Evaluar Miogénica Respuesta y Vasoactividad En arterias mesentéricas Resistencia Usando Miografía Presión

Resumen

Miografía de presión se utiliza para evaluar vasoactividad de las pequeñas arterias que se desarrollan constricción sostenida cuando se presuriza. Este manuscrito proporciona un protocolo detallado para evaluar en segmentos aislados de pequeñas arterias mesentéricas de ratas, vasoactividad y el efecto de la presión intraluminal del diámetro vascular.

Resumen

Arterias de resistencia pequeños constreñir y dilatar, respectivamente, en respuesta a un aumento o disminución de la presión intraluminal; este fenómeno se conoce como respuesta miogénica es un regulador clave del flujo sanguíneo local. En condiciones isobáricas arterias de resistencia pequeños desarrollan sostenidas constricción conocido como tono miogénico (MT), que es un importante factor determinante de la resistencia vascular sistémica (SVR). Por lo tanto, los preparativos ex vivo a presión de las arterias de resistencia pequeñas son las principales herramientas para el estudio de la función microvascular en estados-cerca fisiológica. Para lograr esto, un segmento intacto recién aisladas de una arteria resistencia pequeña (diámetro ~ 260 micras) se monta sobre dos cánulas pequeño de vidrio y presurizado. Estas preparaciones arteriales conservan la mayor parte en las características in vivo y evaluación permiso del tono vascular en tiempo real. Aquí le ofrecemos un protocolo detallado para evaluar vasoactividad en presurizadas pequeñas arterias mesentéricas de resistencia de ratas; estas arterias desarrollanvasoconstricción sostenida - aproximadamente 25% del diámetro máximo - cuando presuriza a 70 mmHg. Estas preparaciones arteriales se pueden utilizar para estudiar el efecto de compuestos en investigación sobre la relación entre la presión intra-arterial y vasoactividad y determinar cambios en la función microvascular en modelos animales de diversas enfermedades.

Introducción

Arterias de resistencia pequeños son los principales determinantes de la SVR y desempeñan un papel importante en la patofisiología de muchas enfermedades ^1,2. Condiciones como la diabetes ^3, embarazo ^4, isquemia-reperfusión ^5, la obesidad y la hipertensión ^6,7 se asocian frecuentemente con la función microvascular alterado. Miografía vascular no sólo puede proporcionar importantes conocimientos sobre los cambios en la función microvascular en diversas enfermedades, sino también ayudar a identificar dianas terapéuticas y evaluar la eficacia de los compuestos vasoactivos. La función vascular se ha estudiado el uso ....

Protocolo

Los ejemplos que se muestran aquí son de experimentos aprobados por IACUC en Georgia Regents de la Universidad - Protocolo nº: # 2011-0408

1. Preparación de los reactivos

1. Prepare la solución de la disección de almacén: Para 500 ml de solución madre de disección (5x), se disuelven 21,18 g de NaCl, 0,875 g de KCl, 0,739 g _MgSO4, 1,049 g MOPS y 0,019 g de EDTA en 450 ml de agua Milli-Q. Ajustar el pH a 7.3 a 7.4 utilizando 1 N NaOH. Completar el volumen hasta 500 ml con agua Milli-Q. Solución de Stock se pueden almacenar hasta 7-10 días. Ver Tabla 1 para una lista de productos químicos y sus proveedores....

Resultados

Representación esquemática de un myograph presión típica configuración se muestra en la Figura 1. Los dos extremos de la embarcación se canulan con una micropipeta de vidrio y se aseguran con suturas en ambos lados. Via tubería y una llave de paso abierto, una cánula está conectado a un regulador de presión servo-controlado; la otra cánula está conectado a una llave de paso cerrada. La cámara se perfundió con son observados por un microscopio invertido conectado a una cámara CCD PSS y diámetro vascular .......

