Trauma cerebral aguda es una lesión grave que no tiene un tratamiento adecuado hasta la fecha. Multiphoton microscopía permite estudiar longitudinalmente el proceso de desarrollo trauma cerebral agudo y en la exploración de estrategias terapéuticas en los roedores. Dos modelos de trauma cerebral agudo estudiado con imágenes in vivo de dos fotones de cerebro se demuestran en este protocolo.
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Artículo de método
Trauma cerebral aguda en ratones seguido de Longitudinal dos fotones de imágenes
En este artículo
Resumen
Resumen
Aunque el trauma cerebral aguda a menudo resulta de daño cabeza en diferentes accidentes y afecta a una fracción sustancial de la población, no existe un tratamiento eficaz para la que todavía. Limitaciones de modelos animales utilizados actualmente impiden la comprensión del mecanismo de patología. Multiphoton microscopía permite estudiar las células y los tejidos dentro de los cerebros animales intactos longitudinalmente en condiciones fisiológicas y patológicas. A continuación, describimos dos modelos de lesión cerebral aguda estudiados por medio de dos fotones de imágenes de la conducta de las células cerebrales en condiciones postraumáticas. Una región del cerebro seleccionado se lesiona con una aguja para producir un trauma de una anchura controlada y la profundidad en el parénquima cerebral. Nuestro método utiliza pinchazo estereotáxica con una aguja de jeringa, que se puede combinar con la aplicación del fármaco simultánea. Proponemos que este método se puede utilizar como una herramienta avanzada para estudiar los mecanismos celulares de consecuencias fisiopatológicas de trauma agudo en cerebro de los mamíferos
Introducción
Lesión cerebral aguda es un problema de salud pública con una alta incidencia de lesiones en accidentes automovilísticos, caídas o agresiones, y la alta prevalencia de la discapacidad crónica posterior. Enfoques terapéuticos para el tratamiento de la lesión cerebral permanecen totalmente sintomático, lo que limita la eficacia de la atención pre-hospitalaria, quirúrgica y crítica. Esto hace que el impacto social y económico de la lesión cerebral particularmente grave. Por una variedad de razones, la mayoría de los ensayos clínicos no han demostrado mejora en la recuperación después de la lesión cerebral utilizando nuevos enfoques terapéuticos.
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Protocolo
Todos los procedimientos que aquí se presentan se realizaron de acuerdo a la guía local para el cuidado de animales (La Ley finlandesa sobre Experimentación Animal 62/2006). Licencia Animal (ESAVI/2857/04.10.03/2012) se obtuvo de las autoridades locales (ELÄINKOELAUTAKUNTA-ELLA). Ratones adultos de 1-3 meses de edad, peso 24-38 g, se mantuvieron en jaulas individuales en las instalaciones de animales certificados de la Universidad y siempre con comida y agua ad libitum.
1. Lesión Cerebral Imaging través de una ventana craneal
- Anestesiar animales y la preparación del campo operatorio
- Anestesie ratones por inyec....
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Resultados
Hemos optimizado dos procedimientos de operación: 1) la ventana craneal crónica y 2) adelgazamiento del cráneo, por imagen cerebral postraumático en ratones transgénicos. Vista esquemática de las preparaciones experimentales se presenta en la Figura 1. Pinchazo traumática por aguja de acero de 0,3 mm de diámetro exterior (30 g) se aplica a la pozo perforado (Figura 1A). Una preparación de ventana del cráneo con éxito permite obtener imágenes a profundidades de hasta 650 m por debajo de .......
