Eyeblink Condicionamiento clásico bigote-señalado en la cabeza de ratones fijo

Resumen

La preparación presentada aquí para el condicionamiento del parpadeo señalizado por bigotes en ratones con la cabeza fija estimula con precisión bigotes específicos mientras permite a los ratones deambular en una cinta de correr cilíndrica. Un estímulo condicionado (CS) de estimulación de bigotes junto con un estímulo incondicionado (US) de choque periorbitario da como resultado un aprendizaje asociativo confiable en este aparato.

Resumen

El condicionamiento del parpadeo es un paradigma común para investigar los mecanismos neuronales que subyacen al aprendizaje y la memoria. Para utilizar mejor el extenso repertorio de técnicas científicas disponibles para estudiar el aprendizaje y la memoria a nivel celular, es ideal tener una plataforma craneal estable. Debido a que los ratones no toleran fácilmente la restricción, generalmente se les entrena mientras se mueven libremente en una cámara. La información de estímulo condicionado (CS) y estímulo incondicionado (US) se entrega y las respuestas de parpadeo se registran a través de una correa conectada a la cabeza del ratón. En el aparato de fijación de la cabeza que se presenta aquí, se permite a los ratones correr como deseen mientras sus cabezas están aseguradas para facilitar la experimentación. Con este aparato de entrenamiento se obtiene un acondicionamiento fiable de la respuesta al parpadeo, que permite la administración de la estimulación de los bigotes como el CS, una descarga eléctrica periorbitaria como el US, y el análisis de la actividad electromiográfica (EMG) del párpado para detectar las respuestas del parpadeo.

Introducción

condicionamiento del parpadeo es una forma de condicionamiento pavloviano y un sistema modelo para investigar los mecanismos neurales de aprendizaje asociativo y la memoria. Se ha investigado en diversas especies, incluyendo seres humanos, conejos, gatos, ratas y ratones. El paradigma implica la presentación de dos estímulos pareados: un estímulo neutro condicionado (CS; por ejemplo, un tono, un destello de luz, o la estimulación de la barba), y un estímulo no condicionado saliente (Estados Unidos, por ejemplo, un soplo de aire en el ojo, o choque periorbital). Los EE.UU. provoca una respuesta de parpadeo reflejo condicionado (es decir, UR). Finalmente, después de varias presentaciones del emparejado CS-Estados Unidos, el sujeto aprende a asociar el CS con los EE.UU.. Este aprendizaje se manifiesta en forma de una respuesta condicionada (CR), un parpadeo provocado por el CS solo que precede a la presentación de los EE.UU..

condicionamiento del parpadeo en la forma de seguimiento incluye un intervalo libre de estímulo de unos pocos hmilisegundos undred que separa el CS y los EE.UU. (Figura 1). Condicionamiento de huella es una forma de aprendizaje declarativo, ya que requiere el conocimiento de las contingencias de estímulo ^1. La brecha temporal requiere que el animal para mantener una neuronal "traza" de la CS en las regiones del cerebro anterior, tales como el hipocampo a fin de que los EE.UU. y el CS en quedar al ^1-6. Junto con las regiones del cerebro anterior, vestigios acondicionado también depende del cerebelo ^7.

acondicionado Eyeblink es, por lo tanto, un paradigma útil para la investigación de las múltiples facetas de la memoria, incluyendo la adquisición, consolidación y recuperación. Durante condicionamiento del parpadeo, un grupo de control de animales se presenta con estímulos no apareados en orden aleatorio para probar pseudoconditioning o sensibilizados respuestas a la CS que pueden ser causados ​​por la presentación Estados Unidos solamente en lugar de una asociación EC-EI aprendido.

A appara comúnmente utilizadoTus para la investigación de condicionamiento del parpadeo en los roedores es una cámara en la que se permite que los roedores de moverse libremente durante el proceso de formación ^{de 8-10.} Con este tipo de aparato, un dispositivo de amarre está normalmente unida a una pieza de cabeza que se fija al cráneo del roedor. La correa de sujeción permite la entrega de los EE.UU. (y a veces el CS) y para transmitir la respuesta del animal a esos estímulos (es decir, la respuesta de parpadeo) ^10. La correa de sujeción en sí mismo puede ser modificado en función del tipo de estímulos entregados y cómo se registra la respuesta de parpadeo.

