Nos pusimos en marcha para determinar las concentraciones tolerables de tres ácidos grasos (ácidos oleico, linoleico y linolénico) y la toxina de cólera que no significativa y adversamente afectan la supervivencia celular mediante la solubilización de los ácidos grasos y la toxina y su uso en ensayos de supervivencia celular.
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Artículo de método
Determinación de los ácidos grasos tolerables y Concentraciones toxina del cólera El uso de células epiteliales intestinales humanas y de ratón BALB / c Macrófagos
En este artículo
Resumen
Resumen
El papel positivo de los ácidos grasos en la prevención y alivio de enfermedades no humanos y humanos han sido y siguen siendo ampliamente documentada. Estos papeles incluyen influencias sobre las enfermedades infecciosas y no infecciosas, incluyendo la prevención de la inflamación, así como inmunidad de la mucosa a las enfermedades infecciosas. El cólera es una enfermedad intestinal aguda causada por la bacteria Vibrio cholerae. Se produce en los países en desarrollo y si no se trata, puede causar la muerte. Si bien existen vacunas para el cólera, que no siempre son eficaces y son necesarios otros métodos preventivos. Nos pusimos en marcha para determinar las concentraciones tolerables de tres ácidos grasos (ácidos oleico, linoleico y linolénico) y la toxina del cólera a través del ratón BALB / C macrófagos y células epiteliales intestinales humanas, respectivamente. Se solubilizan los ácidos grasos anteriores y ensayos de proliferación de células utilizadas para determinar los intervalos de concentración y las concentraciones específicas de los ácidos grasos que no sont perjudiciales para la viabilidad de las células del epitelio intestinal humano. Se solubiliza la toxina del cólera y lo usamos en un ensayo para determinar los intervalos de concentración y las concentraciones específicas de la toxina del cólera que no disminuya la viabilidad celular estadísticamente en BALB / C macrófagos.
Encontramos las concentraciones de ácidos grasos óptimas para ser entre 1-5 ng / l, y que la toxina del cólera que ser <30 ng por tratamiento. Estos datos pueden ayudar a futuros estudios que tienen como objetivo encontrar un papel mucosa protectora para los ácidos grasos en la prevención o alivio de las infecciones por cólera.
Introducción
Los beneficios para la salud de los ácidos grasos, como el ácido oleico, linoleico y linolénico han sido y continúan siendo documentado. Por ejemplo, el ácido oleico ayuda a facilitar la penetración de los fármacos lipófilos en el 1,2 cuerpo, reduce la enfermedad cardiaca coronaria en un 24% cuando se sustituyen para los ácidos grasos saturados 3, y se utiliza para tratar enfermedades metabólicas tales como la adrenoleucodistrofia 4 que es una X-vinculados desorden genético del metabolismo de los ácidos grasos. . Mientras que un precursor necesario para el ácido araquidónico en los mamíferos, el ácido linoleico (a diferencia del ácido....
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Protocolo
1. Cultivo de Tejidos
- Usa los macrófagos Mus musculus (ratones BALB / c) para las determinaciones de la toxina del cólera. Inicialmente, la cultura toda M. células musculus siguiendo las instrucciones del proveedor.
- Propagar BALB / c las células de ratones en Medio de Eagle Modificado de Dulbecco con L-glutamina completado con 10% de suero fetal bovino, y 1% 1.640 medios de comunicación de base de antibiótico / antimicótico o el medio RPMI completado con 10% de suero bovino fetal, 5% de L-glutamina, y 1 % de reactivo de antibiótico / antimicótico.
- Se cultivan las células en 75 cm 2 frascos con tapas....
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Resultados
Determinación de la concentración óptima de ácidos grasos
La concentración óptima para los ácidos grasos se define como la concentración máxima a la que el crecimiento celular es comparable o superior a la de las células de control, con relativamente baja variabilidad en los resultados. Para determinar la concentración óptima de oleico, células de ácidos linoleico y linolénico se trataron inicialmente con concentraciones variables de cada ácido graso en incrementos grandes y más tarde con incre.......
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Discusión
Sugerencia de la concentración de los ácidos grasos y la toxina del cólera
Aunque el mecanismo exacto de cómo los ácidos grasos mejoran la inmunidad de la mucosa es desconocida, varios estudios han tratado de investigar sus efectos beneficiosos. Nuestro estudio tiene como objetivo proporcionar metodología para determinar la concentración máxima de ácidos grasos que las células pueden tolerar, así como la máxima concentración de la toxina del cólera que las células pueden tolerar sin una influen.......
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Divulgaciones
Los autores de este estudio tienen ningún interés financiero de los resultados de este estudio. Los fondos para este estudio fue proporcionado a FT por la Universidad de Kean, sin embargo, FT es actualmente un empleado de Kingsborough Community College.
Agradecimientos
Agradecemos a Paula Cobos y el Dr. Evros Vassiliou de asistencia de laboratorio y la prestación de los macrófagos de ratón, respectivamente. También agradecemos a nuestro director de laboratorio Richard Criasia de orientación y ayuda con los materiales. Por último, los autores agradecen Ramanpreet Kaur en busca de ayuda a la producción de video.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| fuertes/Reactivo | |||
| Mus musculus macrófagos | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Medio de águila modificado de Dulbecco | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamina | ATCC | 30-2115 | |
| Suero fetal bovino | Bio-west | S0250 | |
| Antibiótico/ Hipona antimicótica | SV3007901 | ||
| células epiteliales intestinales humanas | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare medios | ATCC | 46-X | |
| Ácido oleico | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Ácido linoleico | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Ácido linolénico | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Toxina del cólera | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon Placas de cultivo celular de 96 pocillos | BD Biosciences | 351172 | |
| Espectrofotómetro con software Dynex Revelations 4.22 | Dynex | 91000101 |
Referencias
- Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
- Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic ac....
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Reimpresiones y permisos
