación de la reproducción sitios de la mucosa. La mucosa del tracto genital es el sitio de la infección primaria de las enfermedades de transmisión sexual (ETS), incluyendo infecciones bacterianas y virales. Las ETS son uno de los retos de salud más críticos que enfrenta el mundo hoy en día. Centros para el Control y Prevención de Enfermedades estima que hay 19 millones de nuevos infecciosas cada año en los Estados Unidos. STDs costar la salud de los EE.UU. sistema de atención de 17 mil millones dólares cada año 2, y los individuos de costes aún más en las consecuencias inmediatas de salud y larga vida. Para hacer frente a este reto, una mayor comprensión de la inmunidad de la mucosa reproductiva es necesaria y aislar linfocitos es un componente esencial de estos estudios. Aquí, se presenta un método para aislar reproducible linfocitos murinos de tractos genitales femeninos por estudios inmunológicos que pueden ser modificadas para la adaptación a otras especies. El método se describe a continuación se basa en un ratón.
Protocolo
1. La eliminación del tracto genital
- Sacrificar al ratón con las directrices aprobadas. Hacer incisión media baja y retraer la piel.
- Aislar y retirar tracto genital completa, desde el oviducto de la apertura vaginal.
- Abrir todo el tracto longitudinalmente con unas tijeras.
- Cortar el tracto genital con tijeras quirúrgicas finas en piezas finas (aproximadamente <1 mm) en una placa de Petri con RPMI-10/EDTA completa (véase la fórmula a continuación) y se agita el tejido en un matraz de 125 ml a temperatura ambiente en un agitador magnético ajustado para 15 min. Este procedimiento se repite dos veces y luego el sobrenadante, que c....
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Discusión
En este protocolo, se muestra cómo preparar los linfocitos de ratón tractos genitales y se domina con facilidad. El punto más crítico de este proceso es la de mantener la viabilidad celular, manteniendo las células en hielo. El rendimiento celular de este método depende de la técnica, el manejo de la habilidad, el estado infeccioso del ratón (ingenua o días después de la infección), el patógeno (bacteria, virus hongos,) y la sección de la murina examinados tracto reproductivo (oviducto, útero, segmento vaginal o tracto .......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Nos gustaría dar las gracias a las subvenciones del NIH para la financiación R01-AI026328 (KAK) y R01-AI079004 (KAK).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | |
| La colagenasa | Sigma Ciencias de la Vida | C2139-1G | |
| Percoll | GE Healthcare Bio-Sciences | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | Por Gibco Life Technologies | 11875 |
Referencias
- M, The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
- Centers for Disease Control and Prevention. 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , Centers for Disease Control and Prevention. (2010).
- Jain, S., P....
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Reimpresiones y permisos
