Aquí se describe un método para infligir cabeza cerrada lesión cerebral traumática (TBI) en Drosophila. Este método proporciona una puerta de entrada para investigar los mecanismos celulares y moleculares que subyacen a patologías TBI utilizando la amplia gama de herramientas experimentales y técnicas disponibles para las moscas.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Un método para infligir Cerrado Jefe lesión cerebral traumática en
En este artículo
Aviso de erratum
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Resumen
Resumen
La lesión cerebral traumática (TBI) afecta a millones de personas cada año, causando deterioro de la física, cognitiva, y las funciones de comportamiento y de la muerte. Los estudios que utilizan Drosophila han contribuido importantes avances en la comprensión de los procesos neurológicos. Por lo tanto, con el objetivo de entender las bases celulares y moleculares de patologías TBI en los seres humanos, hemos desarrollado el dispositivo de Alto Impacto de Trauma (HIT) para infligir cabeza cerrada TBI en las moscas. Las moscas sometidas a la pantalla fenotipos dispositivo HIT consistentes con TBI humana tales como la incapacidad temporal y la neurodegeneración progresiva. El dispositivo HIT utiliza un mecanismo basado en el resorte para impulsar moscas contra la pared de un vial, causando daño mecánico al cerebro de la mosca. El dispositivo es barato y fácil de construir, su funcionamiento es simple y rápida, y produce resultados reproducibles. En consecuencia, el dispositivo HIT se puede combinar con las herramientas y técnicas para moscas para abordar fundamental experimentales existentespreguntas acerca de TBI que pueden conducir al desarrollo de diagnósticos y tratamientos para TBI. En particular, el dispositivo HIT puede ser utilizado para realizar cribados genéticos a gran escala para entender la base genética de patologías de TBI.
Introducción
La lesión cerebral traumática (TBI) se define como una lesión al cerebro de una fuerza mecánica externa. Por lo general, los resultados de TBI de las fuerzas de cabeza cerradas tales como fuerzas contundentes y aceleración inercial y fuerzas de desaceleración que hacen que el cerebro de huelga el interior del cráneo. En los Estados Unidos, se estima que 50.000 personas mueren cada año a partir de la LCT y 2,5-6.500.000 personas están viviendo con las consecuencias de TBI, incluyendo debilitante físico, cognitivo y problemas de comportamiento 1,2. Las consecuencias de TBI son no sólo debido a lesiones mecánicas primarias al cerebro, sino también a las lesio....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
1. Construcción del Dispositivo HIT
- Conecte el muelle a la placa mediante dos abrazaderas y cuatro tornillos (Figura 1A). Centrar las abrazaderas relativas a la anchura de la junta directiva y Butt ellas una contra otra con el rubor de sujeción exterior con el borde de la placa. Antes de fijar las abrazaderas, doblarlas con unos alicates para encajar firmemente sobre la primavera.
NOTA: Véase la Tabla 1 para las descripciones de los materiales necesarios para la construcción del dispositivo de HIT. El extremo sujeto del muelle debe ser de 1/8 de pulgada (3,2 mm) del borde de la placa, y el extremo libre debe extende....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Estamos interesados en entender por qué las moscas mueren poco después de la lesión primaria. Para cuantificar la muerte, se determinó el Índice de Mortalidad a las 24 horas (MI 24), que es el porcentaje de moscas que murió dentro de las 24 horas de la lesión primaria. Las moscas sometidas a ataques desde el dispositivo de HIT se incubaron a 25 ° C en un vial con la comida de la mosca, y el número de moscas muertas se contó después de 24 horas. Utilizamos este enfoque para identificar los factores que afect.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
El método HIT dispositivo se distingue de otros métodos que infligen lesión traumática en las moscas por el hecho de que se hace que la cabeza cerrada en lugar de penetrar TBI 11. Además, el método dispositivo HIT toma menos tiempo, esfuerzo y habilidad para infligir TBI en muchas moscas, por lo que el método es más susceptible que otros métodos a las pantallas genéticos a gran escala. Por último, el hecho de que las lesiones primarias infligidas por el dispositivo HIT no se limitan al cerebro es a la vez una.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
No tenemos conflictos de intereses a revelar.
Agradecimientos
Esta labor fue apoyada por los Institutos Nacionales de Salud de subvención, R01 AG033620 (BG) y por Robert Draper Tecnología Financiación Innovación (DAW).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Muelle de compresión galvanizado | The Hillman Grupo | 540189 | 9 7/8 pulgadas (largo, 2,2 cm), 15/16 pulgadas (diámetro exterior, 2,4 cm), 0,12 pulgadas (tamaño del alambre, 0,3 cm) |
| Tabla | 9 pulgadas (largo, 22,9 cm), 6,5 pulgadas (ancho, 16,5 cm), 0,75 pulgadas (altura, 1,9 cm) | ||
| Abrazaderas | Sigma Electrical Manufacturing Corporation | 49822 | 3,10 pulgadas (longitud, 7,9 cm), 0,68 pulgadas (ancho, 1,7 cm), 1,11 pulgadas (altura, 2,8 cm), EMT Correas de dos orificios, haga clic en el tipo para 1 pulgada (2,5 cm) de tubo de acero EMT |
| Lazo mitad de velcro | 3 pulgadas (largo, 7,6 cm), (3/4 de pulgada de ancho, 1,9 cm) | ||
| Cubierta de cubo de hielo de poliuretano | Fisher Scientific | 02-591-45 | 9 1/8 pulgadas (longitud, 23,2 cm), 9 1/8 pulgadas (ancho, 23,2 cm), 1 1/4 pulgadas (altura, 3,2 cm) |
| Frascos de plástico para moscas | Applied Scientific | AS-510 | 3 11/16 pulgadas (altura, 9,4 cm), 1 1/16 pulgadas (diámetro interior, 2,7 cm), 1 1/8 pulgadas (diámetro exterior, 2,9 cm) |
| Bolas de algodón grandes | Fisher Scientific | 22-456-883 | |
| Transportador | de 10 pulgadas (diámetro, 25,4 cm) |
Referencias
- Harrison-Felix, C. L., Whiteneck, G. G., Jha, A., DeVivo, M. J., Hammond, F. M., Hart, D. M. Mortality over four decades after traumatic brain injury rehabilitation: A retrospective cohort study. Arch Phys Med Rehabil. 90, 1506-1513 (2009).
- Coronado, V. G., et al.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
Erratum
Formal Correction: Erratum: A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila
Posted by JoVE Editors on 7/14/2015. Citeable Link.
An author's name was corrected in the publication of A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila. The second to last author's was spelled incorrectly. It has been updated from:
Barry Ganetky
to:
Barry Ganetzky
