Drosophila ha surgido como un sistema modelo significativo para la disección de las bases celulares y moleculares de las respuestas de comportamiento al alcohol. Aquí se presenta un protocolo para la recogida de datos de sensibilidad de alcohol en un contexto circadiano que se puede aplicar fácilmente a otros experimentos y es muy adecuado para la investigación de pregrado.
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Artículo de método
La barra estabilizadora: Administración de Alcohol para moscas
En este artículo
Resumen
Resumen
Moscas de la fruta (Drosophila melanogaster) son un modelo establecido para la investigación del alcohol y de la biología circadiana. Recientemente, se demostró que el reloj circadiano modula la sensibilidad al alcohol, pero no la formación de la tolerancia. Aquí se describe el protocolo en detalle. El alcohol se administró a las moscas usando la barra estabilizadora. En esta configuración, el vapor de alcohol saturado que se mezcla con aire humidificado en proporciones fijas, y se administró a las moscas en cuatro tubos de forma simultánea. Las moscas se crían en condiciones estandarizadas con el fin de minimizar la variación entre las repeticiones. Tres días de edad moscas de diferentes genotipos o tratamientos se utilizan para los experimentos, de preferencia, haciendo coincidir las moscas de dos puntos diferentes de tiempo (por ejemplo, CT 5 y CT 17) hacer comparaciones directas posible. Durante el experimento, las moscas están expuestos durante 1 hora con el porcentaje predeterminado de vapor de alcohol y el número de moscas que exhiben la pérdida del reflejo de enderezamiento (Lorr) o sedción se contabilizan cada 5 min. Los datos se pueden analizar usando tres enfoques estadísticos diferentes. La primera consiste en determinar el momento en el que el 50% de las moscas han perdido su reflejo de enderezamiento y utilizar un análisis de la varianza (ANOVA) para determinar si existen diferencias significativas entre los momentos. La segunda es determinar las moscas porcentuales que muestran Lorr después de un número especificado de minutos, seguido de un análisis de ANOVA. El último método es el de analizar la serie entera veces utilizando estadística multivariante. El protocolo también se puede utilizar para experimentos no circadianos o comparaciones entre los genotipos.
Introducción
Drosophila melanogaster demuestran las respuestas conductuales bifásicos al alcohol 1 que son análogas a las respuestas humanas a este fármaco 2,3. Tras la exposición inicial a bajas concentraciones de alcohol, moscas exhiben mayor actividad locomotriz, sustituida por una falta de coordinación motora, la pérdida del control postural y corregir reflejos (pérdida del reflejo: Lorr) y sedación (falta completa de la actividad motora en respuesta a la estimulación mecánica) como la exposición al alcohol progresa 4-9. El reloj circadiano endógeno es un fuerte modulador de la sensibilidad al alcohol y la toxicidad como se ha observa....
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Protocolo
1. Montaje de la barra estabilizadora
Justificación y visión: El sistema está diseñado para administrar porcentajes controladas de vapor de alcohol a las moscas. Nota: La figura 1 presenta una visión esquemática de la barra estabilizadora puesta a punto, como se describe a continuación en tres etapas (montaje del flujo de aire, la configuración del alcohol y las botellas de agua, y el montaje de los viales de observación). En definitiva, un flujo de aire constante se divide en dos fracciones que se burbujea a través de alcohol y agua, respectivamente, se mezclan, y se administró a 4 viales de observación.
- Asamb....
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Resultados
Modulación circadiano de alcohol de sensibilidad usando la LORR 50% como marcador.
Un ejemplo representativo que muestra la modulación circadiano en la sensibilidad de alcohol durante el día se presenta en la Figura 2. LORR se midió a los seis puntos de tiempo durante el 2 º día de DD en Canton-S y el 50% LORR se determinó para cada punto de tiempo. El análisis mostró un efecto significativo de la hora del día (ANOVA: F 5,45 = 7,39, p <0,001.......
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Discusión
Los costos del abuso de alcohol y alcoholismo para la sociedad es enorme, tanto en términos de costos humanos y económicos 29 30,31. Drosophila como modelo ofrece un sistema rápido y versátil de examinar rápidamente las respuestas de comportamiento de un gran número de personas y, como tal, se ha utilizado ampliamente para tanto el alcohol 5,7,32-34 y la investigación circadiano 35-37.
Aquí, describimos un protocolo sencillo para la administración co.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
El financiamiento para esta investigación fue proporcionado por el Programa de Premio de Neurociencia de la Universidad de Florida State College de Medicina y el apoyo del Departamento de Ciencias Biológicas de la FSU. Financiación adicional fue proporcionado por una subvención-en-Ayudas del Fondo de Investigación del Alcohol Beverage Fabricante.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Alcohol 190 grados | Varios | ||
| aireadores | Tienda | ||
| tubos de silicona Whisper 60 de 1/8" | VWR | 408060-0030 | |
| 120&grados; Conector en Y | VWR | 82017-256 | |
| Desconexiones rápidas | VWR | 46600-048 | |
| Abrazaderas de tubo de plástico Productos | de última generación | 132250000 | Este o el siguiente |
| Regulador de aire en miniatura | McMaster-Carr | 8727K11 | Este o el anterior |
| Soporte de montaje del regulador de aire en miniatura | McMaster-Carr | 9891K66 | |
| Caudalímetro Gilmont tamaño 12 | VWR | 29895-242 | |
| Pinzas para herramientas | McMaster-Carr | 1722A43 | Para sujetar caudalímetros |
| Vial | VWR | 89092-722 | |
| Tapón de goma con dos orificios | VWR | 59585-186 | Cabe en viales Tubos de |
| vidrio Pyrex de 5 mm | Trikinetics | PGT5x65 | Se adapta mejor a |
| cinta de teflón | Ferretería | Para lograr un ajuste perfecto, en los tapones si es necesario | |
| Tapón de goma con dos orificios | VWR | 59582-122 | Se adapta a nuestras botellas |
| Pipetas de vidrio desechables | VWR | 53283-768 | Cortar a medida y doblar por calentamiento |
| Malla de nailon muy fina | VWR | Varias | |
| bombillas de 15 vatios | Ferretería | Luz | |
| roja cenitalFiltros fotográficos | roja segura Luz roja superior | ||
| Mini linternas con filtros rojos | Mag-light |
Referencias
- Linde, K., Lyons, L. C. Circadian modulation of acute alcohol sensitivity but not acute tolerance in Drosophila. Chronobiol. Int. 28, 397-406 (2011).
- Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. A Drosophila model for alcohol reward. Nat Neurosci. 14
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Reimpresiones y permisos