La razón para el uso "de libre movimiento" ratones atados de condicionamiento del parpadeo es que los ratones que luchan contra la restricción. Aunque otras especies pueden ser más susceptibles a la restricción, la principal ventaja del uso de ratones en experimentos de condicionamiento del parpadeo es que la mayoría de los disponibles cepas mutantes genéticamente modificados son cepas de ratón. Además de que luchan, res completosTraint de los ratones se traduce en angustia aguda. Una preparación de ratón de cabeza fija, que minimice el estrés incrementaría la información fisiológica que se puede obtener durante el condicionamiento del parpadeo. Por ejemplo, este sistema permitiría formación de imágenes de las neuronas corticales con 2 fotones microscopía ^11.

Preparaciones Head-fija se han utilizado en los experimentos anteriores para formación de imágenes ópticas de la corteza a través de implantes craneales extraíbles, in vivo grabaciones electrofisiológicas del cerebro de roedores con arrays tetrodo, imágenes de calcio de dos fotones en, y también como una plataforma para el condicionamiento del parpadeo en ratones ^{11 -16.}

En el sistema de frente fijo, estimulación y grabaciones fiables se garantizan sin restricción completa del ratón (Figura 2). Un casco como el usado en el sistema de movimiento libre se fija al cráneo del ratón. Durante el entrenamiento, la pieza de cabeza está fijada a un conector que se une a más de baresuna cinta de correr cilíndrica con el fin de estabilizar la cabeza del roedor (Figura 2A). La cinta cilíndrica permite que el ratón para descansar cómodamente, pero si el ratón así lo desea, también permite que se ejecute o caminar. Con el uso de este sistema, los ratones pueden ser entrenados con una vibración bigote como el CS y una descarga eléctrica leve periorbital como los EE.UU. (Figura 1). Los EE.UU. se entrega a través alambres colocados quirúrgicamente debajo de la piel lateral a la vista. El CS se entrega a través de un peine que está unido a un accionador de flexión rectangular de 2 capas (Figura 2B). El peine y el accionador de flexión se unen entonces a una base magnética que se mueve a la posición correcta durante el entrenamiento y se ajusta para la entrega óptima para cada animal individual. El peine se coloca a horcajadas los bigotes seleccionados. Durante la entrega de la CS, se envía una señal al accionador de flexión que desplaza el peine y conduce a la vibración de las patillas ^17.

jove_content Otros estímulos tales como un tono o un destello de luz se han utilizado como estímulos condicionados eficaces en ratones en el pasado ^16,18,19. La estimulación de la barba razón se elige para el CS en este paradigma experimental es la dependencia de los animales murinos en su vibrisas para la entrada de información somatosensorial durante la exploración. La estimulación de la barba se ha demostrado que es un CS fiable y eficaz ^20. Por otra parte, dado el sustrato cortical bien establecida y organizada del sistema de vibrisas (es decir, la corteza barril), la estimulación de la barba como el CS proporciona una herramienta elegante para el mapeo de los cambios corticales y la plasticidad asociada con el aprendizaje parpadeo acondicionado ^20,21. Un sistema de cabezal fijo permite la estimulación precisa de los bigotes seleccionados para comparar las respuestas entre las neuronas y las neuronas que reciben entradas de los bigotes no estimulados estimulados. Por último, muchas cepas de ratones muestran la pérdida de audición relacionada con la edad como adultos relativamente jóvenes ^{22, y el cierre de los párpados durante el parpadeo acondicionado altera un CS visual (aunque un CS visual hace aminorar los problemas con respuestas de sobresalto 16). estimulación Whisker no se ve afectada por cualquiera de estas complicaciones.}

Aquí se presentan son modificaciones únicas e importantes sobre otras preparaciones de cabeza-fijo para condicionamiento del parpadeo, incluyendo procedimientos para la administración de CS y Estados Unidos, y la adquisición de la respuesta de parpadeo. La fiabilidad de este aparato y el paradigma de la formación en el condicionamiento del parpadeo se demuestra por las curvas de ratones con aire acondicionado y una curva de aprendizaje relativamente plana de los animales de control pseudoconditioned (Figura 7A) el aprendizaje.

