La pérdida del reflejo de enderezamiento ha servido durante mucho tiempo como un sustituto de comportamiento estándar para la pérdida del conocimiento, también llamada la hipnosis, en animales de laboratorio. Las alteraciones en la sensibilidad anestésico volátil causadas por las intervenciones farmacológicas pueden ser detectados con un sistema de evaluación de alto rendimiento cuidadosamente controlado, que puede adaptarse para la entrega de cualquier terapéutica inhalada.
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Artículo de método
La evaluación de cambios en la volátil Anestésico general La sensibilidad de los ratones después de la intervención farmacológica local o sistémica
En este artículo
Resumen
Resumen
Un punto final deseable de la anestesia general es el estado de inconsciencia, también conocida como la hipnosis. Definir el estado hipnótico en los animales es menos sencillo de lo que es en pacientes humanos. Un sustituto de comportamiento ampliamente utilizado para la hipnosis en roedores es la pérdida del reflejo de enderezamiento (LORR), o el punto en el que el animal ya no responde a su instinto innato para evitar la vulnerabilidad de decúbito dorsal. Hemos desarrollado un sistema para evaluar LORR en 24 ratones, mientras que al mismo tiempo cuidadosamente de controlar por factores de confusión potenciales, incluyendo fluctuaciones de temperatura y diferentes flujos de gas. Estas cámaras permiten una evaluación fiable de la anestesia la sensibilidad, medido por la latencia para volver del reflejo de enderezamiento (RORR) después de una exposición al anestésico fijo. Alternativamente, usando los aumentos paso a paso (o disminuye) en la concentración de anestésico, las cámaras también permiten la determinación de la sensibilidad de una población a la inducción (o la emergencia) según lo medido porCE 50 y pendiente de Hill. Finalmente, las cámaras ambientales controladas descritos aquí pueden adaptarse para una variedad de usos alternativos, incluyendo la entrega inhalado de otros fármacos, estudios de toxicología, y la monitorización simultánea en tiempo real de los signos vitales.
Introducción
La anestesia general se definen por su capacidad de causar un estado reversible de la hipnosis en una amplia variedad de especies, sin embargo, una explicación de cómo una clase tan diverso de drogas puede provocar todo un criterio de valoración singular sigue siendo difícil de alcanzar. Un número de teorías se han postulado largo de los años, a partir de la correlación de Meyer-Overton entre la potencia anestésica y solubilidad en lípidos, que sugirió interrupciones general de membrana como la base para el 1,2 hipnosis. La evidencia más reciente sugiere que los objetivos de proteínas que afectan a la señalización neuronal contribuyen a los efectos anestés....
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Protocolo
Todos los procedimientos con animales descritos en el presente documento han sido aprobados por la Universidad de Comité de Cuidado de Animales institucional y el uso de Pennsylvania.
1. Descripción general del aparato de ensayo
- El aparato de prueba consta de 24 cámaras cilíndricas transparentes de acrílico de 10 cm de largo y 5 cm de diámetro (volumen total de 200 ml). Este tamaño es apropiado para un típico 25 g de ratón adulto. Cámaras tienen puertos en cada extremo para la entrada y salida de gas. El extremo de salida es extraíble de modo que los animales pueden ser fácilmente cargados en la cámara. Aberturas del puerto de ....
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Resultados
La Figura 1 demuestra la utilidad del ensayo LORR por etapas para determinar los efectos a largo plazo de una intervención farmacológica. Ácido iboténico (IBA) es un agonista del receptor de N-metil-D-aspartato (NMDA) glutamatérgica que se utiliza a menudo como una excitotoxina para causar lesiones neuronales permanentes. Aquí se inyectó 10 nl de 1% IBA bilateralmente en el área preóptica ventrolateral (POVL) de ratones C57BL/6J una semana antes de la prueba. La mayoría de las neuronas de este núcleo pr.......
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Discusión
Aunque la evaluación de LORR en un solo ratón es una tarea aparentemente sencilla, sin embargo es esencial para mantener las condiciones fisiológicas idénticas entre los sujetos con el fin de recopilar datos fiables a partir de un grupo de animales. El aparato LORR estrictamente regulados, de alta capacidad que aquí se presenta ofrece una manera de estandarizar los experimentos y maximizar la eficiencia. Siguiendo los principios básicos de la termorregulación y la distribución equitativa de flujo, este sistema puede ser.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Esta labor fue apoyada por R01 GM088156 y T32 HL007713-18. Nos gustaría dar las gracias a Bill Pennie y Michael Carman de la Universidad de Pennsylvania Investigación Instrumentación Shop por su ayuda en el montaje de nuestro aparato reflejo de enderezamiento.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre de la empresa de reactivos Número de | catálogo | Comentarios | |
| Oxígeno | Airgas | OX300 | |
| Isoflurano | Butler Schein | Cualquier anestésico volátil de interés puede ser sustituido | |
| Nombre del material | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Caudalímetro másico - 10 SLPM | Omega Engineering | FMA-A2309 | |
| Caudalímetro másico - 500 SCCM | Omega Engineering | FMA-A2305 | |
| Analizador de agentes anestésicos/indicador de gas | AM Bickford | FI-21 Riken | |
| Bomba de agua de calefacción | Fisher Scientific | 13-874-175 | |
| Transpondedores de temperatura | BMDS | IPTT-300 | |
| Lector de temperatura RF | BMDS | DAS-6007 |
Referencias
- Meyer, H. H. Zur theorie der alkoholnarkose. I. Mittheilung. Welche Eigenschaft der An#228;sthetica bedingt ihre narkotische Wirkung? Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 42, 109-137 Forthcoming.
- Overton, C. E.
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Reimpresiones y permisos
