El ditranol como una matriz para láser asistida por matriz de desorción / ionización de imágenes en una transformada de Fourier de iones de resonancia de ciclotrón Espectrómetro de Masas

Resumen

El ditranol (DT; 1,8-dihidroxi-9 ,10-dihydroanthracen-9-ona) ha sido reportado anteriormente como una matriz de MALDI para obtener imágenes de tejido de pequeñas moléculas; protocolos para el uso de DT para la formación de imágenes de MALDI de los lípidos endógenos en la superficie de secciones de tejido por-ion positivo MALDI-MS en un instrumento cuadrupolar-FTICR ultra alta resolución se proporcionan aquí.

Resumen

De formación de imágenes Espectrometría de masas (MSI) determina los patrones de localización y la distribución espacial de los compuestos sobre la superficie de una sección de tejido, usando principalmente de MALDI (matriz asistida por láser de desorción / ionización) basado en técnicas analíticas. Se necesitan nuevas matrices de molécula pequeña MSI, que pueden mejorar el análisis de bajo peso molecular (MW) los compuestos. Estas matrices deberán ofrecer mayores señales de analitos mientras que disminuye las señales de fondo MALDI. Además, el uso de instrumentos de ultra-alta resolución, tales como iones de transformada de Fourier de resonancia ciclotrón (FTICR) espectrómetros de masas, tiene la capacidad de resolver señales de analito a partir de señales de la matriz, y esto puede superar parcialmente muchos problemas asociados con el fondo procedente de la MALDI matriz. La reducción de las intensidades de los grupos de matriz metaestables por FTICR MS también puede ayudar a superar algunas de las interferencias de la matriz asociados con picos de otros instrumentos. De alta resolucióninstrumentos tales como los espectrómetros de masas FTICR son ventajosas, ya que pueden producir patrones de distribución de muchos compuestos simultáneamente mientras que todavía proporciona confianza en las identificaciones químicos. Ditranol (DT; 1,8-dihidroxi-9 ,10-dihydroanthracen-9-ona) ha sido reportado anteriormente como una matriz MALDI para obtener imágenes de los tejidos. En este trabajo, un protocolo para el uso de DT para MALDI imágenes de lípidos endógenos de las superficies de las secciones de tejidos de mamíferos, por-ion positivo MALDI-MS, en un cuadrupolo híbrido ultra alta resolución ha sido proporcionada instrumento FTICR.

Introducción

De formación de imágenes Espectrometría de masas (MSI) es una técnica analítica para la determinación de los patrones de localización y la distribución espacial de los compuestos sobre la superficie de una sección de tejido ^1,2. Matrix asistida por láser de desorción / ionización (MALDI) MSI para el análisis de péptidos y proteínas se ha utilizado durante más de una década y ha habido grandes mejoras en los métodos de preparación de muestras, la sensibilidad de detección, resolución espacial, la reproducibilidad y procesamiento de datos ^3,4. Mediante la combinación de información de las secciones teñidas histológicamente y experimentos MSI, pató....

Protocolo

1. Seccionar los tejidos

1. Flash congelar las muestras temáticas, una vez cosechados, con nitrógeno líquido, enviarlos en hielo seco (si se requiere el envío), y almacenar a -80 ° C hasta seccionar los tejidos. (Si se utilizan muestras comerciales, asegúrese de que las muestras se prepararon de esta manera.)
2. Cortar los órganos a un tamaño manejable para adaptarse a la diana MALDI. Recorte los partes no deseadas del órgano. Para este estudio se describe aquí, las lentes de ternera fueron decapsulated usando un procedimiento descrito ^{previamente-35} antes de seccionar los tejidos.
3. Retire órganos enteros desde -80 ° C congelador y ....

Resultados

Las muestras de tejido que se seccionan y se montaron deshielo en los portaobjetos de vidrio recubiertos de ITO deben estar intactos, sin rotura visible. Para muchos tejidos, montaje sobre un portaobjetos de vidrio recubierto de ITO deshielo tisular directa es aceptable. Para algunos tejidos específicos, tales como lente bovina, extensa desgarro del tejido se ve a menudo cuando se usa un montaje deshielo directa (Figura 1a). Prerrecubrimiento del portaobjetos de vidrio de ITO con etanol o ácido fó.......

Discusión

Las consideraciones más importantes para el éxito de MALDI MSI son: 1) la preparación del tejido, 2) la elección de la matriz, y 3) la aplicación de la matriz, y 4) la interpretación de datos y análisis. Cuando la muestra y la matriz se preparan adecuadamente, la adquisición de datos de MS está automatizado. El análisis de los datos de este tipo de experimento es bastante mano de obra intensiva.

La preparación del tejido adecuado es crucial para el éxito de los experimentos de MALDI MSI. La .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Hígado de Rata	Pel-Freez Biologicals	56023-2
Lente de ternero bovino	Pel-Freez Biologicals	57114-2	La muestra debe ser desencapsulada29 antes de usar
Dithranol (DT)	Sigma-Aldrich	10608	MALDI Matrix
α-Ácido ciano-4-hidroxi-cinámico (CHCA)	Sigma-Aldrich	70990	MALDI Matrix
Ácido 2,5-dihidroxibenzoico (DHB)	Sigma-Aldrich	85707	MALDI Matriz
Reserpina	Sigma-Aldrich	83580
Terfenadina	Sigma-Aldrich	T9652
Ácido fórmico	Sigma-Aldrich	14265
Formiato de amonio	Sigma-Aldrich	14266
Hidróxido de amonio	Sigma-Aldrich
Ácido trifluoroacético (TFA)	Sigma-Aldrich	302031
agua	Sigma-Aldrich	39253
Metanol	Sigma-Aldrich	34860
Acetonitrilo	Sigma-Aldrich	34967
Acetato de etilo	Sigma-Aldrich	34972
Isopropanol	Sigma-Aldrich	34965
Cloroformo	Sigma-Aldrich	366927
Acetona	Sigma-Aldrich	34850
	Etanol Alcoholes		95%
ES Tuning Mix	Agilent Technologies	G2431A
ITO Portaobjetos de vidrio recubierto Hudson	Surface Technology	PSI1207000	Asegúrese de que las muestras se coloquen en el lado conductor de la electricidad
Bolígrafo corrector Wite-Out Shake-N-Squeeze	Bic	WOSQP11
Pulverizador de aerógrafo	Iwata	Eclipse HP-CS
ImagePrep	Bruker	249500-LS
Adaptador MALDI	Bruker	235380

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