Abstract
Levern har en stor förmåga att regenerera. Hepatocyter, de parenkymala cellerna i levern, kan regenerera på ett av två sätt: hepatocyte- eller biliär driven leverregenerering. I hepatocyte driven leverregenerering, är regenererande leverceller som härrör från redan existerande leverceller, medan i galla driven förnyelse är regenererande leverceller som härrör från gall-epitelceller (BEC). För hepatocyte driven leverregenerering, det finns utmärkta gnagarmodeller som väsentligt har bidragit till den nuvarande förståelse av leverregenerering. Det finns dock ingen sådan gnagarmodell för galla driven leverregenerering. Vi har nyligen rapporterat om en zebrafisk leverskada modell där BEC ger omfattande upphov till leverceller vid svår hepatocyte förlust. I denna modell är hepatocyter specifikt ablation av ett farmakogenetiska medel. Här presenterar vi i detalj metoderna för att avlägsna hepatocyter och att analysera BEC driven leverregenereringsprocessen.Detta hepatocyt-specifika ablation modell kan vidare användas för att upptäcka de bakomliggande molekylära och cellulära mekanismer av gallan driven leverregenerering. Dessutom kan dessa metoder tillämpas på kemiska skärmar för att identifiera små molekyler som förstärker eller undertrycker leverregenerering.
Introduction
Levern är ett mycket regenerativ orgel. Under leverregenerering, regenererande leverceller, de parenkymceller i levern, härrör från redan existerande leverceller (hepatocyte driven leverregenerering) eller BEC (gallan driven leverregenerering) 1,2. Leverskada framkallar oftast spridningen av redan existerande leverceller; men när hepatocytproliferation äventyras, kan BEC bidra till hepatocyter 2-4. Dessa två typer av leverregenerering är kliniskt signifikant. Efter kirurgiskt avlägsnande av en del av den humana levern (t.ex. på grund av levertumörer eller levande leverdonatorer), hepatocyter i den återstående levern prolifererar för att återvinna förlorad levermassan. Däremot hos patienter med svåra leversjukdomar, hepatocytproliferation kraftigt äventyras, så att BEC eller lever progenitorceller (LPCs) verkar bidra till regenere hepatocyter 5,6. Den gnagare 2/3 partiell hepatektomi modell, därhepatocyter föröka att återvinna förlorad levermassan, har väsentligt bidragit till den nuvarande förståelse av hepatocyte driven leverregenerering 7,8. Det finns dock ingen giltig gnagarmodell där regenere hepatocyter huvudsakligen härrör från BEC. Trots att flera gnagare levertoxin modeller lett till identifiering av galla driven leverregenerering 2-4, senaste härstamning spåra studier på möss tyder på en minimal bidrag BEC att regenerera leverceller i dessa modeller 9,10. Några av gnagare leverskada modeller, inklusive partiell hepatektomi 11-13 och paracetamol-inducerad leverskada 14,15, har tillämpats på zebrafisk och ledde till identifiering av nya gener eller vägar inblandade i leverregenerering. Men hepatocyte driven, men inte BEC-driven, sker leverregenerering i dessa zebrafisk leverskada modeller. Därför är en ny leverskada modell där BEC utsträckning bidra till regeneratDet behövs ing hepatocyter för en bättre förståelse av BEC driven leverregenerering.
De övergripande målen för hepatocyte ablation modell som beskrivs här är (1) för att generera en leverskada modell där BEC utsträckning bidra till regenere hepatocyter, och (2) klargöra de molekylära och cellulära mekanismer som ligger bakom BEC driven leverregenerering. Vi antog att skadornas bestämmer läget för leverregenerering; alltså, förutspådde vi att gallan driven leverregenerering skulle initiera vid svår hepatocyte skador. För att testa denna hypotes, vi utvecklat en zebrafisk leverskada modell genom att generera en transgen linje, Tg (fabp10a: CFP-NTR) s931, som är mycket uttrycker bakterie nitroreduktas (NTR) smält med cyan fluorescerande protein (GFP) under hepatocyt specifika fabp10a promotor. Sedan NTR omvandlar giftfri prodrug, metronidazol (Mtz), till ett cytotoxiskt läkemedel, ablates det endast den avsedda NTR-uttryckande celler 16-18, i det här fallet, de hepatocyter. Genom att manipulera varaktighet Mtz behandling, kan styras omfattningen av hepatocyte ablation. Med hjälp av denna modell, nyligen rapporterade vi att vid allvarliga hepatocyte förlust, BEC ge omfattande upphov till regenererande leverceller 19, vilket ytterligare bekräftades av två andra oberoende studier 20,21. Därför, jämfört med den tidigare nämnda gnagare och zebrafisk leverskademodeller, är vår hepatocyt ablation modell mer fördelaktig för att studera BEC driven leverregenerering.
