Específica Striatum Cortex, hipocampo, Thalamus-, hipotálamo, núcleo-septal lateral y<em&gt; In Utero</em&gt; Electroporación en el ratón C57BL / 6

Jan Baumgart; Nadine Baumgart

doi:10.3791/53303

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Artículo de método

Específica Striatum Cortex, hipocampo, Thalamus-, hipotálamo, núcleo-septal lateral y

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DOI:

10.3791/53303

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18 de enero de 2016

Jan Baumgart¹ , Nadine Baumgart¹

¹TARC (Translational Animal Research Center), University Medical Center, JGU Mainz

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe en detalle cómo transfectar específicamente diferentes regiones en el sistema nervioso central C57BL/6 a través de la electroporación en el útero. En este protocolo se incluyen instrucciones detalladas para las transfecciones de regiones que se desarrollan en la corteza, el hipocampo, el tálamo, el hipotálamo, el núcleo septal lateral y el cuerpo estriado.

Resumen

La electroporación en el útero es una técnica ampliamente utilizada para la manipulación espacio-temporal rápida y eficiente de varios genes en el sistema nervioso central de roedores. La sobreexpresión de los genes deseados es tan posible como los estudios de pérdida de función mediados por shRNA. Por lo tanto, ofrece una amplia gama de aplicaciones. La factibilidad de apuntar a celdas particulares en un área distinta aumenta aún más la gama de aplicaciones potenciales de este método tan útil. Para apuntar de manera eficiente a regiones específicas, es indispensable conocer las sutilezas, como la etapa embrionaria, el voltaje a aplicar y, lo que es más importante, la posición de los electrodos.

Aquí, proporcionamos un protocolo detallado que permite la electroporación específica y eficiente en el útero de varias regiones del sistema nervioso central del ratón C57BL/6. En particular, se muestra cómo transfectar regiones que se desarrollan en la corteza retroesplenial, la corteza motora, la corteza somatosensorial, la corteza piriforme, el córnea ammonis 1-3, el giro dentado, el cuerpo estriado, el núcleo septal lateral, el tálamo y el hipotálamo. Para esta información sobre la etapa embrionaria adecuada, se proporciona el voltaje apropiado para la etapa embrionaria correspondiente. Lo más importante es que se representa un mapa de ángulos, que indica la posición apropiada del polo positivo. Este protocolo estandarizado ayuda a facilitar la electroporación eficiente en el útero, lo que también podría conducir a un número reducido de animales.

Introducción

Desde la primera descripción en 2001 por tres grupos independientes ^1-3 i n electroporación utero se ha convertido en una herramienta estándar ampliamente utilizado para el análisis de la expresión génica en el sistema nervioso central de roedores. En comparación con la generación de ratones knock-out, que es, a pesar de la mejora continua de las técnicas, aún de tiempo y dinero que consumen, las apelaciones en el útero de electroporación debido a su simplicidad. Así, en el útero de la electroporación permite ganancia-rápido y eficiente y la pérdida de la función de los estudios ^4.