Contrast Enhanced Ultrasound Imaging es una herramienta in vivo fiable para cuantificar el flujo sanguíneo de la médula espinal en un modelo experimental de lesión de la médula espinal en ratas. Este artículo contiene un protocolo completo para la aplicación de esta técnica en asociación con un modelo de contusión de la lesión medular torácica.
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Artículo de método
Contraste mejorado las imágenes por ultrasonido para la Evaluación de la Médula Espinal flujo sanguíneo en Experimental Spinal Cord Injury
En este artículo
Resumen
Resumen
Flujo reducido de sangre de la médula espinal (SCPF) (es decir, isquemia) desempeña un papel clave en la lesión medular traumática (SCI) fisiopatología y en consecuencia es un objetivo importante para las terapias neuroprotectoras. Aunque varias técnicas se han descrito para evaluar SCPF, todos ellos tienen limitaciones significativas. Para superar este último, se propone la utilización de imágenes de contraste mejorado de ultrasonido en tiempo real (CEU). Aquí se describe la aplicación de esta técnica en un modelo de rata de la contusión SCI. Un catéter yugular se implanta primero para la inyección repetida de agente de contraste, una solución de cloruro de sodio de hexafluoruro de azufre microburbujas encapsuladas. La columna vertebral se estabiliza luego con un 3D-marco a medida y la médula espinal duramadre está expuesto por una laminectomía en Thix-ThXII. La sonda de ultrasonido se coloca entonces en el aspecto posterior de la duramadre (recubierta con gel de ultrasonido). Para evaluar SCPF línea de base, una sola inyección intravenosa (400 l) de contraagente st se aplica para registrar su paso a través de la microvasculatura de la médula espinal intacta. Un dispositivo de peso soltar se utiliza posteriormente para generar un modelo experimental reproducible contusión de SCI. Agente de contraste se re-inyecta 15 min después de la lesión para evaluar los cambios post-SCI SCPF. CEU permite en tiempo real e in-vivo evaluación de los cambios SCPF siguiente SCI. En el animal está sano, la ecografía mostró flujo sanguíneo irregular a lo largo de la médula espinal intacta. Además, 15 min después de la SCI, hubo isquemia crítica en el nivel del epicentro SCPF mientras permaneció conserva en las zonas más remotas intacto. En las regiones adyacentes al epicentro (tanto rostral y caudal), SCPF se redujo significativamente. Esto corresponde a la descrita previamente "zona de penumbra isquémica". Esta herramienta es de gran interés para la evaluación de los efectos de las terapias destinadas a limitar la isquemia y la necrosis tisular resultante después de la SCI.
Introducción
Lesión medular traumática (SCI) es una enfermedad devastadora que conduce a un deterioro significativo de motor, sensorial y funciones autónomas. Hasta la fecha, ninguna terapia ha demostrado su eficacia en los pacientes. Por tal razón, es importante identificar las nuevas técnicas que mejoren la evaluación de los posibles tratamientos y puede aclarar aún más pathiophysiology lesiones 1.
SCI se divide en dos fases secuenciales, que se refiere a las lesiones como primarios y secundarios. La lesión primaria corresponde al insulto mecánica inicial. Considerando que los grupos de lesiones secundarias una cascada de varios eventos b....
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Protocolo
NOTA: Los procedimientos descritos en este manuscrito fueron aprobados por el Comité de Bioética de la Facultad de Medicina de Lariboisière, París, Francia (CEEALV / 2011-08-01).
1. Preparación de instrumentos
- Preparar y limpiar los siguientes instrumentos para la inserción del catéter: micro-micro-pinzas, tijeras, pinza microvascular, grandes tijeras, hilo quirúrgico (seda trenzada Negro 4-0) y un catéter 14 G. Heparinizar el catéter con una solución de heparina (5.000 U / ml).
- Preparar y limpiar los siguientes instrumentos para la laminectomía: grandes tijeras, bisturí y un cortador de hueso. Realizar laminectomía c....
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Resultados
Con el protocolo descrito anteriormente, es posible mapear la SCPF a lo largo de un segmento de médula espinal sagital longitudinal.
En la médula espinal intacta, no parece haber irregularidades SCPF dentro del parénquima (Figura 12). Esto se puede explicar por la distribución variable de las arterias-radiculo medular (RMA) de un animal a otro. RMA se refiere a segmentaria arterias que llegan a la arteria espinal anterior (ASA) y por lo tanto proporcionan el suministro de sa.......
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Discusión
Aunque hemos descrito cómo utilizar CEU en un modelo de rata contusión SCI, este protocolo puede ser modificado para adaptarse a otros objetivos experimentales o modelos SCI. Hemos elegido para medir SCPF a sólo dos puntos de tiempo (antes de la lesión y 15 minutos después de la SCI), sin embargo el número de puntos de tiempo y el retraso entre las medidas SCPF se pueden adaptar para satisfacer las necesidades de los otros estudios. Por ejemplo, en nuestro trabajo anterior 17, hemos medido SCPF en cinco punto.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen ningún conflicto de intereses financieros en competencia. La máquina de ultrasonido fue prestada gentilmente por la compañía Toshiba France. La bomba Vueject fue prestada gentilmente por la empresa Bracco France.
Agradecimientos
Agradecemos a Stephanie Gorgeard, Thierry Scheerlink (Toshiba Francia) y Christophe Lazare (Bracco Francia).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Fijador externo Hoffman 3 | Stryker, Kalamazoo, EE. UU. | Sistema modular utilizado para construir el marco 3D hecho a medida y el brazo articulado que sostiene la sonda de ultrasonido | |
| Toshiba Applio | Toshiba, Tokio, Japón | Ecógrafo | |
| Sonovue | Bracco, Milán, Italia | Agente de contraste : microburbujas | |
| Bomba Vueject | Bracco, Milán, Italia | Bomba eléctrica para infusión de microburbujas en bolo | |
| Aquasonic Gel de ultrasonido | Parker Laboratories, Fairfield, NJ, EE. UU. | Gel de ultrasonido utilizado para transmitir las ondas de ultrasonido | |
| Isovet | Piramal Healthcare, Mumbai, India | Isoflurano utilizado para la anestesia | |
| Ultra Extend | Toshiba, Tokio, Japón | Software utilizado para la cuantificación del flujo | |
| sanguíneo de la médula espinalJuego de mini-alicates de cinco piezas Mastercraft, producto #58-4788-6 | Canadian Tire, Toronto, Canadá | Juego de alicates para trabajos de bricolaje |
Referencias
- Cadotte, D. W., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: a systematic review of current treatment options. Clin Orthop Relat Res. 469 (3), 732-741 (2011).
- Beattie, M. S., Farooqui, A. A., Bresnahan, J. C. Review of current evidence for apoptosis after spinal cord injury. <....
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Reimpresiones y permisos
