La diseminación metastásica del cáncer es la principal causa de muerte por cáncer. Proporcionamos una descripción en profundidad de nuestra metodología de la cirugía de supervivencia para el establecimiento de un sistema de modelo de ratón singénico "-paciente como" ortotópico para el estudio de los mecanismos de la metástasis en tumores de órganos sólidos.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Un "paciente-Like" ortotópico Singénico modelo de ratón de carcinoma hepatocelular Metástasis
En este artículo
Resumen
Resumen
La mayoría de las muertes relacionadas con el cáncer son causadas por la metástasis del cáncer en lugar del tumor primario en sí. Sin embargo, los mecanismos subyacentes de la metástasis del cáncer aún no están claros. Los modelos animales son esenciales para dilucidar los mecanismos y evaluar nuevas estrategias para el tratamiento de los cánceres metastásicos. Aquí, se proporciona una descripción detallada de un modelo de ratón singénico ortotópico "similar al paciente" para explorar los mecanismos de metástasis de tumores de órganos sólidos. Se describe la implantación quirúrgica de supervivencia de células de carcinoma hepatocelular de ratón BNL 1ME A.7R.1 directamente en el hígado (el órgano de origen) de la cepa endogámica de ratón de laboratorio inmunocompetente de tipo salvaje, BALB/c. El éxito y la reproducibilidad de esta metodología recomiendan su uso generalizado para dilucidar los mecanismos biológicos de la metástasis del cáncer de órganos sólidos.
Introducción
El carcinoma hepatocelular (CHC) es uno de los cánceres más letales, con mal pronóstico y baja esperanza de vida. Casi todas las muertes relacionadas con el cáncer se deben a la diseminación metastásica de la enfermedad desde el órgano de origen a otros órganos distantes2-6. La progresión del CHC es un proceso complejo. Por lo tanto, ser capaz de modelar el microambiente tumoral que se encuentra naturalmente en el CHC metastásico en modelos animales puede resultar una forma exitosa y útil de revelar mecanismos relevantes en humanos. 7Desafortunadamente, los mecanismos de la metástasis del cáncer aún no están claros. Por lo tanto, existe la necesi....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Declaración de Ética
Todos los estudios con animales fueron aprobados por el Cuidado y Uso de Animales Comité Institucional (IACUC) de Hunter College de la City University de Nueva York.
Nota: ocho ratones BALB / c fueron utilizados en este procedimiento experimental. Cinco ratones BALB / c fueron implantados con 5 x 10 6 células de carcinoma hepatocelular BNL 1ME A.7R.1 ratón para producir los tumores primarios. Tres ratones BALB / c sin implantaciones se utilizaron como controles. BNL 1ME A.7R.1 es una línea celular de carcinoma hepatocelular murino que se derivó por transformación química de la no tum....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Los hígados de ratones Balb / c se implantaron con 5 × 10 6 células de HCC ratón BNL 1ME A.7R.1. La evidencia clínica de desarrollo de HCC fue observable de los 63 días posteriores a la cirugía. En consecuencia, los ratones fueron sacrificados humanitariamente. La necropsia se realizó en los ratones sacrificados. Los pulmones y el hígado fueron resecados y un examen cuidadoso bruto se realizó para identificar tumores macroscópicos. En un ratón, se observó un tumor superficial en la superficie del hígado con u.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
En este artículo se da una descripción detallada del método que se informó recientemente por Ogunwobi y colegas del éxito del establecimiento de un modelo de ratón singénico ortotópico de HCC metástasis (Figura 2) 3. La tasa de absorción de los tumores para este procedimiento es generalmente alto. Hemos observado previamente una tasa de absorción del tumor de 100% 3. Sin embargo, la tasa de absorción puede ser variable en función de la competencia del investigador. En un experiment.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
Nos gustaría agradecer a Pascal DuBois por revisar el artículo. Los autores también desean agradecer al personal del Centro de Animales del Hunter College de la Universidad de la Ciudad de Nueva York. Este trabajo fue apoyado por una subvención de los NIH RCMI a Hunter College.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Pinza de micro disección | Roboz | (RS-5040) | Punta 0,20 x 0,12 mm |
| Pinza de microdisección Graefe, punta curva dentada | Roboz | (RS-5111) | 1 X 2 dientes, ancho de punta curvada 0,6 mm |
| Retractor de microdisección-Agrícola (3 por 3 puntas) | Roboz | (RS-6501) | Puntas romas de 3 X 3, profundidad 4 mm, extensión 25 mm |
| Micro retractor de disección-Goldstein (3 por 3 puntas) | Roboz | (RS-6503) | Romo, 3 X 3 puntas, profundidad 4 mm, extensión 19 mm |
| Calibre Jameson (Mide tumores) | Roboz | (RS-6466) | Escala de 80 mm/3 pulgadas, cromado |
| Micro tijeras de disección, tijeras de anillo grande, rectas y afiladas | Roboz | (RS-5852) | Hojas de 23 mm, longitud 4 pulgadas, vástagos planos y anillos grandes |
| Bisturí con cuchillas, para procedimientos delicados de disección | Roboz | (RS-9861-36) | |
| Mango de bisturí | Roboz | (RS-9884) | Tijeras de |
| puntada Littauer | Roboz | (RS-7074) | Longitud 4.5 pulgadas |
| Portaagujas marrón, para facilitar el atado de suturas | Roboz | (RS-7960) | Mandíbula convexa, dentado fino |
| Pinzas para heridas Reflex de 7 mm con aplicador de pinzas Reflex 7 | Roboz | (RS-9262) | método alternativo seguro de cierre de heridas |
| Bandeja de instrumentos y tapa | Roboz | RT-1350S | |
| Mini-cortadora con cuchilla desmontable | Roboz | (RS-5903) | |
| Germinator 500 (the Germ Terminator) Esterilizador Seco | Roboz | Ds-400, Ds-401, DS-501 | Para la descontaminación rápida de instrumentos de microdisección. Los instrumentos se descontaminan en 15 segundos. |
| Agujas de microinyección VWR | BD305125 | 25G Needle |
Referencias
- Sheng, W., et al. Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip. Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).
- Ogunwobi, O. O., Liu, C.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