Protocolo

Todos los procedimientos se llevaron a cabo con ratones, de acuerdo con los protocolos aprobados por Institucional Cuidado de Animales de la Universidad Northwestern y el empleo basado en las directrices emitidas por el Instituto Nacional de Salud.

1. El cilindro (Figura 2A)

1. Construir el cilindro como se describe por Chettih et al., Y Heiney et al. A partir de un largo cilindro de espuma ^14-15. Cortar una longitud de 10 cm de cilindro y perforar un agujero en el centro para encajar el eje, un metal varilla de 12,7 mm (0,5 in.) De diámetro. Montar el cilindro con su eje sobre una mesa óptica de metal como se describe por Heiney et al., O otro soporte (por ejemplo, plexiglás) ^15.
2. Erigir dos varillas metálicas verticales de 12,7 mm de diámetro en cada lado del cilindro.
3. Coloque dos soportes en ángulo recto en las varillas de metal.
4. Asegurar dos barras más (5 cm de largo, 12,7 mm de diámetro) a través de los soportes en ángulo recto. bisel THe los extremos de estas barras y el nivel de sus extremos por encima del centro del cilindro (Figura 2G).
5. Taladrar y taladrar un agujero a través de los extremos de las barras niveladas para encajar dos tornillos 4-40 que llevarán a cabo las alas del conector en su lugar (Figura 2G).

2. Montaje del sistema de estimulación de la barba (Figura 2B)

1. Cortar un segmento de 10 dientes del peine de un peine regular.
2. Haga un corte alrededor de 2-3 mm de ancho y unos 5 mm de profundidad en la parte superior del peine para aceptar un accionador de flexión rectangular 2-capa.
3. Soldar un cable a cada superficie del accionador de flexión. Utilice la soldadura y el flujo proporcionado por el fabricante. Cubrir el actuador y la soldadura con cinta aislante para proteger el ratón y el usuario de la corriente eléctrica.
4. Slip la tira del actuador en la ranura cortada en el peine de manera que la tira del actuador de flexión se encuentra perpendicular al plano del peine. Ángulo del peine de modo que está inclinada en 45 ° y más naturalmente sigue la curva de la cara del ratón.
5. Asegurar el extremo de la tira del actuador a la parte superior del peine con epoxi de fraguado rápido.
   Nota: Los cables soldados a la tira actuador flexión deben conectarse a un reóstato que proporciona 40 voltios al actuador. Los experimentos anteriores han demostrado que 40 voltios es eficaz para el acondicionamiento, pero no evoca ningún respuestas de sobresalto.
6. Coloque el accionador de flexión y el peine en un montaje móvil. Un soporte de pipeta unida a una base magnética que se utiliza normalmente para las plataformas de electrofisiología in vitro funciona bien.

3. Montaje del conector que se monta en Rods por encima del cilindro (Figura 2C, 2E)

Nota: El conector es un 3-D impreso tira 7 hoyos modelada a partir de la tira de nylon 221 Amphenol serie utilizado para la correa de sujeción por Weiss y Disterhoft y Gálvez et al ^10,17.

