El trasplante de la cola de la piel para el Estudio alogénico de células T CD4 respuestas en ratones

Resumen

El trasplante de piel de cola es un poderoso modelo para estudiar el rechazo dependiente de las células T y la inducción de tolerancia durante las respuestas inmunes alogénicas en ratones. Las ventajas de este protocolo son la cirugía invasiva menor y la facilidad de seguimiento sin necesidad de sacrificar el ratón receptor.

Resumen

El estudio de las respuestas de los linfocitos T y sus consecuencias durante el reconocimiento de aloantígenos requiere un modelo que permita distinguir entre linfocitos T donantes y huéspedes, monitorizar fácilmente el injerto y adaptar el sistema para responder a diferentes preguntas inmunológicas. Medawar y sus colegas establecieron el trasplante alogénico de piel de cola en ratones en 1955. Desde entonces, el modelo de trasplante de piel se ha modificado y adaptado continuamente para responder a preguntas específicas. El uso de la piel de la cola hace que este modelo sea fácil de puntuar para el rechazo del injerto, no requiere una preparación extensa ni anestesia profunda, es aplicable a animales de todos los antecedentes genéticos, desalienta la necrosis isquémica y permite la intervención química y biológica.

En general, tanto los linfocitos T alogénicos CD4⁺ como los CD8⁺ son responsables del rechazo de los aloinjertos, ya que reconocen antígenos principales de histocompatibilidad no coincidentes de diferentes cepas de ratones. Se han descrito varios modelos para la activación de células T alogénicas en ratones trasplantados con piel. La identificación de moléculas de clase I y II del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) en diferentes cepas de ratones, incluidos los ratones C57BL/6, fue un paso importante hacia la comprensión y el estudio de las alorespuestas mediadas por células T. En el modelo de trasplante de piel de cola descrito aquí, una mutación de tres puntos (I-A^bm12) en el surco presentador de antígeno de la molécula MHC-clase II (^{I-A b}) es suficiente para inducir una fuerte activación alogénica de las células T CD4⁺ en ratones C57BL/6. Los injertos de piel de ratones I-A^bm12 en ratones C57BL/6 se rechazan en un plazo de 12 a 15 días, mientras que los injertos singénicos se aceptan durante un máximo de 100 días. La ausencia de linfocitos T (ratones CD3^-/- y Rag2^-/-) permite la aceptación del injerto de piel hasta 100 días, que puede superarse mediante la transferencia de 2 x 10^{4 linfocitos} T de tipo salvaje o transgénicos. Las células T transferidas adoptivamente proliferan y producen IFN-γ en ratones Rag2^-/- trasplantados con i-A^bm12.

Introducción

El trasplante de órganos sólidos, como la piel, el corazón y los riñones es ahora un procedimiento estándar en la práctica médica en todo el mundo ^1. Órganos trasplantados con éxito pueden ser rechazadas por la activación del sistema inmune receptor, que reconoce los antígenos principales de histocompatibilidad del donante. Por lo tanto los pacientes transplantados necesitan tratamiento con medicamentos inmunosupresores ^2. El trasplante alogénico de piel en ratones fue establecido por Medawar y sus colegas en 1955 y ha sido útil para la identificación de las moléculas específicas que se describen más adelante como complejo mayor de histocompatib....

Protocolo

En esta publicación, el vídeo y el protocolo, se llevaron a cabo todos los procedimientos con animales de acuerdo con el protocolo de los animales aprobado por la autoridad cantonal de Basilea-Ciudad, Suiza. Realice todos los procedimientos en condiciones de esterilidad, cuando sea posible.

1. Preparación de Cirugía

1. Autoclave todos los instrumentos quirúrgicos y gasas antes de su uso.
2. Calentar la almohadilla caliente y organizar los instrumentos quirúrgicos en la tabla (Tabla de Materiales / Métodos).
3. Abra las vendas de la tira dedo. Aplique vaselina en la plataforma de la herida con un algo....

Resultados

En una primera aproximación C57BL / 6 ratones fueron trasplantados con aloinjertos ^{BM12, los cuales} IA y ^b syngrafts IA. Después de retirar el vendaje, injertos signos manifiestos de la cicatrización de heridas y sin cierre de la zona de contacto en C57BL / 6 ratones (Figura 1A). Después de la retirada del vendaje, CD4 ⁺ T inflamación mediada por células condujo a la aparición de áreas necróticas (manchas rojas) y el rechazo de aloinjertos ^{BM12, los cuales} IA .......

Discusión

Trasplante de la piel es un método ampliamente utilizado para el estudio de rechazo y dependiente de las células T de la tolerancia. Desde que se estableció el modelo de trasplante de piel, se han aplicado varias adaptaciones y cambios. En el procedimiento descrito, IA ^BM12 trasplante de cola de piel se realiza con gas anestésico (isofluorano). El uso de la anestesia con gas reduce el tiempo de ejecución y la recuperación de los ratones, lo que disminuye la presión sobre los ratones trasplantados. El procedim.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Betadine solución estándar	Mundipharma
Hisopo de algodón	Carl Roth GmbH	31025060
Dafalgan , UPSA	Bristol Myers Squibb UPSA
Tiras de dedo Hansaplast	Beierdorf AG	REF.76861
Histoacryl adhesivo para tejidos	Braun	REF.1050052
Leukotape classic , 2 cm x 10 m	BSN Medical SAS	REF.02204-00
PBS, Solución salina tamponada con fosfato, pH 7,4	Invitrogen	10010015	GIBCO
Gasa estéril, 5 x 5 cm, 8 capas	MaiMed GmbH	21010
Pinza de patrón estrecho	FST	11003-12
Tijera de iris fina curvada	FST	14095-11
Tijera de iris	fina FST	14094-11
Tijeras de mayonesa	FST	14010-15
Tijeras de arteria punta de bola 11,5 cm	FST	14080-11
Pinza de tejido	FST	11021-14
Cuchilla quirúrgica n.º 20	Swann-Morton LTD	3006	Acero al carbono
Mangos de cuchilla quirúrgica	Swann-Morton LTD
Jeringa, 1 ml	ARTSANA		Temgesic Desechable
, buprenorfina	ESSEX Chemie AG		0,3 mg/ml
Placas de cultivo de tejidos 10 cm, 60,1 cm2	TPP
Vaselina	Vifor SA
Almohadilla caliente	Solis		Tipo 223