Generación del paciente con cáncer de próstata Derivado modelos de xenoinjertos de células tumorales circulantes

Resumen

Este manuscrito detalla un método utilizado para generar xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de próstata (PDX) a partir de células tumorales circulantes (CTC). La generación de modelos PDX a partir de CTCs proporciona un modelo experimental alternativo para estudiar el cáncer de próstata; Es el tumor más comúnmente diagnosticado y una causa frecuente de muerte por cáncer en los hombres.

Resumen

Los modelos de xenoinjertos derivados del paciente (PDX) están ganando popularidad en la investigación del cáncer y se utilizan para la evaluación preclínica de fármacos, la identificación de biomarcadores, los estudios biológicos y las estrategias de medicina personalizada. Las células tumorales circulantes (CTC, por sus siglas en inglés) desempeñan un papel fundamental en la metástasis tumoral y se han aislado de pacientes con varios tipos de tumores. Recientemente, las CTC se han utilizado para generar modelos experimentales de PDX de cáncer de mama y próstata. En este manuscrito se detalla el método para la generación de modelos PDX de cáncer de próstata a partir de CTCs desarrollados por nuestro grupo. Las ventajas de este método sobre los modelos PDX convencionales incluyen la independencia de la recolección de muestras quirúrgicas y la generación de modelos experimentales en varias etapas de la enfermedad. La centrifugación en gradiente de densidad seguida de lisis de glóbulos rojos y depleción por citometría de flujo de células mononucleares CD45 positivas se utiliza para enriquecer CTC a partir de muestras de sangre periférica recogidas de pacientes con enfermedad metastásica. A continuación, las CTC se inyectan en ratones inmunodeprimidos; Los xenoinjertos generados posteriormente pueden utilizarse para estudios funcionales o recolectarse para la caracterización molecular. La limitación principal de este método es el método de selección negativa utilizado para el enriquecimiento de CTC. A pesar de esta limitación, la generación de modelos PDX a partir de CTC proporciona un modelo experimental novedoso para ser aplicado a la investigación del cáncer de próstata.

Introducción

Paciente xenoinjertos derivados son modelos experimentales cada vez más populares utilizados para la investigación del cáncer. Pueden ser utilizados para la caracterización de biomarcadores y vías biológicas, la evaluación pre-clínica de la eficacia del fármaco, y la creación de avatares para terapias contra el cáncer personalizados ^1,2. Anteriormente, otros grupos de investigación han desarrollado modelos PDX ya sea mediante la implantación o la inyección de suspensiones de células tumorales individuales o explantes tumorales en ratones inmunocomprometidos conjunto ^1. Estos PDX modelos requieren colección quirúrgica del tumor....

Protocolo

Este protocolo se ha realizado en nuestra institución con la aprobación del comité de ética de investigación institucional y cumple con todas las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano.

1. Recolección de sangre periférica de pacientes con cáncer de próstata avanzado

Nota: Seleccione pacientes con cáncer de próstata metastásico. Obtener el consentimiento escrito del paciente y registrar las características clínicas de los pacientes, incluyendo la edad en el aislamiento y la quimioterapia previa y tratamientos hormonales. Los pacientes con enfermedad metastásica serán po....

Resultados

Este protocolo dará lugar a la generación de modelos de PDX aislados CD45 próstata negativa CTC cancerosas. Basado en el método de selección negativa utilizado en nuestro protocolo es necesario para excluir las células muertas usando DAPI mancha. El porcentaje de células CD45 negativas detectado por citometría de flujo es variable y depende de la carga del tumor del paciente (Figura 1A). La tinción inmunofluorescente de células no clasificadas utilizando CD45 y DAPI (para identificar los núcleos celular.......

Discusión

Este manuscrito describe un método para la generación de modelos de cáncer de próstata a partir de PDX CTC. El uso de CTC para la generación de PDX modelos tiene varias ventajas potenciales importantes en comparación con los métodos existentes. En primer lugar, la colección accesible de CTC de la sangre periférica permite la generación de modelos experimentales del mismo paciente en diferentes estadios de la enfermedad. En segundo lugar, la recogida de sangre representa un método más seguro y barato p.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Instituto Conmemorativo de Roswell Park (RPMI) 1640	Gibco Life Technologies	11875-093
Suero fetal bovino (FBS)	Gibco Life Technologies	10437-028
Penicilina Estreptomicina	Gibco Life Technologies	15140-122
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Corning Cell Gro	21-031-CM
35 µ m Filtro de células	BD Falcon	352340
50 ml tubo cónico de poliestireno	Crystalgen	23-2263
Tampón de lisado de glóbulos rojos	Sigma	R7757
DAPI	Invitrogen	d3571
Ficoll-Paque Plus	GE Healthcare	17-1440
12 mm x 75 mm Tubos de poliestireno con tapón de filtro de células	BD Falcon
BD Vacutainer Tubos de recolección de sangre de lavanda con EDTA
Juego de recolección de sangre alado BD con botón pulsador Aguja retráctil calibre
BD Vacutainer Portaagujas
Torniquete
Guantes
de látex o sin látexhisopos con
2 x 2 gasas de
Venda
Aguja de 25 G Jeringa
de

35223523de un usode látex desechablealcoholalgodónadhesiva 1 ml