Un sistema de puntuación rápida fenotípica Neurológica para la Evaluación de progresión de la enfermedad en el SOD1-G93A modelo de ratón de la ELA

Summary

Este protocolo de video describe un método sensible, confiable y rápido para evaluar los déficits neuromusculares en un modelo de ratón transgénico de esclerosis lateral amiotrófica.

Abstract

El ratón transgénico SOD1-G93A es el modelo animal de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) más utilizado. En ALS TDI desarrollamos un protocolo de cribado fenotípico, demostrado en vídeo aquí, que evalúa de forma fiable la función neuromuscular de los ratones SOD1-G93A de forma rápida. Este protocolo engloba un sencillo sistema de puntuación neurológica (NeuroScore) diseñado para evaluar la función de las extremidades posteriores. NeuroScore se centra en la función de las extremidades posteriores porque los déficits de las extremidades posteriores son el primer signo neurológico de enfermedad reportado en ratones SOD1-G93A. El protocolo desarrollado por ALS TDI proporciona una evaluación imparcial del inicio de la paresia (parálisis leve o parcial), la progresión y la gravedad de la parálisis y es lo suficientemente sensible como para identificar los cambios inducidos por fármacos en la progresión de la enfermedad. En este informe, la combinación de un manuscrito detallado con un video minimiza las ambigüedades de puntuación y la variabilidad entre experimentadores, lo que permite que el protocolo sea adoptado por otros laboratorios y permite comparaciones entre los estudios que se llevan a cabo en diferentes entornos. Creemos que este protocolo de vídeo puede servir como una excelente herramienta de formación para los investigadores actuales y futuros de la ELA.

Introduction

Desde su desarrollo a mediados de la década de 1990 el modelo de ratón transgénico SOD1-G93A ha sido el modelo animal más utilizado de la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) ^1. Este modelo de ratón transgénico fue modificado genéticamente para sobreexpresar una forma mutante del gen de la superóxido dismutasa Cu / Zn humana 1 (SOD1) que alberga la glicina asociado-ALS a la mutación de alanina en el aminoácido 93 (G93A). La mutación G93A es una de muchas mutaciones en el gen SOD1 que colectivamente maquillaje aproximadamente un quinto de los casos de ELA familiar ^2.

El modelo de SOD1-G93A se ha convertido en un cabal....

Protocol

Todos los experimentos se llevan a cabo de acuerdo con los protocolos descritos por los Institutos Nacionales de Salud de Guía para el Cuidado y Uso de Animales y fueron aprobadas por el cuidado de animales institucional y el empleo de ALS TDI (IACUC).

1. Los animales, Vivienda y Diseño del estudio

Nota: La colonia de ratones SOD1-G93A se deriva de la alta copia B6SJLTgN (SOD1G93A) cepa 1Gur producido originalmente por Gurney et al ^7.. La colonia se mantiene actualmente por cruzar transgénicos machos C57BL / 6-SJL con el tipo salvaje C57BL / 6 hembras F1-SJL. Los animales F1 se generan median....

Results

Los datos de la puntuación neurológica de 90 hombres y 94 no tratados ratones SOD1-G93A femenina estudiaron en ALS TDI fueron evaluados durante 2014. Los resultados muestran que los ratones machos tienen típicamente una progresión de la enfermedad más agresiva que los ratones hembra, como se evidencia por una mayor proporción de su vida útil en NS 1 en comparación con las mujeres. NS NS 2 y 3 se producen con prácticamente la misma frecuencia a través de géneros. NS 0 fue excluido del análisis porque se considera un feno.......

Discussion

En este informe, se describe un protocolo de vídeo rápida y simple que, si se aplica correctamente, es capaz de evaluar de forma fiable la progresión de la enfermedad en ratones SOD1-G93A y la identificación de los cambios inducidos por las drogas. Mientras que diferentes grupos han desarrollado sistemas de puntuación fenotípicas de ratones SOD1-G93A ^8-10, que a menudo no proporcionan suficientes detalles sobre el procedimiento y no son adecuados para la replicación. Como resultado, los sistemas de puntuación.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cepa B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur	The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME	002726	Cepa de ratones utilizada en este estudio
Breeders	Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA		Navegador de báscula de mantenimiento de colonias
	OHAUS, Parsippany, NJ	Modelo N14120	Utilizado para pesar ratones
Nutra-GelH	Bio-Serv, Flemington, NJ		Comida húmeda proporcionado a ratones enfermos
Dieta de animales de laboratorio irradiados	Harlan, Indianápolis, IN	2918-111914M	Dieta Chow
Chips de laboratorio Sani-chips	Harlan Teklad, Indianápolis, IN	7090	Ropa de cama
JMPH	SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, NC&	nbsp; v10.0.2	Software estadístico
Microsoft Excel	Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA	Excel 2013 (v 15.0)	Software de hoja de cálculo
GraphPad Prism 5	GraphPad software Inc., La Jolla, CA	v5.4	Software de gráficos
Mouse Huts	Bio-Serv, Flemington, NJ	K3272	Para el enriquecimiento ambiental