1. Toque en el primer agujero en la tira para un x-1 0-80"Tornillo de la máquina. Esto servirá como un tornillo de bloqueo para fijar la pieza de cabeza para el conector. Colocar una tuerca 0-80 a la cabeza del tornillo de bloqueo con el pegamento cianoacrílico con el fin de facilitar el giro del tornillo con la mano.
2. Deja un agujero vacío después de que el agujero roscado (para dejar espacio para la tuerca 0-80 máquina) y empujar cinco basas de confi-tac chapados en oro a través de los cinco orificios restantes.
3. Pelar el recubrimiento de cinco largos cables (cables obtenidos a partir de un cable Ethernet) y la soldadura de los extremos de los zócalos.
   Nota: Los dos primeros alambres se utilizan para registrar las señales electromiográficas (EMG) que detectan una respuesta parpadeo siguiente filtrado de la señal y amplificación de un amplificador. Los dos segundos entregará la señal de choque de un aislador de estímulo. El último alambre servirá como una conexión a tierra. Estos cables se conectan a los sistemas utilizados para la entrega oportuna EC-EI.
4. Garantizar la conectividad eléctrica entre los cables y las tomas con un multiMeter. Ponga el multímetro en la configuración de la continuidad y mantenga una de las sondas a la clavija y la otra sonda a los extremos pelados del cable. Los pasadores y los cables están conectados eléctricamente cuando la resistencia es baja y el multímetro emite un tono.
   1. Alternativamente, si el multímetro no tiene un parámetro de continuidad, medir la resistencia entre los pines y los cables. Hay una continuidad eléctrica si hay muy poca resistencia medida.
5. Preparar las alas del conector de dos a-220 transistores de estilo. Cortar los cables de emisor, base y colector del transistor y nivelar la superficie para que pueda ser colocada en el conector.
6. Corte el borde de la pestaña de montaje para romper el agujero de modo que la pestaña se deslice por debajo de la cabeza del tornillo.
7. EPOXY los transistores para el conector. El agujero de la lengüeta de montaje se utiliza para fijar el conector a las barras por encima del cilindro.
8. Aplicar epoxi a la base de los alambres de protruding de las tomas de corriente y permitir que el epoxi se seque. El epoxi se aislar y proteger las conexiones.

4. Preparación del casco (Figura 2D, 2E)

Nota: La tira es una pieza de cabeza 3-D impreso tira 7 hoyos modelada a partir de la tira de nylon serie Amphenol 221 utilizado para la pieza de cabeza por Weiss y Disterhoft y Gálvez et al ^10,17.. Esta pieza ya no se fabrica comercialmente. El archivo de impresora se puede descargar desde la página web de esta revista.

1. Toque en el primer agujero en la tira para un tornillo de máquina de 0-80 x 1 "y dejar un hueco vacío después del primer agujero.
2. Empuje cinco pines chapados en oro a través de la parte inferior de los cinco orificios restantes (a través de los extremos más estrechos). Utilice un tornillo de banco para facilitar el empuje las clavijas en la tira de manera uniforme.
3. El uso de un separador térmico, eliminar aproximadamente 0,5 cm de recubrimiento de poliimida del extremo de un alambre de acero inoxidable (0,005 pulg. De diámetro), soldar el extremo pelado del wire a la apertura de una de las clavijas y se corta el alambre de 0,6-0,7 cm.
4. Franja de unos 0,2 cm del extremo del cable para permitir que la corriente pase al animal.
5. Repita los pasos 4.3-4.4 para los tres cables restantes.
   Nota: Los dos primeros alambres registrar las respuestas EMG mientras que el segundo de dos servirán para aplicar una descarga al animal.
6. Como la última (quinta) de alambre servirá como un cable de tierra, cortar unos 5 cm de alambre de acero inoxidable sin revestir (0,005 pulg. De diámetro), y la soldadura de la clavija restante.
7. Asegurar la continuidad entre los cables y los pines con un multímetro. (En el caso del cable de tierra, que es sin recubrimiento, la sonda multímetro puede colocarse en cualquier lugar a lo largo del alambre.)

