Los estudios sobre el desarrollo del paladar están motivados por la incidencia de paladar hendido, un defecto de nacimiento que impone una carga de salud tremenda y puede dejar la desfiguración permanente. Se demuestra aquí una técnica para estantes cultura palatinas que se pueden utilizar para estudiar diferentes vías de señalización implicadas en el desarrollo de paladar y la fusión.
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Artículo de método
Método de estudio palatina Fusión usando estático Organ Culture
En este artículo
Resumen
Resumen
El labio leporino y el paladar se encuentran entre los más comunes de todos los defectos congénitos. Las formas de paladar secundario de estantes mesenquimales cubiertas de epitelio que se adhiere al formar la costura epiteliales de la línea media (MES). Las teorías sugieren que las células MES siguen un epitelio de transición mesenquimal (EMT), la apoptosis y la migración, haciendo un paladar fusionado 1. La desintegración completa de la economía de mercado es la fase esencial definitiva de confluencia del paladar y la zona células mesenquimales. Ofrecemos un método para cultivo de órganos paladar. La desarrollado protocolo in vitro permite el estudio de los procesos biológicos y moleculares durante la fusión. Las aplicaciones de esta técnica son numerosas, incluyendo la evaluación de las respuestas a los agentes químicos exógenos, efectos de los factores de regulación y de crecimiento y proteínas específicas. Cultivo de órganos Palatal tiene una serie de ventajas, incluyendo la manipulación en diferentes etapas de desarrollo que no es posible utilizando los estudios in vivo.
Introducción
Hendiduras orofaciales son los defectos congénitos craneofaciales más predominantes. Además, tomando en consideración todos los posibles defectos craneofaciales, se trata de la segunda anomalía de nacimiento más común en los recién nacidos 2. Paladar hendido ocurren en aproximadamente 1 de cada 700 nacimientos en los Estados Unidos (US) todos los años, la incidencia de paladar hendido es igual a 475 niños nacidos con paladar hendido al mes o 15 niños con hendiduras por día 3. Aproximadamente el 1% de los niños nacidos en todo el mundo cada año presentan algún tipo de dismorfología craneofacial.
Las hendiduras del pal....
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Protocolo
Todos los procedimientos descritos deben realizarse de acuerdo con las directrices y normas para el uso de los animales vertebrados, incluyendo la aprobación previa del Comité local de Animal Institucional de Cuidado y Uso.
1. Preparación de disección Instrumentos y Medios de Cultivo
- Prelavado todos los instrumentos que se utilizarán en la disección con peróxido de hidrógeno 3% y luego autoclave a 121 ° C durante 20 min. Filtra medios BGJb con solución antibiótica y antimicótica usando un filtro de 0,22 micras de poro mediano con succión al vacío en una campana.
2. Preparación del Equipo de Cult....
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Resultados
La técnica se puede aplicar a diferentes tipos de experiments.The siguiente estudio fue diseñado para probar el efecto teratogénico de la nicotina in vitro en la fusión palatal. Dos cepas de ratones fueron utilizados para este experimento, CD1 y el tejido C57.Palatal se trató con concentraciones mM de hemisulfato de nicotina 0,06 y 6. Se observó que los patrones de fusión palatinas y el momento eran diferentes en las dos cepas diferentes. En ratones CD1, estantes palatales del grupo de control continuaron de fu.......
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Discusión
El protocolo en este artículo proporciona un método de disección palatinos de los embriones en el día embrionario 13.5. Palatinos de embriones de ratón se cultivaron en un medio de cultivo libre de suero en una atmósfera de 95% de O 2 5% de CO 2 a 37 ° C. Disección palatina éxito depende fundamentalmente de factores múltiples en cada paso durante el procedimiento desde el momento embrionario de los ratones sacrificados a la finalización de la cultura. Uno de los factores más importantes que influye.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
Los autores no tienen ningún agradecimiento.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| BGJb | Invitrogen | ||
| Penicilina/Estreptomicina | Lonza Inc. | 17-602E | 100X |
| Placas de Petri | VWR | 25384-088 | 100 x15 mm |
| Placa de cultivo de órganos de pozo central | Falcon | #353037 | 60 x15 mm |
| Rejilla triangular de alambre | Hecho a medida con malla de alambre de acero inoxidable para adaptarse bien al plato de cultivo de órganos. | ||
| Filtro de policarbonato | GE& Tecnologías de agua y procesos | K04BP04700 | Negro 0,4 micras, 47 mm |
| Microscopio estereoscópico | ZEISS Stemi SR | ||
| Campana de cultivo | NUAIRE Pinza | ||
| Dumont Medical | #5 | ||
| Tijeras de microdisección | Kent Scientific Corporation | INS14003-G | Tijeras Vannas, rectas, 8 cm de largo, puntas de 0,1 mm, hojas de 5 mm, fabricadas en Alemania |
| Tijeras de microdisección | Kent Scientific Corporation | INS500086 | Vannas Tijeras, rectas, 8,5 cm de largo, puntas de 0,025 mm x 0,015 mm, hojas de 7 mm |
| Tijeras de microdisección | Kent Scientific Corporation | INS14127-G | Tijera de muelle curvada curva, 10,5 cm de largo, hojas de 8 mm, de fabricación alemana |
| Curreta quirúrgica (espátula de cuchara) | Hu-friedy | CM 2/4 | |
| Capucha protectora de laboratorio | Labconco | ||
| Incubadora Thermo Scientific | Farma | ||
| Series11 Chaqueta | |||
| CO2 incubadora | |||
| PBS | GIBCO | 10010-023 | 1X |
| Fuente de luz de fibra óptica | Fibra ligera Dolan-Jenner | PL-750 | |
| Casete de incrustación | Toallitas Statlab | EC301 | |
| Kim | VWR | 470173-504 |
Referencias
- Nawshad, A. Palatal seam disintegration to die or not to die that is no longer the question. Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 237, 2643-2656 (2008).
- Strong, E. B., Buckmiller, L. M.
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Reimpresiones y permisos
