La cuantificación de la intra-peritoneal del cáncer ovárico Metástasis

Resumen

La metástasis del cáncer de ovario se caracteriza por numerosas lesiones intraperitoneales difusas, por lo que la cuantificación visual precisa de la carga tumoral es un desafío. En este trabajo describimos un método para la cuantificación in situ y ex vivo de la carga tumoral metastásica utilizando células tumorales marcadas con proteína fluorescente roja (RFP) e imágenes ópticas.

Resumen

El cáncer de ovario epitelial (EOC) es la principal causa de muerte por neoplasia maligna ginecológica en los Estados Unidos. La mortalidad se debe al diagnóstico del 75% de las mujeres con enfermedad en estadio tardío, cuando ya hay metástasis. La COE se caracteriza por metástasis intraperitoneales difusas y ampliamente diseminadas. Las células que se desprenden del tumor primario se anclan en el mesotelio que recubre la cavidad peritoneal, así como en el epiplón, lo que da lugar a metástasis multifocales, a menudo en presencia de ascitis peritoneal. Los esfuerzos en nuestro laboratorio están dirigidos a una comprensión más detallada de los factores que regulan el éxito de la metástasis de la EOC. Sin embargo, la cuantificación de la carga tumoral metastásica representa un desafío técnico importante debido al gran número, pequeño tamaño y amplia distribución de las lesiones en todo el peritoneo. En este trabajo describimos un método para el análisis de la metástasis de EOC utilizando células marcadas con proteína fluorescente roja (RFP) junto con imágenes multiespectrales in vivo. Después de la inyección intraperitoneal de células tumorales marcadas con RFP, los ratones se someten a imágenes semanales hasta el momento del sacrificio. En este momento, la cavidad peritoneal se expone quirúrgicamente y se obtienen imágenes de los órganos in situ. A continuación, los órganos disecados se colocan en una plantilla transparente etiquetada y se obtienen imágenes ex vivo. La eliminación de la autofluorescencia tisular durante el procesamiento de imágenes mediante la desmezcla multiespectral permite una cuantificación precisa de la carga tumoral relativa. Este método es útil en una variedad de aplicaciones, incluidos los estudios terapéuticos para evaluar compuestos que pueden inhibir la metástasis y, por lo tanto, mejorar la supervivencia general.

Introducción

Cáncer de ovario epitelial (EOC) es la causa más común de muerte por neoplasia ginecológica, con un estimado de 21.290 nuevos diagnósticos en los EE.UU. en 2015 y un estimado de 14.180 muertes ^1. La gran mayoría (> 75%) de las mujeres son diagnosticadas con enfermedad en etapa tardía (estadio III o IV) caracteriza por metástasis difusa intra-peritoneal y mal pronóstico. Recurrencia de la enfermedad en la cavidad peritoneal después de la quimioterapia de primera línea también es común y representa una causa importante de mortalidad ^2,3. EOC metástasis por un mecanismo único que implica tanto la extensión directa del tumor primario a los órganos p....

Protocolo

Todos los estudios in vivo fueron aprobados por la Universidad de Notre Dame Cuidado de Animales y el empleo Comisión y utilizaron ratones C57 / BL6J femeninos.

1. Cultivo de células murino cáncer de ovario

1. Hacer que el medio de cultivo ID8 murino de ovario de células de cáncer de la siguiente manera: 1 L de de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 4% de suero bovino fetal (FBS), 1% penicilina / estreptomicina, 5 mg / ml de insulina, 5 mg / ml de transferrina y 5 ng / ml selenito de sodio.
2. Transducir ID8 células de cáncer de ovario murino ¹³ para expresar la proteína roja fluorescen....

Resultados

El mecanismo metastásica de cáncer de ovario se caracteriza por metástasis intra-peritoneal altamente difusa compuesta de numerosas lesiones de tamaño variable, incluyendo múltiples (<2 mm) lesiones pequeñas. Por lo tanto, el uso de células tumorales RFP marcado (Figura 1) y de formación de imágenes óptico proporciona un método alternativo para el conteo manual y la medición de tamaño de la lesión. El desarrollo de la carga tumoral con el tiempo se puede determinar pe.......

Discusión

En contraste con los estudios que utilizan las células de cáncer de ovario humanos que deben ser realizados en ratones inmunodeficientes, el protocolo descrito anteriormente utiliza los ratones inmunocompetentes C57 / Bl6 y las células de cáncer de ovario murinos singénicos. Si bien esto permite la evaluación de la posible función de los infiltrados inmunes en la progresión tumoral y la metástasis, la presencia de pelo oscuro en la superficie abdominal hace menos sensible de formación de imágenes. El uso de un depilator.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Dulbecco's Modified Eagle Medium Corning		10-014-CM
Suero fetal bovino	Gibco	10437-028
penicilina/estreptomicina
Insulina-transferrina-selenito sódico suplemento de medios	Sigma	I-1884
Bruker Xtreme sistema de imagen para animales pequeños	Bruker Corp.
Software multiespectral Bruker	Corp
partículas lentivirales con proteína fluorescente roja	GenTarget, Inc.	LVP023
tripsina para cultivo celular	Corning	25-053-CI
PBS	Corning	21-040-CM
crema depilatoria (como Nair Hair Remover Lotion)	compras en farmacia	n/a
software ImageJ	http://imagej.nih.gov/ij/		descarga gratuita
de herramientas de disección (fórceps)	Roboz Surgical Instrument	RS 5130
herramientas de disección (tijeras)	Roboz instrumento quirúrgico	RS 5910