5. Preparación quirúrgica (Figura 2F)

1. Esterilizar todos los instrumentos quirúrgicos, incluyendo la pieza de cabeza. Esterilizar la pieza de cabeza al sumergirlo en alcohol y después de enjuagar con solución salina estéril.
2. Anestesiar el ratón en una cámara de inducción con 3-4% vaporized isoflurano mezclado con una velocidad de flujo de 1 a 2 L de oxígeno por minuto.
3. Comprobar que el animal está totalmente anestesiado con una pizca dedo del pie. El ratón es totalmente anestesiado cuando no responde por reflejo a la pizca dedo del pie.
4. Una vez que el animal ha sido totalmente anestesiado, inyectar una dosis de clorhidrato de buprenorfina como analgésico (0,05-2 mg / kg, sc), afeitarse la parte superior de la cabeza del animal, lo coloca en una almohadilla eléctrica cubierta en la base de la estructura estereotáxica , determinar que el animal está totalmente anestesiado, y seguro de la cabeza para el marco. Mantener el flujo de isoflurano vaporizado al animal, el cambio a 2% a una velocidad de flujo de 1 a 2 L de oxígeno por minuto. Aplique una pequeña cantidad de pomada oftálmica de las córneas.
5. Desinfectar el cuero cabelludo con povidona yodada y alcohol tres veces cada uno, alternando entre los dos.
6. Con una hoja de número 10 o 15 bisturí, hacer una incisión a lo largo de la línea media del cuero cabelludo, exponer el cráneo de la parte delantera de tque a los ojos más allá del hueso interparietal (~ 1,5-2 cm).
7. Contener las aletas de la piel con pinzas de micro. Colocar un clip sobre el ojo, una a lo largo de la mitad del eje rostral-caudal, y uno en la parte posterior del cráneo bilateralmente (es decir, utilizar seis clips en total). Con el fin de evitar la avulsión del casco, exponer tanto del cráneo como sea posible, incluyendo los lados y hacia atrás. Esto aumentará el área de superficie para la aplicación del cemento de fijación adhesiva.
8. Utilizando el bisturí, raspar a lo largo de la parte superior del cráneo para eliminar el periostio y asegurar una superficie de trabajo limpia y seca. Limpiar la parte superior del cráneo con 3% de peróxido de hidrógeno tres veces.
9. Perforar dos agujeros en el cráneo con una fresa de cono invertido tamaño 34 o un cortador de grabado broca de 1,6 mm para aceptar tornillos 00-90 (0,0625 pulg. De largo). Los tornillos se facilita la conexión eléctrica a tierra. Coloque un agujero en frente de bregma, y ​​el otro frente a Lambda, izquierda de la línea media cuando acondicionado right ojo. Coloque un tornillo en cada agujero. Bajar el tornillo de 0,28 mm en el cráneo por cada vuelta completa; dos vueltas completas es suficiente.
10. Crear varias pequeñas divots de aproximadamente 0,75 mm de diámetro en el cráneo con el fin de aumentar el área superficial y la fuerza de agarre para el cemento.
11. Tome la pieza de cabeza completado y enrollar el cable de tierra en una configuración en forma de ocho alrededor de los dos tornillos. Permitir un poco de holgura (~ 1,5 cm entre el casco y el tornillo) en el cable de tierra por lo que la pieza de cabeza pueden estar debidamente colocadas más tarde.
    Nota: La figura de ocho lo general se asegura una buena conexión eléctrica entre el alambre y los tornillos de tierra. El cable también puede ser soldado al tornillo para asegurar una conexión eléctrica.
12. Aplique el cemento de fijación adhesiva. Siga las instrucciones del fabricante para mezclar el cemento de fijación adhesiva o mezclar 4 cucharadas de la mezcla en polvo, L-8 gotas de la base, y 2 gotas de catalizador en un plato de cerámica de mezcla en frío (temperatura de garantizar la tira on el disco de mezcla es completamente negro.) La temperatura fría se prolonga el tiempo de trabajo del cemento.
