Generación de linfocítica micropartículas y detección de su efecto proapoptótico sobre las células epiteliales de la vía aérea

Chun Yang; Wei Xiong; Qian Qiu; Houda Tahiri; Carmen Gagnon; Guoxiang Liu; Pierre Hardy

doi:10.3791/52651

Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Generación de linfocítica micropartículas y detección de su efecto proapoptótico sobre las células epiteliales de la vía aérea

8.8K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/52651

⸱

20 de febrero de 2015

Chun Yang^*¹ , Wei Xiong^*² , Qian Qiu² , Houda Tahiri¹ , Carmen Gagnon¹ , Guoxiang Liu² , Pierre Hardy¹

¹Departments of Pediatrics and Pharmacology, University of Montréal, ²Department of Pulmonology, Chongqing Southwest Hospital, Third Military Medical University

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Micropartículas membrana arrojar celulares (MPs) son vesículas biológicas activas que pueden ser aislados y sus efectos fisiopatológicos investigados en varios modelos. Aquí se describe un método para generar MPs derivadas de los linfocitos T (LMP) y para demostrar su efecto proapoptótico en células epiteliales de las vías respiratorias.

Resumen

El interés en las funciones biológicas de las vesículas de membrana derivadas de células en la comunicación celular se ha incrementado en los últimos años. Las micropartículas (MP) son un tal tipo de vesículas, que varían en diámetro desde 0,1 m a 1 m, y normalmente se desprenden de la membrana plasmática de las células eucariotas se someten a la activación o la apoptosis. Aquí se describe la generación de linfocitos T derivados de micropartículas (LMP) a partir de células CEM T apoptóticas estimulados con actinomicina D. LMP están aisladas a través de un proceso de centrifugación diferencial de varios pasos y que se caracteriza por citometría de flujo. Este protocolo también presenta un método de detección in situ la muerte celular para demostrar el efecto proapoptótico de LMP en las células epiteliales bronquiales derivados de ratón explantes de tejidos bronquiales respiratorias primarias. Los métodos descritos en este documento proporcionan un procedimiento reproducible para el aislamiento de cantidades abundantes de LMP a partir de linfocitos apoptóticos in vitro. LMP derivade esta manera se puede utilizar para evaluar las características de varios modelos de enfermedad, y para la farmacología y pruebas de toxicología. Dado que el epitelio de la vía aérea ofrece una barrera física y funcional de protección entre el ambiente externo y el tejido subyacente, el uso de explantes de tejidos bronquiales en lugar de líneas de células epiteliales inmortalizadas ofrece un modelo eficaz para investigaciones que requieran tejido del tracto de las vías respiratorias.

Introducción

Las micropartículas (MP) son vesículas de membrana submicrónicas biológicamente activas que se liberan tras la activación celular o la apoptosis. Los MP se derivan tanto de células sanas como dañadas y están implicados en muchos procesos fisiológicos y patológicos. ¹ Se han detectado MP no solo en plasma humano, sino también en tejido inflamatorio y apoptótico. La utilidad biológica de los MP derivados de la membrana celular se ha demostrado en diversos entornos, incluidos los modelos de señalización celular y como herramientas farmacológicas. ^2,3 Previamente demostramos que las LMPs derivadas de los linfocitos T tras la estimulación de la actino....