Artículo de método

Médula ósea derivada de macrófagos Producción

DOI:

10.3791/50966

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22 de noviembre de 2013

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1CNRS UMR 7278, IRD198, INSERM U1095, Aix-Marseille Université, 2Department of Molecular Medicine and Medical Biotechnology, University of Naples "Federico II"

En este artículo

Resumen

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Los macrófagos han sido reconocidos como un componente crítico de la respuesta inmune innata y adaptativa. La reciente explosión de conocimientos relativos a los aspectos evolutivos, genéticos y bioquímicos de la interacción entre los macrófagos y los microbios ha renovado la atención científica a los macrófagos. Este artículo describe un método para diferenciar los macrófagos de médula ósea de ratón.

Resumen

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Los macrófagos son componentes fundamentales de la respuesta inmune innata y adaptativa, y son la primera línea de defensa contra los invasores extranjeros debido a sus actividades microbicidas poderosos. Los macrófagos se distribuyen ampliamente por todo el cuerpo y están presentes en los órganos linfoides, hígado, pulmones, tracto gastrointestinal, sistema nervioso central, hueso, y la piel. Debido a su reparto, que participan en una amplia gama de procesos fisiológicos y patológicos. Los macrófagos son células altamente versátiles que son capaces de reconocer alteraciones microambientales y para mantener la homeostasis del tejido. Numerosos patógenos han desarrollado mecanismos para utilizar los macrófagos como caballos de Troya para sobrevivir, replicarse en, e infectar a los seres humanos y los animales y de propagar por todo el cuerpo. La reciente explosión de interés en los aspectos evolutivos, genéticos y bioquímicos de las interacciones huésped-patógeno ha renovado la atención científica en relación con los macrófagos. Aquí se describe unprocedimiento para aislar y cultivar los macrófagos de la médula ósea murina que proporcionará un gran número de macrófagos para el estudio de las interacciones huésped-patógeno, así como otros procesos.

Introducción

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Un aspecto significativo de la función de los macrófagos es su papel en la inmunidad innata y adaptativa. Debido a su capacidad de fagocitar partículas inertes, bacterias o parásitos, los macrófagos son una primera línea de defensa contra los invasores extranjeros. Una vez interiorizado, los microbios son degradados en los fagolisosomas. Los macrófagos también envían señales de contratación para y presentan antígenos a otras células inmunes, como los linfocitos T. Los macrófagos se derivan de monocitos. Los monocitos se originan en la médula ósea a partir de células madre mieloides y migran a la sangre periférica y diversos tejidos donde se diferencian en macrófagos.....

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Protocolo

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Declaración de Ética

El protocolo para el manejo de animales fue aprobado por el Comité de Ética institucional Animal "Conseil Scientifique du Centre de Formation et de Recherche Experimental Médico-Quirúrgica" (CFREMC, permiso Proyecto 10-300122013 a Eric Ghigo) de la Universidad de Aix-Marsella, en acuerdo con las reglas del Decreto N ° 87-848 del 10/19/1987. Los experimentos se realizaron en la Faculté de Médecine de la Timone (número de permiso de Experimentación 13.385 a Eric Ghigo).

1. Material y Cultura Preparación de Medios

  1. Esterilizar dos pinzas, dos tijeras, dos cuchillas quirúrgicas, un mort....

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Resultados

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El objetivo de este método era obtener fácilmente un gran número de macrófagos en pocos días. La preparación de células de médula ósea se ilustra en la Figura 1. Los huesos de la pata trasera se recogieron y se rompieron en un mortero. Una vez que los macrófagos residentes fueron retirados de la preparación de células de médula ósea, células de médula ósea se incubaron con GM-CSF (Día 0). Después de 3 días, las células, que eran redondas y no adherente antes del cultivo, comienzan a diferenciarse en mac.......

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Discusión

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El protocolo descrito en el presente documento detalla un método para producir un gran número de BMDMs. BMDM son células primarias y tienen la función y las propiedades de los macrófagos a partir de monocitos diferenciados biológica porque hay madura, en contraste a las líneas celulares de macrófagos, que son inmaduros. BMDMs pueden ser utilizados para la investigación genética (RNAi), la detección de drogas, los estudios funcionales, estudios de interacción huésped-patógeno y muchas otras áreas de investigación.

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Divulgaciones

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No hay conflictos de interés declarado.

Agradecimientos

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Este trabajo fue apoyado por el CNRS (PICS 2012-2014 a EG) y por una beca de la Regione Campania (n.5 LR, 28.03.2002 a Giovanna Mottola). Filippo Conti es un compañero de la Cooperación Científica Fundación'' Infectiopole Sud''. Nicola Boucherit es becario del Ministerio francés de Investigación y Tecnología. Las fuentes de financiación no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida de datos, análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
DMEMGibco Life Technologies21969-035
Suero de ternera fetalGibco Life Technologies10270
Penicilina/estreptomicinaGibco Life Technologies15070
GlutaminaGibco Life Technologies25030-024
PBS (10x)LonzaBEM515F
Lisis de glóbulos rojos tampónSigmaR7757
Filtro de celdas 70 μ m NylonBD Falcon352350
Colador de celdas 40 μ m NylonBD Falcon352340
tubos de 50 mlcualquier proveedorn/a
tubos de 15 mlcualquier proveedorn/a
Placas de Petri (100/20 mm)cualquier proveedorn/atratadas con cultivo
(35/10 mm)cualquier proveedorn/a
placas de Petri

Referencias

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  1. Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited. J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).
  2. Van Furth, R. Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderm....

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