    1. Escudo del cráneo y los tornillos abundantemente con el cemento de fijación y permitir que el cemento se seque. Esto debería tomar sólo unos minutos.
13. Después de que el cemento se haya secado, coloque el casco en posición vertical, con los pasadores de pie, por encima del cráneo. Mantenga la pieza de cabeza en su lugar con un soporte similar al conector
    Nota: Consulte "3. Montaje del conector" -El titular tiene por qué ser sólo una franja de cinco orificios con los zócalos chapados en oro con el fin de recibir los pasadores de la pieza de cabeza. El soporte está conectado a un brazo en el marco estereotáxico. El uso del soporte y el brazo facilita el posicionamiento de la pieza de cabeza y los cables.
14. Después de que el casco ha sido posicionado, pelar la piel alrededor de la zona periorbital y la posición de los dos cables de choque para permitir que los 0,2 cm extremo pelado para descansar debajo de la piel y de aproximadamente 2-4 mm directamente caudal a la eymi. No permita que los extremos de los dos cables se toquen entre sí. Coloque los dos cables de EMG en el músculo orbicular del ojo muscular por encima de la cuenca del ojo.
    1. Si es necesario, cortar los extremos de los cables si son demasiado largos y parecen como si ellos pueden rayar directamente la órbita y provocar una infección. Si cortando los extremos del cable, asegúrese de que haya suficiente cable desnudo expuesto. Alternativamente, si los cables parecen demasiado tiempo, doblar el alambre de vuelta en la base, donde se extienden fuera de la pieza de cabeza.
    2. Cimentar la base de los alambres (es decir, el extremo más cercano al casco) en su lugar en el cráneo con una pequeña extensión superficial del cemento adhesivo y dejar secar (uso la mitad de la porción descrito anteriormente).
15. Retire los clips de micro y tapa con cuidado los pliegues de piel atrás sobre el cemento. Dejar que la piel se asiente de forma natural para prevenir la tensión en cualquier parte de la piel con el fin de evitar la distorsión del párpado, la prevención de la respuesta de parpadeo,y trastornos a los animales.
16. Sellar el área expuesta con cemento dental, que abarca desde la piel una incisión en el borde de la parte superior de la pieza de cabeza con cemento. Tener un cuidado especial para evitar el goteo de cemento en los ojos o los pasadores de la pieza de cabeza. Parcialmente cemento curado se puede alisar y manipulado con un paño de algodón humedecido con disolvente cemento dental. Deje que el cemento se seque por completo antes de retirar el soporte de casco.
17. Deje que el animal se recupere de la anestesia en una superficie calentada antes de reemplazar el animal de nuevo en su jaula. Administrar Metacam (1 mg / kg, SQ) y luego colocar al animal en su jaula.
18. Permitir que el animal 5-7 días de recuperación antes de la prueba o entrenamiento. Mantener la atención post-operatorio estándar para el animal de acuerdo con las directrices de su institución. El animal debe ser revisado al menos una vez al día después de que se ha recuperado de la cirugía. Esté atento a los signos de mala alimentación y / o beber y el comportamiento apático. Si el dolorse sospecha, proporcionar Metacam cada 24 horas (misma dosis que al final del post-cirugía) hasta aliviado. La lidocaína se puede aplicar localmente en la herida si el animal se rasca o muestra signos de malestar.