Detta protokoll beskriver en metod för genomförande leverregenereringsexperiment med hjälp av zebrafisk hepatocyt ablation modell. Denna modell kommer att vara lämpligt för att bestämma mekanismerna bakom gallan driven leverregenerering och för kemiska skärmar för att identifiera små molekyler som kan undertrycka eller utökar leverregenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Zebrafisk höjdes och uppvuxna i enlighet med standardförfarande; experiment godkändes av University of Pittsburgh Institutional Animal Care och användning kommittén.
1. Framställning av embryon / larver
- För att genomföra tidsinställda parningar, inrätta vuxna manliga och kvinnliga Tg (fabp10a: CFP-NTR) s931 hemizygot eller homozygota fiskar O / N och placera en avdelare mellan dem. Ta bort det här delnings följande morgon när parningen är önskvärt. Samla embryon genom sila vattnet med en fin plastnät sil.
- Vänd filtret upp och ned och skölj nätytan med en fin ström av ägg vatten ut från en klämflaska. Överför 100 embryon i en 100 mm petriskål med 25 ml ägg vatten. Håll inte mer än 100 embryon per petriskål och höja dem vid 28 ° C.
- För att förhindra pigmentering, till fenyltiokarbamid (PTU) i petriskålar före 10 timmar efter befruktning (HPF), och öka embryos / larver fram till 80 HPF. Den slutliga koncentrationen av PTU är 0,2 mM. VARNING: PTU är giftigt. Användning i enlighet med lämpliga riktlinjer hantering.
- Söva larverna genom tillsats 3-aminobensoesyra-etylester (Tricaine), vid en slutkoncentration av 0,016%, i petriskålarna. Sedan, med hjälp av ett epifluorescensmikroskop, sortera GFP-positiva larver. Använd larver med en liknande leverns storlek och kassera de med en mindre eller större levern.
OBS: någon GFP-positiva larver, oavsett intensitet, kan användas eftersom det inte finns någon skillnad i graden av hepatocyte ablation mellan hemizygot och homozygot larver. VARNING: tricaine är giftigt. Användning i enlighet med lämpliga riktlinjer hantering. - Ta bort ägg vatten innehållande Tricaine och lägga ägg vatten kompletterat med 0,2 mM PTU. Håll embryon / larver vid 28 ° C.
2. Mtz Behandling
- Bered en färsk 10 mM Mtz lösning genom att lösa 0,171 g Mtz pulver i 100 ml ägg vatten kompletterat med 0,2% DMSO och 0,2 mM PTU. För fullständig upplösning av Mtz, blanda lösningen vid RT under snabb omrörning i 20-30 minuter. För att lösa Mtz och förbättra Mtz trängning i larver, lägga DMSO vid framställning av Mtz. VARNING: långvarig exponering eller ökad koncentration av Mtz är giftig. Användning i enlighet med lämpliga riktlinjer hantering.
- Separera larver i kontroll- och försöksgrupper genom att överföra önskade antalet larver i två olika 100 mm petriskål eller flera brunnar. För den experimentella gruppen, hålla larver i 10 mM Mtz lösning; för kontrollgruppen, hålla dem i ägg vatten innehållande 0,2% DMSO.
