Las inyecciones intravenosas en ratones recién nacidos

Resumen

Los modelos animales de enfermedad pediátrica pueden experimentar aparición temprana y progresión de la enfermedad agresiva. Clínicamente entrega terapia pertinente a jóvenes modelos de ratón puede ser técnicamente difícil. Este protocolo describe un método de inyección intravenosa no invasivo para ratones recién nacidos dentro de los dos primeros días después del parto de la vida.

Resumen

La inyección intravenosa es una forma clínicamente aplicable para entregar agentes terapéuticos. Para roedores adultos y los animales más grandes, las inyecciones intravenosas son técnicamente viables y la rutina. Sin embargo, algunos modelos de ratones puede tener la aparición temprana de la enfermedad con una progresión rápida que hace que la administración de terapias potenciales difícil. La vena temporal (o facial) está justo anterior a la brote del oído en ratones y es claramente visible durante los dos primeros días después del nacimiento a cada lado de la cabeza utilizando un microscopio de disección. Durante esta ventana, la vena temporal puede ser inyectado con volúmenes de hasta 50 l. La inyección es segura y bien tolerada tanto por los cachorros y las presas. Un procedimiento de inyección típico se completa en 1-2 min, después de lo cual el cachorro es devuelto a la jaula de alojamiento. Al tercer día después del parto la vena es difícil de visualizar y el procedimiento de inyección se convierte técnicamente confiables. Esta técnica se ha utilizado para la entrega de virus adeno-asociado (AAV) vectORS, que a su vez pueden proporcionar casi en todo el cuerpo, la expresión transgénica estable para la vida del animal dependiendo del serotipo viral elegido.

Introducción

Entrega de la terapéutica en el sistema nervioso central (SNC) en modelos murinos de enfermedad pediátrica sigue siendo un reto. Los ratones que estados de enfermedad recién nacidos modelo son de tamaño insuficiente y el desarrollo inmaduro, y por lo tanto puede ser difícil de inyectar directamente en estructuras adecuadas en el SNC. Inyección intravascular de agentes terapéuticos es un método no invasivo, bien tolerado para entregar las células, fármacos, o vectores virales para todo el cuerpo, incluyendo el SNC y la retina ^{1-5 3,5-9.} Publicaciones anteriores describen temporal inyección en la vena cara usando un transiluminador ^10,11, sin un m....

Protocolo

Todos los procedimientos que figuran en el protocolo han sido aprobados Instituto de Uso de Animales y el comité de Atención (IACUC) de la Universidad Estatal de Ohio.

1. Preparación del espacio de trabajo

1. Reunir hielo húmedo para anestesiar a las crías de ratón, una jaula vacía para segregar la presa de la litera, un microscopio de disección, una fuente de luz que se puede colocar en un ángulo a la inyección (uso de una fuente de luz en un 90 °   ángulo con el sitio de la inyección oscurece la vena), una superficie limpia para colocar el animal para la inyección, hisopos de algodón, 3/10 cc jeringa de insulina ....

Resultados

Durante una inyección adecuada, la vena debe girar momentáneamente claro, o blanquear. Si la inyección de teñir todo el cachorro debe ponerse azul en cuestión de segundos. Si se ha producido una inyección inadecuada, a menudo hay un bolo subcutáneo concentrada en la cabeza o el cuello y inyectante puede salirse del sitio de inyección. Inyecciones inapropiadas también pueden dar lugar a la aparición de moretones alrededor de la garganta. Los cachorros que reciben inyecciones subcutáneas (es decir, la inyección n.......

Discusión

Entrega intravascular de agentes para el SNC o en todo el cuerpo es difícil en modelos murinos neonatales de la enfermedad. El protocolo descrito es una forma rápida, relativamente no invasiva para administrar por vía intravenosa soluciones en ratones recién nacidos con los requisitos mínimos de equipamiento. Aunque la vena cara temporal puede ser visto por el ojo desnudo, las inyecciones pueden tener una mayor precisión con el uso del microscopio y fuente de luz de fibra óptica, especialmente para un inyector sin práct.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Jeringa de insulina Thinpro	Terumo	SS30M3009	3/10 cc, aguja de 3/8", 30 G, 1 por ratón
Tinte azul Evans	Sigma-Aldrich	E2129	Diluir al 1% con 1x Solución salina tamponada con fosfato
Aplicadores con punta de algodón	Fisher Scientific	23-400-101
Fuente de luz de fibra óptica	Fisher Scientific	12-562-36
Disección microscopio