La actividad locomotora (LMA) es una medición simple y de fácil realización de comportamiento en ratones. Acoplamiento de software de seguimiento de vídeo (VTS) y LMA permite la mejora de la especificidad y la sensibilidad, especialmente cuando se compara con el manual, el método de cruce de línea de análisis LMA. Además VTS permite el seguimiento a largo plazo de ratón LMA.
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Artículo de método
Ratón de corto y largo plazo la actividad locomotriz analizados por el software de seguimiento de vídeo
En este artículo
Resumen
Resumen
La actividad locomotora (LMA) es una medición simple y de fácil realización de comportamiento en ratones y otros roedores. Las mejoras en el software de seguimiento de vídeo (VTS) han permitido que se acopla a las pruebas de LMA, mejorando notablemente la especificidad y la sensibilidad en comparación con el método de cruces de la línea con puntuación manual. Además, VTS permite la experimentación de alto rendimiento. Aunque es similar a la de seguimiento de vídeo automatizado utilizado para la prueba de campo abierto (OFT), LMA prueba es única, ya que permite que los ratones se mantienen en sus jaulas y no utiliza el estímulo anxiogenic de luz brillante durante la fase activa de la luz-oscuridad ciclo. Tradicionalmente, la MLA se ha utilizado durante períodos cortos de tiempo (minutos), mientras que los estudios de movimiento más largos (HRS-día) a menudo han utilizado implantado transmisores y biotelemetría. Con la opción de seguimiento en tiempo real, de largo, al igual que las pruebas de LMA a corto plazo, puede ahora llevarse a cabo utilizando videografía. LMA pruebas a largo plazo requiere un organismo especializado, Pero de fácil construcción, jaula para que los alimentos y el agua (que se coloca generalmente en la cima de la jaula) no impida videografía. Es importante destacar que, videografía y VTS permite la cuantificación de los parámetros, tales como la trayectoria de movimiento del ratón, que son difíciles o imposible de medir con la línea de cruce y / o biotelemetría. En suma, las pruebas de LMA acoplado a VTS proporciona una descripción más completa de movimiento del ratón y la capacidad de examinar la locomoción durante un período prolongado de tiempo.
Protocolo
1. Corto plazo Set Up LMA y del Procedimiento
- Corto plazo LMA jaula creada
- Pruebe LMA a corto plazo dentro de la jaula de un ratón de un solo alojados. Para facilitar el análisis de imágenes VTS-dependiente, use ropa de cama en alto contraste con el color del ratón (es decir, ropa de cama de color oscuro para los ratones blancos y ropa de cama de color claro para ratones negros).
- Durante las pruebas de LMA corto plazo, cubrir las jaulas con ¼ claro en Plexiglas con 11 x ¼ de diámetro para apoyar la ventilación adecuada.
- Corto plazo sala de pruebas LMA
- Prueba de raton....
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Resultados
Un ejemplo de los resultados de medidas repetidas, prueba de LMA a corto plazo se muestra en la Figura 1. Esta figura muestra que después de la administración de lipopolisacárido (LPS), los ratones alojados en jaulas ventiladas individualmente (IVC) recuperar la actividad locomotora a corto plazo más rápido que los ratones alojados en jaulas entorno ambiental (AEC) 6. Mientras que la pérdida inicial de la actividad locomotora es similar entre los grupos inyectados con LPS, la recuperación a b.......
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Discusión
Los síntomas de la enfermedad en ratones incluyen letargo, pérdida de interés en el entorno social y ambiental, malestar y anorexia 2-3. En los ratones y otros roedores, LMA se puede utilizar para evaluar la enfermedad después de la activación inmune 4-5. Además, LMA largo plazo ofrece la posibilidad de seguir el movimiento en un 24 horas (o más) período, permitiendo el análisis de las alteraciones inducidas por el tratamiento en el comportamiento o alteraciones en los patrones de sueño / vigilia c.......
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Divulgaciones
Los autores declaran no tener conflictos de interés.
Agradecimientos
Soporte: Esta investigación fue financiada por los Institutos Nacionales de Salud (DK064862, NS058525 y AA019357 a GGF).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cámara de video | Sony | HDR-XR500V | Otras cámaras de video similares también pueden funcionar. El formato de almacenamiento del archivo (códec/contenedor) debe ser compatible con el VTS utilizado. Se recomienda al establecer inicialmente un VTS elegir primero el VTS y trabajar con el proveedor en la elección de una cámara adecuada, especialmente con respecto al formato de archivo y la compatibilidad de la resolución de video. |
| Divisores | Fabricados a medida en función de las dimensiones específicas de la jaula. Para facilitar el análisis de imágenes, los divisores deben ser de un color similar al lecho de la jaula. Los divisores estructuralmente fijos son preferibles porque aceleran la configuración entre experimentos de varios ratones, como los que implican mediciones repetidas. Los robustos divisores de jaula transportables pueden construirse de plástico opaco de 1/2 pulgada y unirse mediante una serie de traslapes cruzados. | ||
| Ropa de cama clara u oscura (opuesta al color del pelaje del ratón) | Disponible en varios distribuidores de suministros para animales de laboratorio, según la ubicación. | ||
| Tapas de jaula de plexiglás transparente | fabricadas a medida según las dimensiones | ||
| Software de seguimiento de video automatizado (EthoVision XT 7) | la información Noldus | Existe una variedad de fabricantes de VTS, el uso de otro software puede ser suficiente. | |
| PC | Dell Inc. | Ver proveedores de software VTS requisitos mínimos de PC Generador | |
| ruido blanco | Dohm | DS | Una variedad de generadores de ruido blanco están disponibles, dependiendo de la necesidad. |
| Luces de abrazadera de cría con bombillas de | Varios tamaños y estilos disponibles. El número requerido depende del tamaño de la habitación / necesidades de iluminación. No exceda los 125 lúmenes en la sala de pruebas. | ||
| Banco de laboratorio o papel | El papel debe coincidir o ser muy similar en color a la ropa de cama de la jaula. |
Referencias
- Goulding, E. H., Schenk, A. K., Juneja, P., MacKay, A. W., Wade, J. M., Tecott, L. H. A robust automated system elucidates mouse home cage behavioral structure. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20575-20582 (2008).
- Kent, S., Bluthé, R. M., Kelley, K. W., Dantzer, R.
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Reimpresiones y permisos
