Este protocolo describe el radiomarcaje de células madre mesenquimales equinas y su implantación en lesiones tendinosas en el caballo con el fin de determinar la supervivencia celular y la distribución de tejidos mediante gammagammagrafía.
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Artículo de método
En vivo de imágenes y Seguimiento de tecnecio-99m Etiquetada células madre mesenquimales de médula ósea en Equinos tendinopatía
En este artículo
Resumen
Resumen
Los recientes avances en la aplicación de las células madre mesenquimales de la médula ósea (BMMSC) para el tratamiento de las lesiones del tendón y ligamento en el caballo sugieren mejoraron las medidas de resultado en los dos estudios experimentales y clínicos. Aunque el BMMSC se implantan en la lesión del tendón en grandes cantidades (generalmente 10 - 20 millones de células), sólo un número relativamente pequeño sobrevivir (<10%), aunque estos pueden persistir por hasta 5 meses después de la implantación. Esto parece ser una observación común en otras especies donde BMMSC se han implantado en otros tejidos y es importante para entender cuando se produce esta pérdida, cuántos sobreviven el proceso de implantación inicial y si las células se borran en otros órganos. El seguimiento del destino de las células se puede lograr mediante la radiomarcación de BMMSC antes de la implantación que permite no invasiva de imágenes in vivo de la localización celular y cuantificación del número de células.
Este protocolo describe un labeli celularng procedimiento que utiliza tecnecio-99m (Tc-99m), y el seguimiento de estas células después de la implantación en tendones flexores heridos en caballos. Tc-99m es un (t 1/2 de 6,01 hr) de isótopos de corta duración que emite rayos gamma y puede ser internalizada por las células en presencia de la oxima hexametilpropilenamina compuesto lipófilo (HMPAO). Estas propiedades lo hacen ideal para su uso en las clínicas de medicina nuclear para el diagnóstico de muchas enfermedades diferentes. El destino de las células marcadas se puede seguir en el corto plazo (hasta 36 hr) por escintigrafía gamma para cuantificar tanto el número de células retenidas en la lesión y la distribución de las células en los pulmones, tiroides y otros órganos. Esta técnica es una adaptación del etiquetado de los leucocitos de la sangre y podría ser utilizado para BMMSC imagen implantado en otros órganos.
Introducción
Estrategias regenerativas para la reparación de los tejidos enfermos o dañados se basan en células madre multipotentes derivadas de una variedad de tejidos e implantado en la zona afectada. Los recientes avances en la aplicación de autóloga BMMSC para el tratamiento del tendón y lesiones de ligamentos en el caballo han demostrado la mejora de las medidas de resultado, tanto experimental 1-5 y estudios clínicos 6. El caballo es un modelo especialmente atractivo para la evaluación de la eficacia de las células madre tratamientos relacionados, ya que sufre de edad y sobreesfuerzo lesiones relacionadas a los tendones de la extremidad anterior distal....
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Protocolo
Los casos descritos en este documento se realizaron siguiente permiso ético otorgado por el Comité de Ética Animal y el Bienestar del Colegio de Veterinarios de Málaga, España, y el Royal Veterinary College, North Mymms, Reino Unido Los procedimientos utilizados en los caballos se basan en los protocolos aprobados que son utilizado en la clínica en caballos que reciben terapias basadas en células madre, que incluye la sedación, la aspiración de médula ósea, la inyección intra-tendinosa, perfusión regional, la inyección intravenosa, la gestión y el tratamiento del dolor post-procedimiento y el seguimiento después de la implantación.
1. Dispo....
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Resultados
Tc-99m-HMPAO incorporación en BMMSs no afecta negativamente a su capacidad de adherirse al plástico de cultivo de tejidos y mientras ellos demuestran la capacidad de proliferación para formar monocapas (Figura 1) que no tienen plenamente determinado si las tasas de proliferación u otros fenotipos celulares se ven afectados. Su morfología es similar a las células no marcadas con una forma típica de husillo. La eficiencia de marcaje celular (es decir., La absorción de la etiqueta) varía típicamen.......
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Discusión
Además de la médula ósea, las células madre aisladas a partir de fuentes tales como el tejido adiposo son adecuados para el etiquetado con este protocolo. Además, las células de un estado congelado pueden ser revividos y se expandieron en cultivo para los números deseados para los estudios de etiquetado 12.
Un factor crítico que determina la eficiencia de marcaje del BMMSC es el tiempo entre la elución de la Tc-99m desde el generador de molibdeno en la radiofarmacia, la preparació.......
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Divulgaciones
JD y RKS son miembros del Consejo Asesor Científico de ReCellerate Inc.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer la financiación de la Junta de Impuestos sobre Carreras de Caballos del Reino Unido (subvención número 721) y VetCell BioScience Ltd, Reino Unido y de la Consejería de Innovación, Ciencia y Empresa, Junta de Andalucía, España.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tecnecio99m | Consulte con el proveedor local de radiación de ionización de acuerdo con los requisitos legales. El isótopo debe usarse dentro de las 2 horas posteriores a la elución del generador de molibdeno-99 | ||
| Ceretec - Oxima de hexametilpropilenamina (HMPAO) | GE HealthCare | Consulte directamente con GE HealthCare | |
| Microfuge, Minispin/Minispin Plus | Ependorf | 22620100 | |
| agujas de 18 g y 19 g | Terumo Medical | NN-1838R (18 G); NN1938R (19 g) | |
| Jeringas de 1 ml y 2 ml | Scientific Laboratory Supplies Ltd | SYR6200 (1 ml); SYR6003 (2 ml) | |
| Tubos de microcentrífuga 1,5 ml | Greiner Bio-One Ltd | 616201 | |
| PBS - Solución salina tamponada con fosfato | LifeTechnologies | 14190 | |
| Hisopos de gasa estéril | Shermond Ltd | UNG602 | |
| CoflexVet vendaje autoadhesivo | Andover Healthcare, Inc. | 3540RB-018 | |
| Software de imágenes de ultrasonido | Scion Image, Scion Corporation, EE. UU. | ||
| MicasXplus software de procesamiento de scintigramas | Bartec Technologies Ltd | http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html | |
| Contador de isótopos de campo para el monitoreo de isótopos | John Caunt Reino Unido | GMS1800a | http://www.johncaunt.com/ |
| Contador de pocillos para mediciones de isótopos, calibrador de dosis | Capintec Southern Scientific | CRC-25R |
Referencias
- Becerra, P., et al. Distribution of injected technetium(99m)-labeled mesenchymal stem cells in horses with naturally occurring tendinopathy. Journal of Orthopaedic Research. 31, 1096-1102 (2013).
- Nixon, A. J., Dahlgren, L. A., Haupt, J. L., Yeager, A. E., Ward, D. L.
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Reimpresiones y permisos