6. Colocar el ratón sobre el cilindro y Formación (Figura 2G)

1. Para colocar el puntero del ratón sobre el cilindro, restringir el ratón con una mano brevemente sujetándolo por la cola con una mano y luego agarrar el ratón detrás de los hombros con índice y el pulgar con el otro. Envolver los dedos restantes alrededor del abdomen y el torso del ratón.
2. Con la mano no restringir el ratón, coloque el conector en el casco sobre la cabeza del ratón y girar el tornillo de bloqueo.
3. Coloque el ratón suavemente en el cilindro y mantenerlo en su lugar mientras se coloca el conector en el bastidor. Usa los dos tornillos para fijar el conector a las barras por encima del cilindro.
4. Una vez que el conector se ha fijado al bastidor del cilindro, release el asimiento en el ratón. Dar el ratón de un solo día de dos sesiones de habituación al cilindro. Permitir que cada sesión de habituación la misma duración que cada sesión de condicionamiento.
   1. Record velocidad de parpadeo espontánea durante la habituación y la pre-exponer los ratones a la vibración de la barba CS con el fin de minimizar la aparición de respuestas de sobresalto. Aplicar el CS como ocurre durante una sesión de condicionamiento real, pero sin la descarga eléctrica de Estados Unidos.
   2. Aplicar la estimulación whisker CS colocando el sistema Piezo cerca (alrededor de 0,5 cm) en el lado acondicionado (el lado derecho) del ratón, mientras que el deslizamiento de los dientes del peine sobre barbas individuales. Asegúrese de que los mismos bigotes se estimulan día a día mediante la colocación del sistema piezoeléctrico en la misma posición en el día a día.
5. Comenzar a entrenar con el ratón sobre el condicionamiento clásico. Entregar dos sesiones de entrenamiento por día durante cinco días. Dejar dos horas entre cada sesión de entrenamiento.
   1. Para el grupo, charcutería acondicionadover treinta ensayos por sesión de una vibración barba 250 ms larga CS (60 Hz) se combina con un 100 ms largo pulso eléctrico de Estados Unidos (0,3 mA - 3 mA, entregados a partir de un estímulo WPI A385R aislador). Separar el CS y los EE.UU., con un intervalo libre de estímulo a largo mseg 250 de seguimiento para hacer depender la tarea en el hipocampo (Figura 1) ^23.
   2. Ajustar la intensidad de la descarga eléctrica para cada animal para que se evoca un abrir y cerrar. ensayos por separado con un intervalo entre ensayos aleatorios de 30-60 segundos (promedio de 45 segundos, la duración total de 30 minutos por sesión.)
   3. Entregar treinta desapareado CS solo y ensayos por sí solo nos cada uno (para un total de sesenta y ensayos) con el grupo pseudoconditioned, usando los mismos parámetros del estímulo como se ha indicado para el grupo de acondicionado. Asegúrese de que sólo el EC y el EI ensayos solo se pseudorandomized de tal manera que ningún estímulo se presenta más de dos veces en una fila. Separar cada ensayo con un intervalo entre ensayos promedio de 22,5 seg.
6. Delawarehígado ruido de fondo en 65 dB a lo largo de la habituación y la formación con el fin de enmascarar el ruido de la vibración generada por el estimulador de la barba.

Resultados

viejo macho C57BL6 / J ratones 8-10 semanas fueron entrenados en el trazado del parpadeo acondicionado en el aparato de cinta cilíndrica cabeza fija. 8 ratones fueron entrenados con pareadas presentaciones CS-US (grupo acondicionado) y 9 ratones fueron entrenados con las presentaciones no apareados EC y el EI (grupo pseudoconditioned).

Grabaciones Ejemplo EMG de una respuesta condicionada de un ratón condicionado se muestran e...

