Aquí se describe el método para establecer un modelo de ratón singénico de tumor ortotópico de vejiga para evaluar la eficacia antitumoral de la proteína bacteriana HP-NAP.
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Artículo de método
Evaluación de la eficacia de la
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Resumen
Resumen
El cáncer de vejiga es una de las neoplasias malignas más comunes del tracto urogenital. La inyección intravesical de bacilo de Calmette-Guérin (BCG) es el tratamiento de referencia para el cáncer de vejiga no músculo invasivo de alto grado (NMIBC). Sin embargo, dado que los efectos secundarios relacionados con el tratamiento son relevantes, se necesitan nuevos modificadores de la respuesta biológica con una mejor relación beneficio/efectos secundarios.
El microambiente tumoral puede influir tanto en el desarrollo del tumor como en la eficacia de la terapia. Para obtener un buen modelo, es conveniente implantar células tumorales en el órgano del que se origina el cáncer.
En este protocolo, describimos un método para establecer un tumor en la cavidad vesical de ratones hembra y la posterior administración de agentes terapéuticos; estos últimos se ejemplifican con nuestro uso de la proteína activadora de neutrófilos Helicobacter pylori (HP-NAP). Una quemadura química preliminar de la mucosa, seguida de la inyección de la línea celular de carcinoma urotelial de ratón MB49 mediante cateterismo uretral, permite que las células se adhieran a la mucosa vesical. Después de un período, necesario para permitir una proliferación inicial de las células, los ratones son tratados con HP-NAP, administrado de nuevo mediante cateterismo. La actividad antitumoral de HP-NAP se evalúa comparando el volumen tumoral, la extensión de la necrosis y el grado de vascularización entre los animales tratados con vehículo y HP-NAP.
Introducción
El cáncer de vejiga es uno de los cánceres más comunes del tracto urogenital, con cerca de 75.000 nuevos casos cada año en los EE.UU. 1. Las altas tasas de recurrencia requieren seguimiento de por vida, lo que hace que el cáncer de vejiga uno de los cánceres más costosas de tratar. El tratamiento estándar de oro para el alto grado CVNMI es la resección transuretral, seguida de inmunoterapia intravesical con BCG. Aunque el mecanismo exacto de la actividad anti-tumor de BCG aún no se ha aclarado completamente, se acepta que la activación de una respuesta inmune mediada por células enriquecido en T helper (Th) 1 y T citotóxicas (Tc) de las células 1 es crucia....
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Protocolo
Todos los procedimientos de manipulación de los animales han sido aprobados por el Ministerio italiano de Salud (204/2011-B DM).
1. Los animales
- Crecer ratones hembras C57BL6 / J a 8 semanas de edad en jaulas ventiladas individualmente con filtros microaislamiento.
Se prefieren las hembras porque la conformación anatómica de su aparato uro-genital externa hace que el cateterismo más fácil que en los hombres: Nota.
2. Cultivo Celular
- Mantener la urotelial ratón línea celular de carcinoma MB49 en medio RPMI 1640 suplementado con 10% de suero bovino fetal inactivado por calor y ....
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Resultados
La Figura 1 muestra la técnica de cateterismo; el ratón se cateterizó y inculca con 0,5 × 10 6 células MB49. El tratamiento con HP-NAP se inicia 3 días después de la inyección de las células tumorales, para que puedan adherirse a la pared de la vejiga y proliferar. Todos los animales pertenecientes al grupo de control se desarrollan el tumor; algunos de ellos pueden morir antes del final del período de 13 días debido a la oclusión de la uretra.
Después de la prime.......
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Discusión
La mayoría de los avances en el tratamiento del cáncer requiere pruebas en modelos animales antes de comenzar los ensayos clínicos. La posibilidad de estudiar la biología del tumor in vivo, aprovechando modelos animales, representa una herramienta fundamental para los investigadores que investigan la patogénesis del cáncer, lo que permite la evaluación de los diferentes enfoques terapéuticos. Modelos ortotópico siguen siendo el estándar de oro 14-15, tanto debido a la enorme cantidad de líneas celula.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro, el Ministerio italiano de la Universidad e Investigación, proyectos Prin y Progetti di Ricerca di Ateneo, conceder N ° CPDA137871, Fondazione Cariplo, concede N ° 2011 hasta 0485 a los BMD, y por Finanziamento Giovani studiosi, Universidad de Padua, a Gaia Codolo.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Materiales | |||
| Ratones hembra C57BL/6J | Harlan Italy (Udine, Italia) | ||
| Células | obtenidas del Prof. O'Donnel, Facultad de Medicina Carver de la Universidad de Iowa, Iowa, EE. UU | ||
| RPMI | Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, EE. UU.) | R8758 | |
| FBS | Sigma-Aldrich | F7524 | |
| PBS | Sigma-Aldrich | D1408 | 10X, para diluir en agua apirógena |
| Matraz | Becton Dickinson (Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE. UU.) | 353135 | |
| Jeringa 1 ml | Becton Dickinson | 301358 | |
| Tripsina | Life Technologies (Waltham, Massachusetts, EE. UU.) | ||
| Gentamicina | Life Technologies | 15710-049 | |
| Xilor | Bio 98 s.r.l. (Milán, Italia) | 2% Xilacina | |
| Zoletil | Virbac (Carros, Francia) | 359713301992 | 5% Zolazepam + 5% Tiletamina |
| Catéter 24G | Terumo (Roma, Italia) | SR+DM2419PX | |
| HCl | Reactivos Carlo Erba (Milán, Italia) | 403871 | NaOH líquido |
| JT Baker (Center Valley, Pensilvania, EE. UU.) | 10095011 | Polvo | |
| Equipo | |||
| Bisturí quirúrgico | Albion Surgical Limited (Sheffield, Inglaterra) | ||
| Microtomo | Leica Microsystem ( Wetzlar, Alemania) | RM2235 | |
| Portaobjetos de microscopio | VWR International (Radnor, Pensilvania, EE. UU.) | 631-0108 | |
| Analizador de imágenes | Zeiss (Jena, Alemania) | Sistema |
Referencias
- Siegel, R., Ma, J., Zou, Z., Cancerstatistics Jemal, A. CA Cancer J Clin. 64, 9-29 (2014).
- Saint, F., et al. Prognostic value of a T helper 1 urinary cytokine response after intravesical bacillus Calmette-Guerin treatment for superficial bladder cancer. J Urol. 167, 364-367 (2002).
- Shahin, O., Thalmann, G. N., Rentsch, C., Mazzucchelli, L., Studer, U. ....
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Reimpresiones y permisos
