Un método modificado para heterotópico Ratón Corazón TRASPLANTE

Resumen

Se demuestra una técnica para el procedimiento microquirúrgico para el trasplante heterotópico de corazones en ratones, incluyendo métodos simplificados para la recolección de donantes y la anastomosis de los vasos receptores.

Resumen

Los ratones a menudo se utilizan como donantes de trasplante de corazón y de los beneficiarios en los estudios de la inmunología del trasplante debido a la amplia gama de ratones transgénicos y reactivos disponibles. Una dificultad se presenta debido al pequeño tamaño del animal y los desafíos técnicos considerables de la microcirugía involucrados en el trasplante de corazón. En particular, una alta tasa de fallo técnico poco después del trasplante puede ser consecuencia de la muerte del receptor y las complicaciones postoperatorias tales como parálisis de las extremidades posteriores o un corazón no late. Aquí, la técnica completa para un trasplante cardíaco heterotópico ratón se demuestra, que implica la recolección del corazón del donante y su posterior implante en un ratón receptor. El corazón del donante se cosecha inmediatamente después de la perfusión in situ con solución salina heparinizada fría y transección de la aorta ascendente y la arteria pulmonar. La operación de receptor implica la preparación de la aorta abdominal y la vena cava inferior (VCI), seguido poranastomosis de extremo a lado de la aorta del donante con la aorta destinatario utilizando un solo funcionamiento 10-0 microsutura y una anastomosis similar de la arteria pulmonar del donante con el receptor IVC. Después de la operación el animal se inyecta con 0,6 ml por vía subcutánea con solución salina normal y se le permite recuperarse de una almohadilla térmica 37 ° C. Los resultados de 227 trasplantes de corazón de ratón se resumen con una tasa de éxito a las 48 h de 86,8%. De los 13,2% de fallos dentro de 48 horas, 5 (2,2%) experimentaron parálisis de las extremidades posteriores, 10 (4,4%) tenían un corazón sin latir debido a injertar lesiones y / o trombosis isquémica, mientras que 15 (6,6%) fallecieron dentro de las 48 horas .

Introducción

Los modelos animales de trasplante de órganos pueden proporcionar información valiosa para mejorar el tratamiento de los pacientes con trasplante clínico. Los modelos de ratón son particularmente útiles para estudiar el mecanismo inmunológico de rechazo de trasplante de órgano o aceptación debido a la amplia gama de ratones y reactivos específicos para los ratones que no están disponibles para otros modelos animales ^1-3 modificados genéticamente. Uno de los retos con los modelos de ratón de trasplante es el pequeño tamaño de los donantes y los receptores que requiere considerable habilidad técnica para lograr resultados satisfactorios.

Protocolo

Antes del comienzo de los experimentos, obtener la aprobación del Comité de Ética del cuidado animal de la institución pertinente para los experimentos planeados. Mantener los ratones en la conformidad con los requisitos de su institución. El siguiente protocolo ha sido aprobado por los comités de la Universidad de Sydney y el Hospital Royal Prince Alfred.

Antes de comenzar la cirugía, todos los instrumentos deben limpiarse a fondo y se esterilizaron por inmersión en etanol al 80%. Algunas instituciones estipulan autoclave sin embargo, esto puede dañar los instrumentos de microcirugía finos en el largo plazo. Siempre que sea posible el us....

Resultados

Después de un periodo de formación inicial, se analizaron 227 casos de ratón heterotópico trasplante de corazón en nuestro grupo. La tasa de éxito dentro de la primera 24 horas fue del 90,3% y a las 48 horas era 86,8%. De los 30 (13,2%) los fallos dentro de 48 horas, 5 (2,2%) experimentaron parálisis de las extremidades posteriores y tuvo que ser sacrificado, 10 (4,4%) tenía un corazón sin latir debido a la lesión de isquemia del injerto y / o trombosis, mientras que 15 (6,6%) fallecieron dentro de las 48 horas. Algunas.......

Discusión

Ratón trasplante de corazón es un método microquirúrgico difícil que requiere considerable habilidad quirúrgica de dominar. El aspecto más difícil es el pequeño diámetro de los vasos. Además, es necesario limitar el tiempo de funcionamiento destinatario y sangrado. La técnica para el trasplante de corazón de ratón fue descrita por primera vez por Corry et al. en 1973 y posteriormente por Mottram et al ^12. Nuestros modificaciones incluyen los siguientes puntos. En primer lugar, la perfusión i.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Microscopio de operación	Leica, Heerbrugg, Suiza	M651	Máquina anestésica de aumento de 10-25X
	Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia	Vett3	Capaz de suministrar una mezcla de isoflurano y oxígeno en el aire
Tablero de operaciones	Ferretería o proveedor		de oficina Corcho denso o sintético capaz de tomar alfileres
Solución salina heparinizada (5 U/ml, 4 & deg; C)	Pfizer, EE. UU	FW25	En jeringa de 1 ml con aguja de 23 G en hielo
Solución salina normal (37 ° C)	AstraZeneca Pty Ltd, Australia	4538	En jeringa de 1 ml con aguja de 23 G en almohadilla tibia
Suturas 10- nylon, 5-0 Vicryl	Ethicon, Inc. NJ, USA	2870G/J421H
Buprenorfina (0,05 mg/kg en solución salina de 0,1 ml)	Reckitt Benckiser, Sydney, Australia		En jeringa de 1 ml con aguja de 23 G en hielo
Ampcillina (5 mg/kg en solución salina de 0,1 ml)	Álamo, Sydney, Australia		En jeringa de 1 ml con aguja de 23 G en hielo
Gel Foam	Pharmacia & Upjohn Co. EE. UU.	801289304	Cortado en trozos pequeños
Dispositivo de cauterización de alta temperatura	Medtronic, EE. UU	8444000
Almohadilla térmica / Temperatura correcta	Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790
Instrumentos de microcirugía: < / fuerte>	Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.,
Microneedleholders	Shanghai, China	WT2020
Microtijeras	"                  "	Micropinzas WT1020
(punta recta)	"                  "	WA3010
Micropinzas (punta curva)	"                  "	WA3020
Pinzas para micromosquitos (1 par)	"                  "	W40350
Pinzas atraumáticas de microvasos (1 par)	"                  "	W40130/W40150

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