- Täck plattorna eller petriskålar innehållande Mtz lösningen med aluminiumfolie för att förhindra foto-inaktivering av Mtz, och inkubera vid 28 ° C. Varaktigheten av Mtz behandling beror på larvstadiet och den transgena linjen.
- För att observera liknande svår hepatocyte ablation i
3. Analys av Biliary driven leverregenerering
- Vid slutet av ablation perioden avlägsna Mtz lösningen från plattorna. Tvätta Mtz-behandlade larver genom att tillsätta 25 ml ägg vatten. Snurra plattan 2-3 gånger för att tvätta larverna innan du slänger ägget vatten. Upprepa tre gånger och sedan doppa larverna gång i ägg vatten. För att undvika hjärtödem och larv död i Mtz-behandlade larver, lägga till en lägre koncentration av Tricaine, vid en slutkoncentration av 0,008%, för att immobilisera larver.
- För lever analys, undersöka levern storlek Mtz-behandlade larver under en epifluorescensmikroskop med den gemensamma fiskeripolitiken filtret. Bedöm hepatocytodlingar ablation trappa baserad på den relativa lever storlek: stor (icke-borttagen, 0-10% larver), medium (delvis borttagen, 10-20%), och mycket små (fullt ablateras, 80-90%).
- Ta bort larverna med icke-tyreoidektomerade eller delvis vävnad avlägsnats lever. Bara hålla larver med en liten levern, som är indikativ för svår hepatocyt ablation. För lever analys vid förnyelse 0 hr tidpunkt (R0h), skörda larverna efter Mtz wash-out och den gemensamma fiskeripolitiken sortering. Annars håller sorterade larver i ägg vatten kompletterat med 0,2 mM PTU tills redo för skörd.
- Överför skördas larver i ett 1,5 ml mikrocentrifugrör och ersätta ägg vatten med fixering lösning av 3% formaldehyd i PEM-buffert. Inkubera röret på en rotator O / N vid 4 ° C.
- Byt fixeringslösningen med en ml PBSDT och rotera röret innehållande larver på rotatorn under 5 min.
- Överför fast larver i en 100 mm petriskål med PBSDT och använder pincett, manuellt ta bort äggula och bröstfenor under ett dissektionsmikroskop. Överför upp tp 20 dissekeras larver i ett 1,5 ml rör. <li> Ersätt PBSDT lösning med 1 ml blockeringslösning och rock röret på en rotator vid rumstemperatur under 2 h.
- Ersätt blockerande lösningen med 100 pl blockeringslösning innehållande primära antikroppar. Långsamt vagga röret på en rotator O / N vid 4 ° C.
- Avlägsna den primära antikroppslösningen och tvätta med PBSDT 5 gånger för 10 minuter varje gång. Lägg sedan till 100 ul av blockeringslösning som innehåller sekundära antikroppar och rock den på en rotator vid rumstemperatur under 2 timmar.
- Tvätta fem gånger med PBSDT för 10 minuter varje gång vid RT genom att gunga på en rotator.
- Orientera larverna i sidled på ett objektglas och tillsätt en droppe monteringsmedier. Försiktigt täcka dem med ett täckglas och försegla täckglaset med en spik poler. Nu är det klart för konfokalmikroskopi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Mtz behandling för 36 h (A36h, A står för ablation) 3,5-5 dpf dramatiskt nedsatt leverstorlek (Figur 1B). Efter Mtz uttvättning, betraktas som början på leverregenerering (R), stark fabp10a: GFP-NTR och fabp10a: dsRed uttryckning återkom inom 30 h (Figur 1B). Den intrahepatisk biliär nätverk, enligt bedömning av expression av Alcam som är närvarande i membranet hos BEC 22, inledningsvis kollapsade men återupprättades vid 54 h efter urtvättning (R54h) (Figur 1C). Dessa data indikerar att leverregenerering och återvinning sker snabbt i vår leverskada modell.
