Hemos desarrollado un método simple, fiable, y relativamente barato para la intubación endotraqueal en ratones a través de la laringoscopia directa utilizando un otoscopio con un espéculo 2,0 mm. Esta técnica es atraumática y se puede utilizar para mediciones repetidas en experimentos crónicos. Nos resulta superior a la traqueotomía o previamente informó técnicas no quirúrgicas.
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Artículo de método
Intubación endotraqueal en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Los ratones, tanto de tipo salvaje y transgénicos, son el modelo de mamíferos principal en la investigación biomédica en la actualidad. La intubación y la ventilación mecánica son necesarios para los experimentos con animales enteros que requieren cirugía bajo anestesia profunda o mediciones de la función pulmonar. La traqueotomía ha sido el estándar para la intubación de la vía aérea en estos ratones para permitir la ventilación mecánica. Intubación orotraqueal se ha informado, pero no ha sido utilizado con éxito en muchos estudios debido a la dificultad técnica sustancial o un requisito para un equipo altamente especializado y caro. Aquí mostramos una técnica de laringoscopia directa utilizando un otoscopio equipado con un espéculo 2,0 mm y el uso de un catéter intravenoso 20 G como un tubo endotraqueal. Hemos utilizado esta técnica extensamente y fiable que intubar y llevar a cabo una evaluación precisa de la función pulmonar en los ratones. Esta técnica ha demostrado ser seguro, esencialmente sin pérdida de animales en manos experimentadas. Por otra parte, esta técnicapuede ser utilizado para estudios repetidos de ratones en modelos crónicos.
Introducción
El ratón de laboratorio ha suplantado a prácticamente todas las especies de mamíferos como el modelo principal de la biología y la biopatología. El ratón de laboratorio es la especie de mamífero más pequeño que se ha demostrado de forma clara y extensamente para ser de valor como modelo de enfermedades humanas y ha demostrado ser invaluable en los avances de nuestra comprensión de la biología humana y las enfermedades. El tiempo de gestación corto y sustancialmente menor costo ha permitido el desarrollo y estudio de ratones nulos y transgénicos como una herramienta común en la investigación biomédica. Sin embargo, el tamaño del ratón de laboratorio media (20-25 g) ha....
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Protocolo
1. Preparación de los animales
- Obtener los ratones que tienen más de 8 semanas y más de 20 g (ratones más pequeños pueden ser intubados por un experto).
- Anestesia
- Inyectar ratones con 20 mg / kg, cada uno, de ketamina y xilazina por vía intraperitoneal como una preanestésica. (Esta dosis es insuficiente para anestesiar completamente el ratón, sino que facilita la transferencia, después de la intubación, la ventilación mecánica.) Sin embargo, el ajuste de las dosis puede ser necesario de acuerdo a la respuesta anestésica en consulta con el veterinario institucional.)
- Inducir la anestesia en los ratones con 3,5% de isoflurano / o....
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Resultados
La intubación con la técnica anterior es fiable y rápido. La colocación apropiada del tubo endotraqueal es más fácilmente verificado por la observación de burbujeo del gas espirado desde la rama de expiración sumergida de la del circuito del ventilador (por lo general en una trampa de PEEP) y desviaciones negativos en una presión de la vía aérea rastreo (Figura 1). Las desviaciones negativas en el seguimiento de la presión de las vías respiratorias son las más fiables. Otros han utilizado el movimiento .......
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Discusión
En este informe se describe una técnica sencilla y fiable para intubar ratones que es no traumática y puede ser utilizado en varias ocasiones en el mismo animal. Esta técnica se puede lograr con un simple laboratorio o equipos médicos que se pueden comprar por una suma modesta. La técnica de la laringoscopia directa, originalmente reportado por Hastings y colegas 4, también se puede utilizar para una variedad de propósitos, pero principalmente para entregar con precisión sustancias de ensayo en el tracto resp.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Una Beca Mérito del Departamento de Asuntos de Veteranos y una subvención T32-HL098062 del NHLBI de los Institutos Nacionales de Salud apoya este trabajo. Queremos reconocer y agradecer el asesoramiento de Randolph H. Hasting, MD, Ph.D. y el asesoramiento y apoyo de la Unidad de Medicina Veterinaria de la VA Healthcare System San Diego.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cabezal de otoscopio de operación | Welch Allyn | 21700 | $188.98 |
| Mango de otoscopio | Welch Allyn | 71000 | $112.20 |
| Espéculo Reutilizable | Welch Allyn | 22002 | $3.98 |
| Pinza Fina | Miltex | 18-779 | $107.18 |
| Soporte de abrazadera pequeño para sujetar el otoscopio | |||
| Vaporizador de isoflurano (circuito múltiple con manejo de gases residuales al vacío) | Summit Medical | $3,000 | |
| Flexivent (Ventilador para animales) | SCIREQ | $35,000 | |
| Catéter intravenoso (20 G, 1 pulgada) | BD | 381233 | $9.62 |
| Tubo de polietileno (PE10) (0.011 en diámetro interior, 0.024 pulgadas en diámetro exterior) 100 pies | Intramedic, Clay-Adams | 427401 | $115.70 |
| Ketamina 100 mg/ml (10 botella de ml) | Butler | 23061 | $10.00 |
| Xilacina (botella de 100 ml) | Vedco | 24105 | $20.00 |
| Isoflurano (botella de 250 ml) | $15.00 | ||
| Bromuro de vecuronio 10 mg/10 ml | Pfizer | NDC 0069-0094-01 | $15.00 |
Referencias
- Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. natl. Acad. Sci. U.S.A. 88, 8277-8281 (1991).
- Watanabe, A., Hashimoto, Y., Ochiai, E., Sato, A., Kamei, K.
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Reimpresiones y permisos