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Discusión
Traumatismo cerebral es un acontecimiento imprevisible abrupto. Aquí, se describe el modelo animal que reproduce un espectro de cambios patológicos observados en pacientes humanos después de la lesión cerebral, tales como la neurodegeneración, la eliminación de las dendritas, edema cerebral, cicatriz glial, hemorragias en la corteza cerebral, junto con una hemorragia subaracnoidea focal y aumento de la permeabilidad de la barrera sangre-cerebro. Para estudiar la patogénesis primaria y secundaria, así como la recuperació.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Estamos profundamente agradecidos con el Dr. Frank Kirchhoff para proporcionar GFAP-EGFP y cepas de ratón CX3CR1-EGFP. El trabajo fue apoyado por becas del Centro de Movilidad Internacional de Finlandia, Tekes, finlandés Graduate School of Neuroscience (FGSN) y la Academia de Finlandia.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Pinzas tontas 2A-sa, 115 mm | XYtronic | XY-2A-SA | |
| 30 G ½ en aguja | BD | REF 304000 | |
| Recortadora de animales, máquina de afeitar | Aesculap | Isis GT420 | |
| Microscopio binocular | Zeiss | Stemi 2000 | |
| Controlador de temperatura biológico con almohadilla térmica de acero inoxidable | Supertech | TMP-5b | |
| Cuchilla microquirúrgica roma | BD | REF 374769 | |
| Tubo de borosilicato con filamento | Sutter Instruments | BF120-69-10 | Para la producción de pipetas de vidrio |
| Carprofeno | Pfizer | Rimadyl vet | |
| Digluconato de clorhexidina | Sigma | C9394 | |
| Cemento dental | DrguDent, Dentsply | REF 640 200 271 | |
| Dexametasona | FaunaPharma | Rapidexon vet | |
| Taladros desechables | Meisinger | HP 310 104 001 001 008 | |
| Dulbeco' s PBS 10x | Pinza Sigma | D1408 | |
| Dumont #5, 110 mm | FST | 91150-20 | |
| Extractor de microelectrodos Ealing | Ealing | 50-2013 | Extractor vertical para la producción de pipetas de vidrio |
| Pomada oftálmica | Novartis | Viscotears | |
| Control de taladro Foredom | Foredom FM3545 | ||
| Pieza | de mano de micromotor ForedomForedom | MH-145 | |
| Plataforma de anestesia gaseosa para ratones | Stoelting | 50264 | Montado en instrumento estereotáxico |
| Hemostasia Colágeno Esponja | Avitene, Ultrafoam BARD | Ref 1050050 | |
| Imaris | Bitplane | ||
| Ketamina | Intervet | Ketaminol vet | |
| Mai Tai DeepSee láser | Spectra-Physics | ||
| Soporte metálico | Neurotar | ||
| Pinza de microapósito, 105 mm | Aesculap | BD302R | |
| Microfil | WPI | MF34G-5 | Microjeringa de llenado de capilares |
| Aceite mineral | Sigma | M8410 | |
| Microscopio de barrido láser multifotónico | Olympus FV1000MPE | ||
| Jeringa NanoFil 10 μ l | WPI | NANOFIL | Jeringa Hamilton |
| Hisopos no tejidos 5 x 5 | Molnlycke Health Care | Mesoft | Tampones quirúrgicos |
| Pegamento poliacrílico | Henkel | Loctite 401 | |
| Cubreobjetos de vidrio redondos | Ciencias de la Microscopía Electrónica 1,5 | ||
| espesor | |||
| Instrumento estereotáxico para pequeños animales | David Kopf Instruments | 900 | |
| Adaptador para ratón Stoelting y rata neonatal | Stoelting | 51625 | Montado sobre instrumento estereotáxico. |
| Tijeras de iris para estudiantes, rectas 11,5 cm | FST | 91460-11 | |
| Sulforhodamina 101 | Sondas moleculares | S-359 | |
| Bomba de microjeringa UMP3 y Micro 4 controlador de bomba de microjeringa | WPI | UMP3-1 | Microinyector y controlador |
| Xilacina | Bayer Health Care | Rompun vet |
Referencias
- Lighthall, J. W. Controlled cortical impact: A new experimental brain injury model. J. Neurotrauma. 5 (1), 1-15 (1988).
- Lindgren, S., Rinder, L. Experimental studies in head injury. Biophysik. 2 (5), 320-329 (1965).
- Shreiber, D. I., et al.
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Reimpresiones y permisos
