Visualización de<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Dentro cardíacos microlesiones y la remodelación cardiaca posterior

Resumen

Streptococcus pneumoniae forma lesiones microscópicas discretas no purulentas en el corazón. Se describe el protocolo para un modelo murino de formación de microlesiones cardíacas. Se proporciona instrucción sobre la visualización de microlesiones mediante microscopía, la discriminación entre microlesiones tempranas y tardías, y los métodos para detectar la remodelación cardíaca en el corazón de los animales convalecientes.

Resumen

Durante bacteriemia Streptococcus pneumoniae puede trasladar a través del endotelio vascular en el miocardio y formar bacterias llenos discretas lesiones microscópicas (microlesiones) que son notable debido a la ausencia de la infiltración de células inmunes. Debido a su liberación de productos cardiotóxicos, S. pneumoniae dentro microlesiones se cree que contribuyen a la insuficiencia cardíaca que se observa con frecuencia durante la enfermedad neumocócica invasiva fulminante en adultos. En esto se demuestra un protocolo para la infección experimental de ratón que lleva a la formación reproducible microlesión cardíaco dentro de 30 horas. La instrucción es proporcionada en la identificación microlesión en hematoxilina y eosina secciones de corazón de colores y las distinciones morfológicas entre microlesiones principios y finales se destacan. La instrucción es proporcionada en un protocolo para la verificación de S. pneumoniae dentro microlesiones utilizando anticuerpos contra el polisacárido capsular de neumococo ymicroscopía de inmunofluorescencia. Por último, se proporciona un protocolo de intervención antibiótico que rescata los ratones infectados y para la detección y evaluación de la formación de cicatrices en los corazones de los ratones convalecientes. Juntos, estos protocolos facilitar la investigación de los mecanismos moleculares que subyacen a la invasión cardiaca neumocócica, muerte de los cardiomiocitos, la remodelación cardiaca como resultado de la exposición a S. pneumoniae, y la respuesta inmune a los neumococos en el corazón.

Introducción

La hospitalización de adultos para la neumonía adquirida en la comunidad (NAC) conlleva un riesgo documentado de eventos cardiacos adversos que contribuyen a la mortalidad ^1-4. En un estudio reciente de Corrales-Medina et al. Se encontraron complicaciones cardíacas que se asocia con y / o responsable del 27% de las muertes por neumonía asociada a ^3. Streptococcus pneumoniae (neumococo), la causa más común de la PAC y la sepsis ^5, se ha asociado directamente con eventos cardíacos adversos en hasta el 19% de los pacientes adultos ingresados ^​​6. Eventos cardíacos adversos asociados con la neumonía son la ins....

Protocolo

NOTA: Todos los experimentos con ratones fueron revisados ​​y aprobados por los Comités Use y Cuidado de Animales Institucional de la Universidad de Texas Health Science Center en San Antonio (protocolo # 13032-34-01C). Cuidado de los animales y los protocolos experimentales se adhirieron a la Ley Pública 89-544 (Ley de Protección de los Animales) y sus modificaciones, directrices servicios de salud pública, y la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (Departamento de Salud y Servicios Humanos de Estados Unidos).

1. Infección

1. Obtener ratones BALB / c de ambos sexos entre las edades de 10 a 12 semanas de edad.

Resultados

Visualización de microlesiones por H & E

Se observaron microlesiones cardíacos en los ventrículos del H & E manchadas secciones cardíacas de ratones con IPD tras su desafío ip con TIGR4. La Figura 1 muestra el aumento en el tamaño de estas lesiones entre 24 y 30 horas después de la infección (hpi), con un mayor número de hematoxilina teñidas (es decir, púrpura-azul) neumococos visible dentro de la lesión. Microlesiones se caracterizaron por una morf.......

Discusión

En este informe, un método altamente reproducible para inducir S. pneumoniae mediada microlesiones cardíacas en ratones durante IPD y las técnicas para su visualización se demuestra. Los ratones se infectan con una dosis de bacterias que supera el umbral del sistema inmune para el despacho, dando lugar a bacteremia de alto grado, similar a la que ocurre durante la sepsis humana, y conduce a la translocación bacteriana eventual en el miocardio. Por razones aún desconocidas, S. pneumoniae en el corazón e.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Caldo Todd-Hewitt	Compuesto	Neogen 7161A
O.C.T	Tissue-Tek (Sakura Finetek)	4583
Tritón X-100	Fisher Scientific (Acros)	9002-93-1
Suero de cabra normal	Abcam	ab7481
anti-serotipo 4 antisuero antineumococo	Statens Serum Institut	16747
anticuerpo conjugado FITC anti-conejo de cabra	Jackson ImmunoResearch	111-096-144
DAPI	Invitrogen	D1306
Fluorsave	Millipore	345789
Permount	Fisher Scientific	S70104
Ampicillin	Sigma	A9393
ácido fosfomolíbdico 0.2%	Ciencias de Microscopía Electrónica	26357-01
0.1% Rojo Sirio en ácido pícrico	Ciencias de la Microscopía Electrónica	26357-02
Ácido clorhídrico 0.01 N	Ciencias de la microscopía electrónica	26357-03
Portaobjetos de microscopio de tachuela	de tejido Polysciences, Inc	24216
Ungüento veterinario Paralube	Dechra	12920060
Kit de tinción de hematoxilina y eosina	sin especificar		estándar