Figur 2 visar att regenererande hepatocyter är härledda från BEC. Tg (TP1: H2B-mCherry) s939 linje uttrycker en nukleär röd fluorescerande protein under kontroll av ett element som innehåller 12 RBP-Jĸ bindningsställen 23. Denna Notch Responsive elementet visas att driva genuttryck uteslutande i BEC i levern 24; det är emellertid möjligt att den driver genuttryck i LPCs eftersom Notch-signalering är nära besläktad med de LPCs 25. Därför ger detta transgen linje för enkel detektion av BEC och förmodligen LPC, kärnor. Vidare, den förlängda stabiliteten för H2B-mCherry fusionsprotein medger kortsiktig härstamning spårning. Mest H2B-mCherry + celler i den regenererande levern vid R0h uttryckte Hnf4α (figur 2A), som uttrycks i hepatocyter, men inte i BEC, i styr levern. Hepatocyter, enligt bedömning av fabp10a: CFP-NTR uttryck, på R48h behöll TP1: H2B-mCherry uttryck (Figur 2B, pilar). Dessa data indikerar BEC omvandling till hepatocyter vid svår hepatocyte förlust, vilket ytterligare bekräftades genom permanent härstamning spåra 19.
Figur 1. En zebrafisk leverskada modell. (A) Schema visar perioderna Mtz behandling och leverregenerering. (B) 36 timmar Mtz behandling kraftigt reducerad leverstorlek och fabp10a: GFP och fabp10a: dsRed fluorescens vid R0h; Men starka gemensamma fiskeripolitiken och dsRed fluorescens återkom på R30h. Pilar pekar till levern (Ii). (C) Confocal projektions utsikt över hela levern immun med anti-Alcam antikroppar som märkts BEC. Den intrahepatisk galla nätet kollapsade R0h men snabbt återupprättas på R54h. Prickade regioner beskriva levern. Skala barer:. 100 (B), 20 (C) um Klicka här för att se en större version av denna siffra.
_upload / 52785 / 52785fig2.jpg "/>
Figur 2. BEC ger upphov till hepatocyter upon svår hepatocyt förlust (A) Confocal projektionsvyer av levern visar Hnf4α (grön) och TP1:. H2B-mCherry (röd) uttryck vid R0h. (B) Konfokala enkeloptiska sektionsbilder som visar fabp10a: GFP-NTR (grå) och TP1: H2B-mCherry (röd) expression i levern. mCherry uttryckning avslöjades genom anti mCherry immunofärgning. Notera den svaga mCherry expression i kärnorna hos GFP + hepatocyter (pilar). Stark mCherry + celler är BEC. Skala barer:. 20 pm klicka Vänligen här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Svår, men inte mild, framkallar hepatocyte ablation gallan driven leverregenerering. Därför, efter Mtz behandling och wash-out, är det viktigt att undersöka levern storlek Mtz-behandlade larver, som kan bedömas genom inneboende GFP fluorescens från fabp10a: GFP-NTR transgen. Eftersom en liten procentandel av Mtz-behandlade larver kommer att visa icke-ablationsbehandlad (0-5%) eller partiellt avlägsnade (10-20%) av lever, är det viktigt att reda ut och endast analysera larverna med en mycket liten levern, som är ett tecken på allvarlig hepatocyte ablation.
Även i våra protokoll, behandlade vi zebrafisk larver med Mtz 3,5-5 DPF (en 36 timmars behandlingsperiod), alternativa scener och varaktighet Mtz behandling är också möjliga. Exempelvis larver behandlades 5-6 dpf (en 24 tim behandlingsperiod) uppvisade även kraftig hepatocyt ablation, liknande den tidigare nämnda 36 h behandlingsperioden. Ytterligare två grupper oberoende genereradeliknande fabp10a: NTR transgena linjerna och rapporterade också om processen för galla driven leverregenerering efter hepatocyte specifika ablation. Av följande skäl: den ena gruppen behandlades larverna med Mtz 6-7 dpf 21, en annan gjorde det 3,5-4,5 dpf, når liknande slutsatser 20. Eftersom varje fabp10a: NTR transgen linje kan uppvisa en annan nivå av NTR uttryck, bör varaktighet och dosering av Mtz behandling bestämmas separat för var och en av transgena linje som används. Det kan även vara användbar för att generera en transgen linje med en förbättrad version av NTR-genen, i vilket införandet av tre punktmutationer leder till en ökning av dess enzymatiska aktivitet 26. Denna mutant NTR kommer att resultera i en snabbare ablation händelse än vildtyp NTR 26. Detta är särskilt fördelaktigt när vildtyp NTR kinetik kan begränsa möjligheten av fullständig cell ablation vid en önskad scen.
