Streptococcus pneumoniae es el patógeno que lleva causando neumonía adquirida en la comunidad grave y responsable de más de 2 millones de muertes en todo el mundo. El impacto de los factores bacterianos implicados en la aptitud o la virulencia se puede controlar en tiempo real en una neumonía o bacteriemia modelo agudo ratón utilizando bacterias bioluminiscentes.
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Artículo de método
Siguiendo en tiempo real el impacto de factores de virulencia neumocócica en un ratón de neumonía aguda modelo utilizando bacterias bioluminiscentes
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Resumen
Resumen
La neumonía es una de los principales problemas de salud en países en desarrollo e industrializados y se asocia con una considerable morbilidad y mortalidad. A pesar de los avances en el conocimiento de esta enfermedad, la disponibilidad de las unidades de cuidados intensivos (UCI), y el uso de potentes agentes antimicrobianos y vacunas eficaces, las tasas de mortalidad siguen siendo elevados 1. Streptococcus pneumoniae es el patógeno principal de neumonía adquirida en la comunidad (NAC) y una de las causas más comunes de la bacteriemia en seres humanos. Este patógeno está equipado con un arsenal de adhesinas de superficie expuesta y factores de virulencia que contribuyen a la neumonía y la enfermedad neumocócica invasiva (ENI). La evaluación de la función in vivo de los factores de aptitud o de virulencia bacteriana es de suma importancia para desentrañar S. mecanismos de patogenicidad pneumoniae. Los modelos murinos de neumonía, bacteremia y meningitis se utilizan para determinar el impacto de los factores de neumococo en difeFerent etapas de la infección. Aquí se describe un protocolo para controlar la difusión de neumococo en tiempo real en los ratones después intranasal o infecciones intraperitoneales con bacterias bioluminiscentes. Los resultados muestran la multiplicación y difusión de neumococos en el tracto respiratorio inferior y la sangre, que puede ser visualizado y evaluado utilizando un sistema de imagen y el software de análisis adjunto.
Introducción
Infecciones de las vías respiratorias causadas por virus o bacterias siguen siendo uno de los problemas o adquiridas en la comunidad clínicas más comunes en todo el mundo que causan aproximadamente un tercio de todas las muertes en todo el mundo. Las especies bacterianas clave son Haemophilus influenzae y Streptococcus pneumoniae 2. Sin embargo, estas especies bacterianas son normalmente constituyentes comunes de la flora del tracto respiratorio naturales. Así carro bacteriana es también de cierto riesgo para la enfermedad invasiva y dependiendo del estado inmunitario o predisposiciones de los individuos. La colonización asintomática se d....
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Protocolo
Los experimentos de infección de los animales que aquí se describen deben realizarse en estricta conformidad con los planos local e internacional (por ejemplo, la Ley de Salud de la Federación Europea de Asociaciones de Ciencia Animal de Laboratorio (FELASA)) directrices y reglamentos para el uso de animales vertebrados. Los experimentos tienen que ser aprobados por el comité de ética local y Comité de Cuidado de Animales institucional. Todos los experimentos con S. pneumoniae en el laboratorio o las infecciones en los animales se llevan a cabo en una Clase II Bioseguridad Gabinete.
1. Preparación de la Bolsa de Infecciosa....
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Resultados
La adquisición y la absorción de la metionina es de importancia central para los neumococos a mantener la forma física en su nicho de acogida 32,33. La metionina ABC transportador de lipoproteína se codifica en D39 por el SPD _ 0151 genes (TIGR4: sp_0149) y nombró MetQ 32. Los neumococos producen más enzimas de la biosíntesis de la metionina (D39: Spd_0510 - Spd_0511; TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586, mete y metF). La falta de metionina en un medio químicamente definido afecta el .......
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Discusión
Todos los experimentos realizados en animales tienen que ser aprobados por las autoridades locales y las comisiones de ética. En experimentos in vivo de infección de la carga bacteriana en los diversos nichos de acogida de animales infectados tiene que ser determinada en diversos puntos temporales después de la infección. Bajo estas condiciones experimentales los animales tienen que ser sacrificados antes del aislamiento de las bacterias de la sangre, nasofaringe, lavado bronchoalvelar, o órganos tales co.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
La investigación en el laboratorio fue apoyado por becas de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG HA 3125/3-2, DFG HA 3125/4-2) y el Ministerio Federal de Educación e Investigación (BMBF) Genómica Médica Infección (FKZ 0315828A) a SH.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Caldo Todd Hewitt | Carl Roth, Karlsruhe, Alemania | X936.1 | |
| Extracto de levadura | Carl Roth, Karlsruhe, Alemania | 2363.2 | |
| Placas de agar sangre | Oxoid, Wesel, Alemania | PB5039A | |
| Kanamycin | Carl Roth, Karlsruhe, Alemania | T832.2 | |
| Eritromicina | Sigma-Aldrich,Taufkirchen, Alemania | E6376 | |
| Suero fetal bovino (FBS) | Laboratorios PAA, Coelbe, Alemania | A11-151 | |
| Ratones CD-1, hembra | Charles River, Sulzfeld, Alemania | CD1SIFE06W08W | ratones CD-1 hembra, de seis a ocho semanas de edad |
| Ketamin 500 mg, solución inyectable Curamed | Schwabe-Curamed, Karlsruhe, Alemania | ||
| Rompun 2%, solución inyectable | Bayer Animal Health, Monheim, Alemania | ||
| BD Plastipak Jeringas de 1 ml | Becton Dickinson, Heidelberg, Alemania | 300015 | estériles Jeringas Luer-Lok con aguja |
| Puntas de cargador de gel | PeqLab | 81-13790 | Mµ ltiFlex Tips |
| Hialuronidasa | Sigma-Aldrich | H3884-100mg | Hialuronidasa Tipo IV-S de Bovine |
| test Oxygen | Air Liquide, Dü sseldorf, Alemania | M1001L50R2A001 | |
| Isoflurano | Baxter, Unterschleiß heim, Alemania | ||
| pGEM-T Easy | Promega, Mannheim, Alemania | ||
| Oligonucleótidos | Eurofins MWG, Ebersberg, Alemania | ||
| Qiaprep Spin Midiprep Kit | Qiagen, Hilden, Alemania | 27104 | |
| kit de purificación de ADN PCR | Qiagen, Hilden, Alemania | 28106 | |
| Living Image 4.1 software | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Alemania | ||
| XGI-8 Calibre del sistema de anestesia de gas | Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Alemania | ||
| Sistema de imágenes del espectro IVIS | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Alemania | ||
| Biofotómetro | Eppendorf AG, Hamburgo, Alemania |
Referencias
- Niederman, M. S., et al. Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).
- WHO,
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Reimpresiones y permisos
