Células T Captura bacterias por transinfection de células dendríticas

Aranzazu Cruz-Adalia; Guillermo Ramírez-Santiago; Mónica Torres-Torresano; Raquel Garcia-Ferreras; Esteban Veiga Chacón

doi:10.3791/52976

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Artículo de método

Células T Captura bacterias por transinfection de células dendríticas

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DOI:

10.3791/52976

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13 de enero de 2016

Aranzazu Cruz-Adalia¹ , Guillermo Ramírez-Santiago¹^,² , Mónica Torres-Torresano¹^,² , Raquel Garcia-Ferreras¹^,² , Esteban Veiga Chacón¹

¹Cellular and Molecular Biology, Spanish National Research Council (CSIC), Spanish National Biotechnology Centre (CNB-CSIC), ²Hospital de Santa Cristina, Healthcare Research Institute Princesa Hospital (IIS-Princesa)

En este artículo

Resumen

Aquí se presenta un protocolo para medir la captura bacteriana por las células T CD4 ⁺ que se produce durante la presentación de antígenos a través de transinfection de células dendríticas infectadas previamente (DC). Mostramos cómo realizar los pasos necesarios: el aislamiento de pilas, la infección de la formación de conjugado de células DC, DC / T, y la medición de bacterias transfección de células T.

Resumen

Recientemente, hemos demostrado, contrariamente a lo descrito, que las células T CD4⁺, el paradigma de las células inmunitarias adaptativas, capturan bacterias de las células dendríticas infectadas (CD) mediante un proceso llamado transinfección. Aquí, describimos el análisis del proceso de transinfección, que ocurre durante el curso de la presentación del antígeno. Este proceso se dio a conocer mediante el uso de células T CD4⁺ de ratones transgénicos OTII, que portan un receptor de células T (TCR) específico para un péptido de ovoalbúmina (OVAp), que por lo tanto puede formar inmunocomplejos estables con células dendríticas infectadas cargadas con esta OVAp específica. La dinámica de las bacterias que expresan la proteína verde fluorescente (GFP) durante la transmisión de células DC-T se puede monitorear mediante imágenes de células vivas y la cuantificación de la transinfección bacteriana se puede realizar mediante citometría de flujo. Además, la transinfección se puede cuantificar mediante un método más sensible basado en el uso de gentamicina, un antibiótico aminoglucósido no permeable que mata las bacterias extracelulares, pero no las intracelulares. Este método clásico se ha utilizado anteriormente en microbiología para estudiar la eficacia de las infecciones bacterianas. A continuación explicamos el protocolo del proceso completo, desde el aislamiento de las células primarias hasta la cuantificación de la transinfección.

Introducción

Cuando un patógeno infecta a su huésped, por lo general hay una activación de la respuesta inmune innata y adaptativa, necesarios para la eliminación de bacterias. La inmunidad innata es la primera línea de defensa que impide que la mayoría de las infecciones. La inmunidad innata distinguir en unos elementos precisos manera que se conservan entre grandes grupos de microorganismos (patrones moleculares asociados a patógenos, ^PAMP) 1. Los mecanismos de la inmunidad innata incluyen barreras físicas tales como la piel, las barreras químicos (péptidos antimicrobianos, la lisozima) y los leucocitos innatos, que incluyen los fagocitos (macrófagos, neutrófilos y c....