Eftersom hundratals larverkan samtidigt genomgå hepatocyte ablation, kan denna zebrafisk leverskada modell tillämpas på kemiska skärmar för att identifiera små molekyler som kan undertrycka eller utökar gallan driven leverregenerering. Till exempel, med hjälp av denna modell, Shin-gruppen vid Georgia Tech genomförde en kemisk skärm och hittade flera Wnt-agonister och Notch-antagonister som underlättade leverregenerering 20. Vi genomförde också en liten skala kemisk skärm och identifierat flera föreningar som kan undertrycker leverregenerering (SK, TYC, JS, och DS, under utarbetande).
Marker analyser hos människor föreslog att BEC kan bidra till regenere hepatocyter i den sjuka levern 5,6. Dr Wanless "grupp rapporterade nyligen att en stor andel av parenkym i regredierade cirros förefaller härröra från LPCs / BEC hos människor 27, vilket innebär att vikten av BEC driven leverregenerering i cirros regression. Med tanke på att BEC huvudsakligenbidra till regenere hepatocyter i zebrafisk leverskada modell som beskrivs här, kommer denna modell att vara ett ovärderligt verktyg för att bestämma de cellulära och molekylära mekanismerna bakom BEC driven leverregenerering. Förstå sådana mekanismer kommer att ge betydande insikter i hur man öka medfödda leverregenerering hos patienter med svåra leversjukdomar. Vidare, i kombination med kemiska skärmar, kan denna zebrafisk modell vara användbar för att identifiera ett potentiellt läkemedel som kan underlätta medfödda leverregenerering hos mänskliga patienter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder | Sigma-Aldrich | A5040 | Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7. |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Metronidazole | Sigma-Aldrich | M1547 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8532 | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich | 252549 | |
| Calcium sulfate dihydrate | Sigma-Aldrich | C3771 | |
| N-Phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | |
| Mounting media (Vectashield) | Vector Laboratories | H-1000 | |
| 100 x 15 mm petri dish | Denville Scientific Inc. | M5300 | |
| clear nail polish | Fisher Scientific | 50949071 | |
| fine forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | Dumont #5 |
| glass slide | Fisher Scientific | 12-544-1 | |
| glass coverslip | Fisher Scientific | 12-540-A and 12-542-A | 18 x 18 mm |
| zn-5 (mouse anti-Alcam) | ZIRC | zn-5 | 1:10 dilution |
| goat anti-Hnf4a | Santa Cruz | sc-6556 (C-19) | 1:50 dilution |
| rat anti-RFP | Allele Biotechnology | ACT-CM-MRRFP10 | 1:300 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Donkey Anti-goat IgG (H+L) | Jackson laboratories | 705-605-147 | 1:500 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Goat Anti-mouse IgG (H+L) | Invitrogen | A21240 | 1:500 dilution |
| Cy3 donkey anti-rat IgG | Jackson laboratories | 712-165-150 | 1:500 dilution |
| dissecting microscope | Leica Microsystems | S6F | |
| epifluorescence microscope | Leica Microsystems | M205FA | |
| confocal microscope | Carl Zeiss | LSM700 | |
| egg water | 0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10X PBS | 25.6 g Na2HPO4·7H2O, 80 g NaCl, 2 g KCl, 2 g KH2PO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. Autoclave for 20 min at 121°C. | ||
| 1X PBSDT | 0.2% Triton X-100 and 0.2% DMSO in 1 X PBS. | ||
| PEM buffer | 30.2 g PIPES, 761 mg EGTA, 1 mM MgSO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. | ||
| Blocking solution | Mix 1 ml of heat-inactivated horse serum with 9 ml of 1X PBSDT. |
References
- Riehle, K. J., Dan, Y. Y., Campbell, J. S., Fausto, N.
