Pruebas<em&gt; Drosophila</em&gt; El olfato con un ensayo del laberinto

Resumen

Se presenta una prueba de elección para revelar la influencia de sustancias odoríferas en el comportamiento de Drosophila utilizando un ensayo del laberinto.

Resumen

La detección de las señales del medio ambiente es esencial para los animales para asegurar su supervivencia. Para ello, utilizan señales ambientales tales como la visión, mecanorrecepción, el oído y chemoperception a través del gusto, por contacto directo oa través del olfato, el cual representa la respuesta a una molécula volátil que actúa en un mayor alcance. Moléculas químicas volátiles son señales muy importantes para la mayoría de los animales en la detección de peligro, una fuente de alimento, o para la comunicación entre individuos. Drosophila melanogaster es uno de los modelos biológicos más comunes para los científicos a explorar la base celular y molecular del olfato. Con el fin de resaltar las habilidades olfativas de este pequeño insecto, se describe un protocolo elección modificado basada en la prueba del laberinto en clásicamente utilizado con ratones. Los datos obtenidos con Y-laberintos dan información valiosa para comprender mejor cómo tratan los animales con su entorno permanentemente cambiante. Introducimos un protocolo paso a paso para estudiar laimpacto de los olores en mosca respuesta exploratorio utilizando este ensayo del laberinto.

Introducción

Quimiorrecepción a través del gusto o el olfato es una modalidad sensorial clave para la supervivencia de los animales. Se da señales vitales necesarias para la detección de un peligro o de las fuentes de alimentos, así como para las interacciones sociales. También ayuda a los animales a encontrar un socio necesario el sexo para su reproducción. Durante más de 20 años, la investigación intensiva, incluyendo el premio Nobel de obra de Richard Axel y Linda Buck en 2004 "por sus descubrimientos de los receptores odorantes y la organización del sistema olfativo", se ha llevado a cabo para revelar las bases moleculares y celulares de la olfacción ^1,2.

Protocolo

1. Antes de empezar

1. Utilizar una referencia de valores isogenized teniendo fenotipos conductuales estables y robustas. No existe una regla general para la elección de esta población, ya que todos los controles posibles pueden llevar heterogéneos alelos de fondo.
2. Utilice esta cepa de control para retrocruzar cada dos valores necesarios para los pasos posteriores. Este paso retrocruzamiento se representa típicamente por lo menos 5 cruces sucesivos de una sola hembra virgen (para permitir que sea posible entrecruzamiento entre cromosomas homólogos) a 2-3 machos de referencia isogénicas ^5. Este paso es importante para homogeneizar el fondo....

Resultados

Figura 1D muestra dos respuestas representativas utilizando este ensayo del laberinto. Cantón-S machos evitan fuertemente 10% de ácido acético diluido en agua destilada, mientras que no evitan significativamente ácido fenilacético 10%. Estos ensayos se basan en 10 varones por réplica colocados juntos en los viales de carga. Este protocolo a veces puede conducir a grandes errores estándar de la media. Si es necesario, es posible reducir este inconveniente mediante el uso de 20 hombres por repeticiones en.......

Discusión

Nuestro protocolo laberinto Y se basa en un protocolo previamente descrito ^9. Sin embargo, se introducen dos grandes diferencias. En primer lugar, utilizamos puntas de pipeta estrechos para evitar que las moscas de regresar una vez que deciden entrar en el vial que contiene el disolvente o el disolvente más el odorante. Estos consejos estrechos también son útiles para limitar la difusión de aroma en el laberinto. En segundo lugar, se utiliza un vial de carga menor a la fuerza a las moscas para entrar en el la.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Drosophila Tubo de poliestireno	VWR europe	734-2255	30 x 25 mm  Y-maze
Drosophila Tubo de borosilicato	Dijon verre		95 X 25 mm Y-maze Tapón
espuma	Dutscher	999038	Y-maze Conector
forma de Y	Europrix	11020605	Y-maze
100-1.000 µ l puntas	de pipeta Corning	4868	Conecte las siguientes puntas de pipeta al conector en forma de Y. Corte 2 puntas de pipeta a 65 mm del extremo ancho y conecte el extremo estrecho (con un ∼ Apertura de 2 mm) a 2 viales de prueba. Estas aberturas limitarán los cambios de sentido una vez que las moscas ingresen a los tubos que contienen los olores. Corte 1 punta de pipeta a 35 mm del extremo ancho y conéctela al vial de carga. Y-maze
Bombilla LED Rojo Lejano	Rubin-Lacaque	0RB180238	625-630 nm
Ácido Acético	Sigma-Aldrich	45725
Ácido Fenilacético	Sigma-Aldrich	P16621
Sabores	sensibles a la levadura Harina de
	eurogerm	Farine de maï s
Agar	Kalys	HP-697-25
Hidroxi metil 4 benzoato	VWR International 25605293

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