Un método para administrar por vía intranasal a ratones despiertos medicamentos para el fin de dirigir el cerebro se describe. Este método permite la administración repetida durante largos períodos con la administración intranasal de drogas sin anestesia, y la nariz al cerebro de entrega con una exposición sistémica mínima.
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Artículo de método
Administración intranasal de la terapéutica del SNC para Ratones Awake
En este artículo
Resumen
Resumen
La administración intranasal es un método de suministro de agentes terapéuticos para el sistema nervioso central (SNC). Es no invasiva y permite que las moléculas grandes que no atraviesan el acceso barrera hematoencefálica en el SNC. Las drogas son dirigidas directamente al SNC con la administración intranasal, reducir la exposición sistémica y los efectos sistémicos secundarios no deseados así 1. Entrega de la nariz para el SNC se produce en cuestión de minutos a lo largo de tanto los caminos de los nervios olfativos y a través de una ruta trigémino extracelular y no requiere medicamentos para unirse a cualquier receptor o el transporte axonal 2. Administración intranasal es un método ampliamente difundido y se utiliza actualmente en ensayos clínicos humanos 3.
La administración intranasal de fármacos en modelos animales permite la evaluación inicial de distribución farmacocinética y la eficacia. Con los ratones, es posible administrar fármacos a animales despiertos (no anestesiado) sobre una base regular usando una especializado agarre intranasal. Entrega Awake es beneficioso porque permite que a largo plazo la administración crónica sin anestesia, se tarda menos tiempo que con la anestesia, y puede ser aprendido y hecho por muchas personas para que equipos de técnicos puedan números grandes dosis de ratones en períodos cortos. La eficacia de la terapéutica administrado por vía intranasal de esta manera a los ratones se ha demostrado en una serie de estudios que incluyen la insulina en modelos de ratones diabéticos 4-6 y deferoxamina en modelos de ratón de Alzheimer. 7,8
El agarre intranasal en ratones se pueden aprender, pero no es fácil y requiere práctica, habilidad y un agarre preciso para cumplir efectivamente con las drogas en el cerebro y evitar el drenaje de los pulmones y el estómago. Los ratones se restringen a mano usando un scruff modificada en la mano no dominante con el cuello mantiene paralela al suelo, mientras fármaco se suministra con una pipeta usando la mano dominante. Por lo general toma 3-4 semanas de aclimatación a la manipulación de los ratones antes dese hace con este agarre sin una respuesta de estrés. Hemos preparado este vídeo JoVE para hacer esta técnica de administración intranasal más accesible.
Protocolo
1. Aclimatación de Manejo para la administración intranasal de ratones Awake
Introducción
Los ratones deben ser aclimatadas a la manipulación por un período de dos a cuatro semanas antes del inicio de la administración intranasal. Aclimatación a la manipulación es importante, ya que ayuda a asegurar una posición correcta del cuerpo para lograr la máxima eficacia de la entrega despierto fármaco intranasal. Además, los ratones que no han sido adecuadamente acostumbrados a este proceso puede tener una reacción de ansiedad grave después de la dosificación. Los ratones deben pasar cerca de 2-3 días en cada uno de nueve ....
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Resultados
Hay varias formas de determinar la eficacia de la administración de fármacos. La primera es para administrar por vía intranasal un colorante, tal como tinta India o azul de metileno y de visualizar el colorante después de la eutanasia de los animales, en el epitelio olfativo y después se remueve el cerebro, entrando en el SNC a través de la lámina cribosa. El segundo es para medir el fármaco administrado ya sea mediante el uso de una etiqueta de radio-marcado o utilizando ELISA de detección de la molécula marcada. Un bu.......
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Discusión
Este método muestra cómo los ratones se pueden dar dosis regulares de medicamento intranasal para atacar el cerebro sin el uso de anestesia. Medicamento intranasal puede ser entregado a grandes grupos de ratones durante largos períodos de tiempo con el mínimo esfuerzo. Un único grupo de hasta 20 ratones por vía intranasal puede tratarse por una sola persona en menos de una hora. Una amplia gama de moléculas, que van desde los quelantes del hierro pequeños a factores de crecimiento a las células madre mesenquimales, se h.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a la atención HealthPartners Animales institucional y el empleo Comisión en el Hospital Regions.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Pipetador P20 ajustado a 6 μl | |||
| Puntas de pipeta para carga de geles | |||
| Cronómetro | |||
| Receptáculo de desecho para puntas | |||
| Hoja de dosificación para anotaciones | |||
| Bolígrafo | |||
| Fármaco y vehículo | |||
| Contenedor para sostener los viales de fármaco | |||
| Animales a dosificar | |||
| Guantes de repuesto | |||
| Toallas de papel para limpiar orina | |||
| Tabla 3. Materiales necesarios |
Referencias
- Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. J. Pharm Sci. 99, 1654-1673 (2010).
- Thorne, R. G., Pronk, G. J., Padmanabhan, V., Frey, W. H. 2nd
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Reimpresiones y permisos
