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Artículo de método

Diseñado vascularizado colgajo de músculo

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DOI:

10.3791/52984

11 de enero de 2016

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Hasta la fecha, los defectos de tejido grueso se reconstruyen típicamente mediante la aplicación de colgajos de tejido autólogo o tejidos de ingeniería. En este protocolo, presentamos un nuevo método para diseñar un colgajo de tejido vascularizado con un pedículo autólogo, para que sirva como sustituto de los colgajos autólogos.

Resumen

Uno de los principales factores que limitan el grosor de una construcción de tejido y su consecuente viabilidad y aplicabilidad in vivo, es el control del suministro de oxígeno al microambiente celular, ya que la difusión pasiva se limita a una capa muy delgada. Aunque se han descrito varios materiales para restaurar la integridad de los defectos de espesor total de la pared abdominal, ningún material ha demostrado ser óptimo, debido a la baja vascularización del injerto, el rechazo del tejido, la infección o las propiedades mecánicas inadecuadas. Este protocolo describe un medio de ingeniería de un colgajo completamente vascularizado, con un grosor relevante para la reconstrucción del tejido muscular. Las construcciones de ácido poli L-láctico/ácido poliláctico-co-glicólico incrustadas en células se implantan alrededor de la arteria y la vena femoral del ratón y se mantienen in vivo durante un período de una o dos semanas. A continuación, el injerto vascularizado se transfiere como un colgajo hacia un defecto de espesor total formado en el abdomen. Esta técnica reemplaza la necesidad de sacrificios de tejido autólogo y puede permitir el uso de colgajos vascularizados diseñados in vitro en muchas aplicaciones quirúrgicas.

Introducción

Defectos de la pared abdominal a menudo surgen después de un trauma severo, el tratamiento del cáncer, quemaduras y la eliminación de la malla infectada. Estos defectos implican a menudo la pérdida de tejido significativa, requiriendo procedimientos quirúrgicos complicados y presentar un gran reto para los cirujanos de reconstrucción de plástico 1-4. Investigadores de ingeniería de tejidos que buscan nuevas fuentes de tejidos artificiales han explorado diferentes materiales, fuentes de células y factores de crecimiento. Se informó anteriormente restauraciones exitosas de diversos tejidos, tales como 5,6 tráquea, vejiga 7, 8....

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Protocolo

Todos los estudios con animales fueron aprobados por el Comité de Ética del Experimentación Animal del Technion. Para este procedimiento, se usaron ratones desnudos atímicos para evitar el rechazo inmunológico. Si se utiliza otro tipo de ratón, los ratones deben ser afeitaron antes del procedimiento quirúrgico y la administración de ciclosporina (u otro sustituto anti-rechazo) se recomienda.

1. Preparación Andamios y Cell incrustación

  1. Preparar estructuras compuestas de 1: 1 mezcla de poli-L-láctico-ácido (PLLA) y poliláctico-co-glicólico-ácido (PLGA), de la siguiente manera:
    1. Disolver 500 mg de PLLA y 500 mg de PLGA en ....

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Resultados

Vascularización del injerto y la perfusión in vivo

Los injertos fueron implantados uno o dos semanas antes de su transferencia como aletas axiales. A la una y dos semanas después de la implantación, la observación bruto de la zona del injerto reveló injertos de tejidos viables y vascularizados. Estos injertos demostraron ser altamente vascularizado, como se determina por inmunotinción positiva CD31 (Figura 1A), y altamente perfundidos, como se evidencia por las medi.......

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Discusión

Los avances en la ingeniería de tejidos se han encontrado con una creciente demanda de tejidos sustitutos para la reconstrucción de los diversos tipos de tejidos. Una variedad de materiales sintéticos y biológicos 1,17,18 14-16, así como métodos de fabricación han sido evaluados por su capacidad para hacer frente a estas demandas. Sin embargo, a pesar de los avances en la atención clínica y en la ingeniería de tejidos, la restauración de defectos de la pared abdominal de espesor completo sigue sien.......

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Divulgaciones

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.

Agradecimientos

Esta investigación fue financiada por el 281501 de Subvenciones del Consejo Europeo de Investigación del 7º PM, ENGVASC.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
tijera recta pequeña y finaFine Science Tools (FST)14090-09
tijera de resorteFine Science Tools (FST)15003-08
pinza recta con punta finaFine Science Tools (FST)11251-20
pinza dentada Fine Science Tools (FST)11050-10
portaagujasFine Science Tools (FST)12500-12
Cauterizador de recipientes pequeños Herramientas de ciencia fina (FST)18000-00
DuratearsAlcon5686
SedaxylanEuravetDJ03
Clorketam 1000Vetoquinol4A0726B
BuprenorfinavetmarketB15100
4-0 suturas de seda SuturasAssut647
6-0 suturas de polipropilenoSuturas Assut9351F
8-0 suturas de sedaSuturas Assut684568
Jeringa de insulina (aguja de 6 mm)BD324911
Vevo 2100 ecógrafo de alta resoluciónVisualSonics inc.
Transductor no lineal MS250VisualSonics inc.
Micromarcador agente de contraste no dirigidoVisualSonics inc.VS-11694
catéter de vena de colaVisualSonics inc.VS-11912
Vevo 2100 softwareVisualSonics inc.
dextrano conjugado con isotiocianato de fluoresceínaSigmaFD500S
MatlabMathworks, MA, EE. UU.
KimwipesKimtech34120
solución de desenmascaramiento de antígenosLaboratorios vectorialesH-3300
anticuerpo anti-CD31Abcam ab28364
anticuerpo biotinilado de cabra anti-conejo (secundario)Laboratorios de vectoresBA-1000
estreptavidina-peroxidasaJackson 016-030-084
Solución de hamatoxilina de MayerSigma-AldrichMHS-16
aminoetilcarbazol (AEC) kit de sustratoLife technologies, Invitrogen 00-2007
VectamountLaboratorios de vectoresH-5501

Referencias

  1. Engelsman, A. F., van der Mei, H. C., Ploeg, R. J., Busscher, H. J. The phenomenon of infection with abdominal wall reconstruction. Biomaterials. 28 (14), 2314-2327 (2007).
  2. De Coppi, P., et al. Myoblast-acellular ....

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