Discusión

Pasos crítico, solución de problemas y modificaciones

En una preparación típica embarcación isobárica, la arteria se presuriza a 70 mmHg entre dos cánulas de vidrio perfundidos con agua tibia (37 ° C) PSS. Después de 30-45 min, arterias desarrollan MT, caracterizado por disminución espontánea de diámetro que se estabiliza en 20-30 min. Las arterias de resistencia de varios lechos vasculares desarrollan MT variable. Por ejemplo la resistencia de rata arterias mesentéricas desarrollan MT ~ 25% de.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Químico
Acetilcolina	Sigma Aldrich	A6625
Cloruro de calcio (CaCl2)	Sigma Aldrich	223506
D-(+)-Glucosa	Sigma	Aldrich G5767
Etilenglicol-bis(2-aminoetiléter)-N,N,N',N'-ácido tetraacético (EGTA)	Sigma Aldrich	E3889
Etileno diamina ácido tetraacético (EDTA)	Sigma Aldrich	E9884
HEPES	Sigma Aldrich	H3784
Sulfato de magnesio (MgSO4)	Sigma Aldrich	M7506
MOPS	Sigma Aldrich	M5162
Fenilefrina	Sigma Aldrich	P6126
Cloruro de potasio (KCl)	Sigma Aldrich	P3911
Fosfato de potasio (KH2PO4)	Sigma Aldrich	P5655
Bicarbonato de sodio (NaHCO3 )	Sigma Aldrich	S6014
Cloruro de sodio (NaCl)	Sigma Aldrich	S7653
Hidróxido de sodio (NaOH)	Sigma Aldrich	S5881
Nitroprusiato de sodio	Sigma Aldrich	13451
Fosfato de sodio monobásico monohidratado (NaH2PO4)	Sigma Aldrich	S9638
Piruvato de sodio	Sigma Aldrich	P8574
Table 1.
2 Solución salina fisiológica (1.000 ml) mM KCl 4.9 0.365 g NaCl 112 6.545 g MgSO4.7H2O 1.2 0.296 g KH2PO4 1.2 0.163 g Glucosa 11.5 2.072 g NaHCO3 26 2.184 g HEPES 10 2.383 g CaCl2 2 2 ml (stock de 1M) Agua desionizada 998 ml Ca2+ solución salina fisiológica libre (100 ml) mM KCl 4.9 0.036 g NaCl 112 0,645 g MgSO4.7H2O 1.2 0.029 g KH2PO4 1.2 0.016 g Glucosa 11.5 0.207 g NaHCO3 26 0,218 g HEPES 10 0,238 g EGTA 0,39 0,015 g Nitroprusiato de sodio 0.1 0.0026 g Agua desionizada 100 ml solución de disección, culata (500 ml) mM NaCl 145 21.18 g KCl 4.7 0,875 g MgSO4 1.2 0.739 g MOPS 2 1.049 g EDTA 0.02 0.019 g Agua desionizada 500 ml Solución de disección de trabajo (100 ml) mM solución de disección 20 ml Glucosa 1.2 0.091 g NaH2PO4 5 0.016 g Piruvato de sodio 2 0.022 g 2 0.2 ml (stock de 1M) Agua desionizada 79.8 ml <> < tr> < td>CaCl
Table 2. Composición de las soluciones
Equipment
CCD Monochrome Camera	La fuente de imágenes	DMK 21AU04
Calentador de solución en línea simple	Warner Instruments	64-0102
Termistor	Warner Instruments	64-0108
Controlador de temperatura automático dual	Warner Instruments	TC-344B
Extractor de micropipetas Flamígero/Marrón	Sutter Instruments	P-97
Interfaz del sistema de fluorescencia	IonOptix	modelo FSI-700
Pinzas y tijeras	World Precision Instruments
Ion Wizard-Core y análisis	IonOptix	Ion Wizard 6.0
Tubo de laboratorio	Silastic	508-005
Rata macho Sprague Dawley Harlan	Laboratories
Master flex console drive	Cole-parmer
Milli-Q Plus Sistema de agua ultrapura	Millipore	ZD5211584
Sutura de nailon monofilamento oftálmico	Ethicon	9007G
Microscopio de fotometría y dimensionamiento	Motic	AE31
Servocontrolador de presión con bomba peristáltica y transductor de presión	Instrumentación de Living Systems	PS-200
Microscopio estereoscópico	Nikon Instruments Inc	SMZ660
Cámara de recipiente	Instrumentación de sistemas vivos	CH-1
Plato de disección	Instrumentación de sistemas	vivos DD-90-S
Capilares de vidrio de pared delgada	World Precision Instruments	TW120-6
Microforge	Stoelting	51550
Table 3.

experimentales