Murino Aislado Modelo Corazón de aturdimiento miocárdico asociado a paro cardioplégico

Resumen

El objetivo de este protocolo es evaluar el aturdimiento miocárdico tras un paro cardiopléjico isquémico en roedores.

Resumen

El siguiente protocolo es de utilidad para evaluar la función cardiaca deteriorada o elevando insultos isquémicos moderados miocardio. La técnica es útil para el modelado de la lesión isquémica asociada con numerosas fenómeno clínicamente relevante, incluyendo cirugía cardíaca con parada cardiopléjica y bypass cardiopulmonar, la cirugía sin CEC, trasplante, angina, isquemia breve, etc. El protocolo presenta un método general para modelar hipotermia arresto cardioplégica hipercaliémica y reperfusión en los corazones de roedores que se centran en la medición de la función contráctil del miocardio. En resumen, un corazón de ratón se perfunde en el modo de Langendorff, equipado con un globo intraventricular, y se registran los parámetros funcionales cardíacos iniciales. Tras la estabilización, el corazón se somete a breves infusión de una solución de cardioplejía hipotermia cardioprotector para iniciar arresto diastólica. Cardioplegia se entrega de forma intermitente durante 2 horas. El corazón está entonces reperfundido y Warmed para las temperaturas y la recuperación de la función miocárdica normotérmicos se supervisa. El uso de este protocolo los resultados en función contráctil cardiaca deprimida confiable libres de daño en el tejido miocárdico bruto en roedores.

Introducción

Aturdimiento miocárdico se define como reversible reducción de la actividad contráctil a pesar de la restauración del flujo sanguíneo adecuado después de un breve período de isquemia o períodos prolongados de insultos isquémicos con ^1,2,3,4,5 cardioprotección. El método presentado se utiliza específicamente para modelar insultos isquémicos clínicamente relevantes que pueden resultar en alteraciones reversibles en la función contráctil (es decir, los insultos isquémicos asociados con la cirugía cardíaca utilizando parada cardiopléjica, breves períodos de isquemia, angina de pecho, etc.). En contraste con los estudios de isquemia grave (inf....

Protocolo

NOTA: Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité Institucional Animal Vida útil Cuidado y Uso y todos los animales y los procedimientos de acuerdo con la Guía Nacional Research Council para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio ^10.

1. Fabricación Globo y Presión ventricular izquierda Monitoreo del Circuito

1. Construya globos LV según Miller et al. ¹¹ En un vaso de precipitados con una barra de agitación, mezcla 9,5 ml de agua destilada, 14,2 ml de jarabe de maíz de luz y 33,8 g de sacarosa, y el calor en un plato caliente, mezclar hasta que se disuelva el azúcar . Continuar soluci....

Resultados

La Figura 1 presenta los resultados típicos de un experimento del ratón. LVP (línea roja), dP / dt (línea verde), y la temperatura (línea morada) se registraron continusouly sobre ~ 3 horas. Las letras indican a - medida de referencia, b, c, d, e - la entrega de la solución de cardioplejía, f - inicio de la reperfusión, g, h, i, j - medición de flujo cornary durante la reperfusión. Nota, LVDP deprimido y dP / dt en la reperfusión en comparación con la línea base. Figura 1B incluye los d.......

Discusión

Los métodos de detalles de protocolo precedentes para evaluar el aturdimiento miocárdico secundaria a isquemia global asociado con parada cardiopléjica. En nuestras manos este protocolo produce una reducción aproximada del ~ 40% de la función cardíaca (LVDP, +/- dP / dt) con cambios mínimos en la frecuencia cardíaca en el punto de tiempo posterior a la reperfusión 30 min. A medida que el corazón está reperfunde y recalentado todos los parámetros de la función cardíaca se reducen en los puntos iniciales de tiempo con una.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Solución para cardioplejia (Santo Tomás II)			Símbolo / Concentraciones (mM)
Cloruro de			NaCl; 110
Cloruro de			KCl; 16
Cloruro de			CaCL2; 1,5
Cloruro de magnesio	MgCL2; 16
		sodio	NaHCO3; 10
			Krebs-Heinslet
Cloruro de			NaCl; 118
Cloruro de potasio	KCl; 4,8
			MgSO4; 1,7
Bicarbonato			NaHCO3; 24,9
Fosfato de potasio (monobásico)			KH2PO4; 1,2
Cloruro de calcio	CaCL2; 1.4
horno de laboratorio/incubadora ( 50C)
			perfusión Langendorff
Sistema cardíaco perfundido aislado (IH-SR (Hugo-Sachs) o equivalente)
Sistema de adquisición de datos (DSI, ADinstruments o equivalente)
Circulador
Circulador
Bomba de perfusión capaz de 2-30 ml/min
Filtros de perfusión en línea - 1 mmm de fibra
Sensores y amplificadores de presión para LVP y presión
Pequeño cilindro graduado (~10 mL)
Pequeña sonda de temperatura y termómetro (Werner o equivalente)
resevoir de perfusión (1L)
resevoir de cardioplejia (~200 mL)
burbujeador
95/5 Mezcla
Herramientas y reactivos
quirúrgicos Tijeras quirúrgicas
dos pinzas
ketamina
xilacina
heparina
pinza pequeña con lados blandos para sujetar la aorta (es decir, pinza terminal con extremos sellados)
Suturas

sodio potasio calcio Bicarbonato deTampón sodio Sulfato de magnesio de sodio Piruvato de sodio Na piruvato; 2 Glucosa C6H12O6; 6 Reactivos de balón Jarabe de maíz Dispersión de espagueti de silicona Gel bloque de espuma de poliestireno Equipo de de agua calentadade agua de refrigeraciónde vidriode perfusiónde gasde O2/CO2 Metzenbaum y PotzDumont tamaño 5 de seda 2-0 y 4-0