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Artículo de método

Tejido picado en colágeno comprimido: Un Bio Transplant que contiene células para la reparación reconstructiva-puesta en escena individual

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DOI:

10.3791/53061

24 de febrero de 2016

En este artículo

Resumen

La ingeniería de tejidos incluye a menudo la expansión in vitro con el fin de crear autoinjertos para la regeneración de tejidos. En este estudio se desarrolló un método para la expansión del tejido, la regeneración, y la reconstrucción in vivo con el fin de reducir al mínimo el procesamiento de células y materiales biológicos fuera del cuerpo.

Resumen

Las técnicas convencionales para la expansión celular y el trasplante de células autólogas con fines de ingeniería de tejidos pueden tener lugar en instalaciones de cultivo de células humanas especialmente equipadas. Estos métodos incluyen el aislamiento de células en suspensión de una sola célula y varios eventos laboriosos y lentos antes del trasplante de vuelta al paciente. Estudios previos sugieren que el propio cuerpo podría utilizarse como un biorreactor para la expansión celular y la regeneración de tejidos con el fin de minimizar las manipulaciones ex vivo de tejidos y células antes de trasplantarlos al paciente. El objetivo de este estudio fue demostrar un método para la recolección de tejidos, el aislamiento de epitelio continuo, la picadura del epitelio en trozos pequeños y su incorporación a un biomaterial de tres capas. El biomaterial de tres capas sirvió como vehículo de entrega para permitir el manejo quirúrgico, el intercambio de nutrientes a través del trasplante y una degradación controlada. El biomaterial consistía en dos capas externas de colágeno y un núcleo de un polímero mecánicamente estable y lentamente degradable. El epitelio picado se incorporó a una de las capas de colágeno antes del trasplante. Al picar el tejido epitelial en pedazos pequeños, los pedazos podían extenderse y, por lo tanto, se estimulaba la propagación de las células. Después de la toma inicial de los trasplantes, se llevaría a cabo la expansión y reorganización celular y la matriz extracelular maduraría para permitir el crecimiento de capilares y nervios y una mayor maduración de la matriz extracelular. La técnica minimiza las manipulaciones ex vivo y permite la recolección de células, la preparación del autoinjerto y el trasplante al paciente como una simple intervención en una sola etapa. En el futuro, la expansión del tejido podría iniciarse en torno a un molde 3D dentro del propio cuerpo, de acuerdo con las necesidades específicas del paciente. Además, la técnica podría realizarse en un entorno quirúrgico ordinario sin necesidad de sofisticadas instalaciones de cultivo celular.

Introducción

La mayoría de los estudios de ingeniería de tejidos en el trasplante a la piel y el tracto urogenital incluyen cosechas de células autólogas a partir de tejido sano y la expansión de células en los centros de cultivo de células especialmente equipados 1,2.

Después de la expansión de células, las células se suelen almacenar para su uso posterior, cuando se prepara al paciente para recibir el autoinjerto. congeladores de nitrógeno permiten el almacenamiento a largo plazo a bajas temperaturas de -150 ° C o inferior. El proceso de congelación debe ser cuidadoso y controlado con el fin de no perder las células. Uno de los riesgos de....

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Protocolo

Todos los animales protocolos fueron aprobados previamente por el Comité del Condado de Estocolmo sobre los animales y todos los procedimientos se ajustaban a las normas para el uso de animales, así como las leyes federales pertinentes.

1. Procedimientos de Animales

  1. Preparación del animal para la cirugía
    1. Preparar la mesa de operaciones con todos los materiales y los instrumentos necesarios para la operación en condiciones estériles. Realizar la cirugía exclusivamente en condiciones estériles para reducir el riesgo de infección y de optimizar las condiciones en la cirugía de la supervivencia.
    2. Ayunar el animal ....

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Resultados

Este estudio presenta un método que muestra cómo producir un biomaterial para el trasplante utilizando la compresión de plástico de colágeno y tejido picado.

Mucosa de la vejiga y la piel pueden ser cosechadas mecánicamente y luego picado en pequeñas partículas (Figura 3). Por compresión de plástico, las partículas picadas se incorporan dentro de la armazón de material compuesto compuesta de un polímero biodegradable colocado en posición central que es mecánicamente fuerte d.......

