Artículo de método

Técnica mínimamente invasiva para la inyección en nervio óptico de la rata

DOI:

10.3791/52249

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19 de mayo de 2015

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1Department of Neurology, Johns Hopkins University

En este artículo

Resumen

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La inyección directa en el nervio óptico de la rata es útil para la investigación regenerativa. Demostramos una técnica mínimamente invasiva para la inyección directa en el nervio óptico de una rata que no implica abrir el cráneo. Con este método, las complicaciones quirúrgicas se minimizan y la recuperación es más rápida.

Resumen

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El nervio óptico de la rata es un modelo útil para la investigación de la regeneración de células madre. La inyección directa en el nervio óptico de la rata permite la administración en el sistema nervioso central en una cirugía mínimamente invasiva sin extirpación ósea. Esta técnica describe un enfoque para la visualización y la inyección directa del nervio óptico después de una disección fascial menor de la cresta orbitaria, utilizando una sutura de tracción conjuntival para tirar suavemente del ojo hacia abajo y hacia afuera. Ejemplos representativos de un nervio óptico inyectado muestran la inyección exitosa de cuentas teñidas.

Introducción

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El nervio óptico es un lugar ideal para el sistema nervioso central (SNC) la investigación regenerativa incluyendo condiciones oftalmológicas tales como neuritis óptica, glaucoma y el trauma. Las inyecciones de una variedad de células madre han demostrado la eficacia o mostrado promesa en la sustitución de la mielina perdida, aumentar el conteo de axonal y / o la prevención de enfermedades degenerativas. 1,2

El nervio óptico humano contiene aproximadamente 1,2 millones de axones paralelas que viajan desde la retina hasta el quiasma con un diámetro de aproximadamente 3,0-3,5 mm. 3 Para modelar enfermedades humanas en ....

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Protocolo

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NOTA: Todos los animales procedimientos fueron aprobados por el Comité de Cuidado de Animales y el empleo de Johns Hopkins. Máquinas de anestesia requieren inspección anual y calibración según sea necesario.

1. Anestesia y Posicionamiento

  1. Anestesia.
    1. Realizar todos los procedimientos quirúrgicos con anestesia con isofluorano 2-3%. Confirmar nivel adecuado de anestesia por pizca dedo del pie y ritmo respiratorio. Compruebe que la rata no se inmuta en respuesta a una pizca dedo del pie.
      NOTA: Un estremecimiento indica la anestesia que es demasiado tarde y puede requerir anestesia más largos antes de comenzar o una concentración isofluo....

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Resultados

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A la conclusión del experimento, las ratas se sacrificaron y se perfundieron con 4% de paraformaldehído. Los nervios ópticos fueron cuidadosamente disecados y montados para seccionamiento criostato. La figura 2 muestra un ejemplo de un nervio óptico de rata entero a baja potencia en el que se inyectó colorante azul de Evans con el fin de visualizar el sitio. La flecha identifica la ubicación precisa de la inyección. Esta disección se realiza dentro de unos pocos minutos de la inyección, como se indica p.......

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Discusión

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La inyección directa en el nervio óptico de células madre u otros productos destinados a facilitar la regeneración proporciona un modelo conveniente en comparación con otros medios de inyección en el SNC. Esta técnica lleva menos tiempo, requiere menos anestesia total, evita perforar o extirpar tejido craneal o óseo, reduce las tasas de complicaciones y permite una recuperación más rápida después de la cirugía.

Los pasos más críticos de este protocolo incluyen: 1. Hemostasia adecuada en el ca.......

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Divulgaciones

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Los autores no tienen divulgaciones significativas que informar.

Agradecimientos

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Este estudio fue apoyado por NeuralStem, Inc., y Johns Hopkins Project RESTORE.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Rata de LewisCharles River4Cualquier cepa de rata funcionará.
Máquina de anestesiaSurgivetCDS9000CDS 9000 Máquina de anestesia para animales pequeños - Montaje en poste
Bomba de infusiónStoelting53129
Microscopio de disecciónNational Optical409-411-1105
Fuente de luz de fibra ópticaFisher Scientific12-562-21
Disección y almacenamientode instrumentos estereotáxicos51400
Extractor de pipetasKopf750
PipetasWorld Precision Instruments18150-6
Hojas de bisturí desechablesHarvard Apparatus810-15-021
Tijeras de iridectomíaCiencias de la Microscopía Electrónica UnibandaLA-4XF

Referencias

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  1. Dahlmann-Noor, A., Vijay, S., Jayaram, H., Limb, A., Khaw, P. T. Current approaches and future prospects for stem cell rescue and regeneration of the retina and optic nerve. Canadian journal of ophthalmology Journal canadien d'ophtalmologie. 45 (4), 333-341 (2010).
  2. Quigley, H. A., Iglesia, D. S.

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