Todo el montaje La disección y de inmunofluorescencia del Adulto ratón cóclea

Scott C. Montgomery; Brandon C. Cox

doi:10.3791/53561

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Artículo de método

Todo el montaje La disección y de inmunofluorescencia del Adulto ratón cóclea

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DOI:

10.3791/53561

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1 de enero de 2016

Scott C. Montgomery¹ , Brandon C. Cox¹^,²

¹Department of Surgery, Division of Otolaryngology, Southern Illinois University, School of Medicine, ²Department of Pharmacology, Southern Illinois University, School of Medicine

En este artículo

Resumen

Se presenta un método para aislar el órgano de Corti adultos como tres vueltas intactas cocleares (ápice, medio y de base). También demostramos un procedimiento de inmunotinción con anticuerpos marcados con fluorescencia. En conjunto, estas técnicas permiten el estudio de las células ciliadas, células de soporte, y otros tipos de células que se encuentra en la cóclea.

Resumen

El órgano de Corti, alojado en la cóclea del oído interno, contiene células ciliadas mecanosensoriales y células de soporte circundantes que están organizadas en forma de espiral y tienen un gradiente tonotópico para la detección del sonido. La cóclea del ratón mide aproximadamente 6 mm de largo y, a menudo, se divide en tres vueltas (ápice, medio y base) para su análisis. Para investigar la pérdida celular, la división celular o la expresión génica en mosaico, es útil la preparación de todo el montaje o la superficie de la cóclea. Este método de disección permite la visualización de todas las células dentro del órgano de Corti cuando se combina con inmunotinción y microscopía confocal para obtener imágenes de células en diferentes planos del eje z. También se pueden obtener múltiples secciones transversales ópticas a partir de estas imágenes de pila z. Además, el método de disección de montaje completo se puede utilizar para la microscopía electrónica de barrido, aunque se necesita un método de fijación diferente. Aquí, presentamos un método para aislar el órgano de Corti como tres vueltas cocleares intactas (ápice, medio y base). Este método se puede utilizar para ratones desde la semana de edad hasta la edad adulta y difiere de la técnica utilizada para muestras neonatales en las que la calcificación de la cóclea es incompleta. Se puede utilizar una versión ligeramente modificada para la disección de la cóclea de rata. También demostramos un procedimiento para la inmunotinción con anticuerpos marcados con fluorescencia.

Introducción

La cóclea en forma de espiral del oído interno, contenida dentro del hueso temporal, alberga el órgano de Corti, el órgano final sensorial auditiva en mamíferos. La cóclea está tonotópicamente organizado y comúnmente dividido en apical, media y basal turnos correspondientes a diferentes regiones de frecuencia con detección de sonido de alta frecuencia en la base y detección de baja frecuencia en el vértice ^1. Las células ciliadas, las células mechanosensory del órgano de Corti, corren a lo largo de la cóclea, que es de aproximadamente 6 mm de largo en ratones ^2,3. Estas células convierten la energía mecánica de las ondas de sonido, que se transm....