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Discusión

Este estudio presenta un enfoque fácil de usar para producir parches pared de la vejiga con tejido autólogo para el trasplante en la mesa quirúrgica. Los parches están formados por la combinación de un tejido de punto de polímero biodegradable en el medio y el colágeno, con y sin tejido picado en las superficies exteriores en combinación con la compresión de plástico. Compresión de plástico es un método descrito previamente por otros autores y se puede definir como una rápida expulsión de fluido a partir de geles de col.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Los autores agradecen a la Sociedad Sueca para la Investigación Médica, la Fundación Promobilia, la Fundación Princesa Heredera Lovisa, la Fundación Masónica para el Bienestar de los Niños, la Sociedad Sueca de Medicina, la Fundación Solstickan, el Instituto Karolinska y el Ayuntamiento de Estocolmo por su apoyo financiero.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Catéter de silicona 10-FrenchPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
DMEM 10xGibco31885-023Sección de compresión plástica 4
placas de 24 pocillosFalcon08-772-1Sección de compresión plástica 4
3',3',5-TriyodotironinaSigma-AldrichIRMM469In vitro cultivo; Sección 5
4% PFALabmed Solutions200-001-8Inmunocitoquímica; Sección 6
Etanol al 70%HistolabInmunocitoquímica; Sección 6
Kit ABC Elite: Kit de detección de biotina-estreptavidinaVectorPK6102Inmunocitoquímica; Sección 6
Etanol absolutoHistolab1399.01Inmunocitoquímica; Sección 6
AdeninaSigma-AldrichA8626In vitro cultivo; Sección 5
Atropina 25 μ g/kgTemgesic, RB Pharmaceuticals, Gran BretañaPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Azaperona 2  mg/kg Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, AustriaPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Capucha de nivel 2 de bioseguridad Compresión plástica; Sección 4
Solución de bloqueo:  Se generó suero normal de la misma especie que el anticuerpo secundario secundario.VectorLa solución de bloqueo depende del origen del primer anticuerpoInmunocitoquímica; Sección 6
Buprenorfina 45 y mu; g/kgAtropin, Mylan Inc, Canonsburg, PAPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Carprofeno 3  mg/kg     Rimadyl, Orion Pharma, SueciaPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Gluconato de clorhexidina Hibiscrub 40  mg/mL, Regent Medical, InglaterraPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Toxina del cóleraSigma-AldrichC8052En cultivo in vitro; Sección 5
Frasco de Coplin: frasco de tinción para hervirHistolab6150Immunocytochemistry; Sección 6
Molde de acero inoxidable (33 mm x 22 mm x 10 mm) aCompresión de plástico; Sección 4
DMEMGibco3188-5023Compresión plástica sección 4. Mantener en hielo  cuando se utiliza en compresión plástica
Factor de crecimiento epidérmicoSigma-AldrichE9644En cultivo in vitro; Sección 5
Ethilon (monofilamento no absorbible para suturas cutáneas)EthiconSurgery, Sección 1
Suero fetal bovino (FBS)Gibco10437-036Compresión plástica sección 4
Pinzas (Adison con diente)Preparación del animal para la cirugía, Sección 1
Gasa (Gazin Mullkompresse) Preparación del animal para la cirugía, Sección 1
Ham's F12Gibco31765-027Compresión plástica sección 4
HematoxilinaHistolab1820Inmunocitoquímica; Sección 6
Cámara de humedadDALABInmunocitoquímica; Sección 6
HidrocortisonaSigma-AldrichH0888<em>Cultivo in vitro; Sección 5
Solución de peróxido de hidrógeno 30%Sigma-AldrichH1009Inmunocitoquímica; Sección 6
InsulinaSigma-AldrichI3536In vitro cultivo; Sección 5
IsofluranoIsoflurano, Baxter, Deerfield, ILPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Lidocaína 5 mg/mlXilocaína, AstraZeneca, SueciaPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Lucose 25  mg/mlBaxter, Deerfield, ILPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Pluma de marcador Pap penSigma-AldrichZ377821-1EAInmunocitoquímica; Sección 6
Medetomidina 25 μ g/kg Domitor, Orion Pharma, SueciaPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Dispositivo de picadoApplied Tissue Technologies LLCPreparación de tejido picado, sección 2
Monocryl (monofilamento absorbible)Cirugía Eticon, Sección 1
NaClSigma-AldrichS7653Inmunocitoquímica; Sección 6
NaOH 1  NMerck Millipore106462Compresión plástica sección 4 y cultivo celular
Malla de nylon, 110 μ M tamaño de poro grueso 0.04  sqmmCompresión de plástico; Sección 4
Oculentum simplex APL: ungüento para la protección de los ojosAPLVnr 336164Cirugía, Sección 1
PBSGibco14190-094Compresión plástica sección 4
Penicilina-EstreptomicinaGibco15140-122Compresión plástica sección 4
Fenobarbitúrico 15  mg/kgPentobarbital, APL, SueciaPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
PCL TejidoCompresión plástica; Sección 4
Colágeno de cola de rataFirst LINK, Ltd, Reino Unido60-30-810Compresión de plástico sección 4, mantener en hielo
Hoja de bisturí - 15Preparación del animal para la cirugía, Sección 1
Tijeras dePreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Malla de acero inoxidable, 400  μ M tamaño de poro grueso Sección 4
estérilesPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
BatasPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Paños
SteriliumBode Chemie HAMBURGPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Hilo de sutura EthilonPreparación del animal para cirugía, sección 1
solución TE (solución desenmascarante de antígenos) consta de 10 mM de Tris y 1 mM de EDTA, pH 9,010 mM Tris/1 mM EDTA,  ajuste el pH a  9,0
Hipocloruro de tiletamina 2,5  mg/kgPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
TransferrinaSigma-AldrichT8158Cultivo in vitro; Sección 5
Base Trizma, H2NC Sigma-AldrichT6066Inmunocitoquímica; Sección 6
Kit VIP de vectores: Kit de sustrato de enzima  peroxidasaVectorSK4600Inmunocitoquímica; Sección 6
Vicryl (reabsorbible bradado)EthiconSurgery, Sección 1
Tampón Tris pH 7,6 (tampón de lavado)Solución TE: Hacer 10x (0,5 M Tris, 1,5 M NaCl) mezclando: 60,6 g Tris (Trizma Base, H2NC(CH2OH)3, M = 121,14 g / mol), agregue 800 ml de agua destilada, ajuste el pH hasta 7,6, agregue 87,7 g de NaCl y llene hasta 1,000 ml con agua destilada. Diluir a 1x con agua destilada.
X-tra solv (disolvente)DALAB41-5213-810Inmunocitoquímica; Sección 6. Uso bajo campana extractora
Zolazepam hipocloruroZoletil, Virbac, FranciaPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Tiras de cera depilatoriaVeetPreparación del animal para la cirugía, Sección 1
Pentobarbital sódicoTerminación de LundbeckSección 3
: medida de punto afeitar Compresión plástica;Guantes estériles estériles,

Referencias

  1. Rheinwald, J. G., Green, H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6, 331-343 (1975).
  2. Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. Engineering of multilayered uri....

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