Discusión

parpadeo acondicionado clásica es una forma de aprendizaje asociativo que es una herramienta útil para la comprensión de los sustratos neurales aprendizaje y la memoria subyacentes. Los métodos anteriores utilizados para el acondicionamiento del parpadeo en roedores como ratones involucrados una cámara que permitió que el animal se mueva libremente. Una preparación de cabeza fija para el acondicionamiento del parpadeo en ratones, utilizando el aparato descrito por Chettih et al., Y Heiney et al., Y más...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Rodillo de espuma Exervo TeraNova 36" x 6"	Amazon	B002ONUM0E	Para cilindro
plexiglás			1 cm de grosor
(12,7  mm de diámetro)			Tornillo
de máquina 4-40 hecho a medida (.25  en. largo)	Amazon Supply B00F33Q8QO		para
el peine de cabello de diseño clásico	del cilindro Conair	93505WG-320	para la estimulación de los bigotes
Actuador de flexión rectangular de 2 capas	Sistemas piezoeléctricos	T220-A4-303X	Para la estimulación de los bigotes
y fundente	Sistemas piezoeléctricos	MSF-003-NI	Para la estimulación de bigotes
Base magnética	Thor Labs	MB175	Para la estimulación de bigotes
Varilla roscada para base			Tiras hechas a medida
basadas en conectores de tira de nailon de la serie 221 de Electronic Connector Corp.			Hecho a medida, basado en Weiss y Disterhoft, 2008
TO-220 Style Transistor	Amazon Supply B0002ZPZYO		Para el conector; para las alas
Enchufes Relia-Tac Conector	Electrónico Corp.	220-S02	Para conector
Relia-Tac Pins	Electronic Connector Corp.	220-P02	Para tornillo
de metal de acero inoxidable 0-80 (1 pulgada de largo)	Amazon Supply	B000FN68EE	tornillo de bloqueo
tuerca hexagonal de tornillo de máquina de acero inoxidable 0-80 (5/32 pulgadas de grosor)	Amazon Supply	B000N2TK7Y	cabeza de tornillo de bloqueo
Loctite Super Glue-Liquid	Loctite	1365896	Pegamento cianoacrílico; para el tornillo de bloqueo
Quick Setting Epoxy	Ace Herrajes	18613	Para el sistema de estimulación de conectores y bigotes
Cables Ethernet El			cable Ethernet se puede desmontar para utilizar los cables individuales para el conector
Cables de acero inoxidable recubiertos de poliimida (2  en. largo, .005 pulg. diámetro)	PlasticsOne	005sw/2.0 37365 S-S	Para auriculares, EMG y cables de choque
Alambre de acero inoxidable sin recubrimiento (.005  en. diámetro)	AM Systems	792800	Para casco, cables de tierra
Autotransformador variable Tenma		Tenma 72-110	Para la estimulación de bigotes; reóstato para ajustar la corriente al actuador de flexión
Amplificador	A-M Systems	1700	Amplificador para filtrar y amplificar señales EMG
WPI A385R aislador de estímulos	World Precision Instruments	31405	Para el choque eléctrico
Isothesia (Isoflurano)	Henry Schein: Animal Health	50031	Para cirugía; anestesia
Buprenex Inyectable CIII	Reckett Benckiser Pharmaceuticals Inc	NDC 12496-0757-1	Para cirugía; analgésico
Akwa Tears: Ungüento oftálmico lubricante	Akorn	NDC 17478-062-35	Ungüento de lágrimas artificiales para prevenir la sequedad ocular bajo anestesia
Almohadillas de preparación de povidina-yodo	PDI	NDC 10819-3883-1	Para cirugía; antiséptico
Las almohadillas			con alcohol se pueden comprar en cualquier farmacia estándar
Mangos de bisturí quirúrgico de acero inoxidable (n.º 3)	Integra Miltex	4-7.Para	cirugía
Hojas de bisturí quirúrgico de acero inoxidable	Integra Miltex	4-310 o 4-315	Para cirugía; número 10 o 15 hojas de bisturí 3
% Peróxido de hidrógeno	puede comprar en cualquier farmacia estándar
acero inoxidable (0.0625  en. long)	Suministro de Amazon B002SG89X4		En el caso de la cirugía, para envolver el cable de tierra
Herramienta rotativa profesional	Walnut Hollow	29637	Taladro manual para cirugía, para perforar agujeros en el cráneo
Fresa de cono invertido	Roboz	RS-6282C-34	Fresa de cono invertido tamaño 34; para cirugía, para perforar agujeros en el cráneo
Cortador de grabado Broca	Dremel	106	Cortador de grabado; broca de 1,6 mm; para cirugía, para perforar agujeros en el cráneo
C& B Metabond-Quick! Sistema de cemento "B" Quick Base	Parkell	S398	Para cirugía; sistema de cemento de cementación adhesiva; importante para prevenir la avulsión del casco
C& B Metabond-Quick! Sistema de cemento Clear L-Powder	Parkell	S399	Para cirugía; sistema de cemento de cementación adhesiva; importante para prevenir la avulsión del cabezal
C& B Metabond-Quick! Sistema de cemento "C" Catalizador TBB universal 0,7 ml	Parkell	S371	Para cirugía; sistema de cemento de cementación adhesiva; importante para evitar la avulsión del cabezal
C& B Metabond-Quick! Plato mezclador cerámico Cement System con tira de temperatura	Parkell	S387	Para cirugía; sistema de cemento adhesivo de fijación; importante para prevenir la avulsión del cabezal
Pinzas suizas, estilo #5	World Precision Instruments	504506	Para cirugía
Aplicadores puritanos con punta de algodón	VWR International	10806-005	Para la cirugía
Kit de cemento de agarre para masilla dental	Dentsply	675570	Para cirugía; cemento dental