- Fausto, N., Campbell, J. S. The role of hepatocytes and oval cells in liver regeneration and repopulation. Mechanisms of Development. 120, 117-130 (2003).
- Duncan, A. W., Dorrell, C., Grompe, M. Stem Cells and Liver Regeneration. Gastroenterology. 137, 466-481 (2009).
- Michalopoulos, G. K. Liver regeneration: Alternative epithelial pathways. Int J Biochem Cell B. 43, 173-179 (2011).
- Falkowski, O., et al. Regeneration of hepatocyte 'buds' in cirrhosis from intrabiliary stem cells. Journal of hepatology. 39, 357-364 (2003).
- Yoon, S. M., et al. Epithelial Cell Adhesion Molecule (EpCAM) Marks Hepatocytes Newly Derived from Stem/Progenitor Cells in Humans. Hepatology. 53, 964-973 (2011).
- Michalopoulos, G. K.
- Michalopoulos, G. K. Liver Regeneration after Partial Hepatectomy Critical Analysis of Mechanistic Dilemmas. Am J Pathol. 176, 2-13 (2010).
- Yanger, K., et al. Adult hepatocytes are generated by self-duplication rather than stem cell differentiation. Cell stem cell. 15, 340-349 (2014).
- Schaub, J. R., Malato, Y., Gormond, C., Willenbring, H. Evidence against a Stem Cell Origin of New Hepatocytes in a Common Mouse Model of Chronic Liver Injury. Cell reports. 8, 933-939 (2014).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II alpha is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and cellular biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator, uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Cox, A. G., et al. S-nitrosothiol signaling regulates liver development and improves outcome following toxic liver injury. Cell reports. 6, 56-69 (2014).
- North, T. E., et al. PGE2-regulated wnt signaling and N-acetylcysteine are synergistically hepatoprotective in zebrafish acetaminophen injury. Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 17315-17320 (2010).
- Curado, S., et al. Conditional targeted cell ablation in zebrafish: A new tool for regeneration studies. Developmental Dynamics. 236, 1025-1035 (2007).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Curado, S., Stainier, D. Y. R., Anderson, R. M. Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies. Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).
- Choi, T. Y., Ninov, N., Stainier, D. Y., Shin, D. Extensive conversion of hepatic biliary epithelial cells to hepatocytes after near total loss of hepatocytes in zebrafish. Gastroenterology. 146, 776-788 (2014).
- Huang, M., et al. Antagonistic interaction between Wnt and Notch activity modulates the regenerative capacity of a zebrafish fibrotic liver model. Hepatology. , (2014).
- He, J., Lu, H., Zou, Q., Luo, L. Regeneration of liver after extreme hepatocyte loss occurs mainly via biliary transdifferentiation in zebrafish. Gastroenterology. 146, 789-800 (2014).
- Sakaguchi, T. F., Sadler, K. C., Crosnier, C., Stainier, D. Y. Endothelial signals modulate hepatocyte apicobasal polarization in zebrafish. Curr Biol. 18, 1565-1571 (2008).
- Ninov, N., Borius, M., Stainier, D. Y. R. Different levels of Notch signaling regulate quiescence, renewal and differentiation in pancreatic endocrine progenitors. Development. 139, 1557-1567 (2012).
- Lorent, K., Moore, J. C., Siekmann, A. F., Lawson, N., Pack, M. Reiterative use of the notch signal during zebrafish intrahepatic biliary development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 239, 855-864 (2010).
- Itoh, T., Miyajima, A. Liver Regeneration by Stem/Progenitor Cells. Hepatology. 59, 1617-1626 (2014).
- Mathias, J. R., Zhang, Z., Saxena, M. T., Mumm, J. S. Enhanced cell-specific ablation in zebrafish using a triple mutant of Escherichia coli nitroreductase. Zebrafish. 11, 85-97 (2014).
- Stueck, A. E., Wanless, I. R. Regression of cirrhosis: The maturation sequence of buds arising from hepatocyte progenitor cells. Hepatology. 58, 235A (2013).
