La proteína c-Fos detección inmunohistoquímico: una herramienta útil como marcador de vías centrales implicados en las respuestas fisiológicas específicas<em&gt; En Vivo</em&gt; y<em&gt; Ex Vivo</em

Anne-Sophie Perrin-Terrin; Florine Jeton; Aurelien Pichon; Alain Frugière; Jean-Paul Richalet; Laurence Bodineau; Nicolas Voituron

doi:10.3791/53613

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Artículo de método

La proteína c-Fos detección inmunohistoquímico: una herramienta útil como marcador de vías centrales implicados en las respuestas fisiológicas específicas

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DOI:

10.3791/53613

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25 de abril de 2016

Anne-Sophie Perrin-Terrin¹^,² , Florine Jeton¹^,³ , Aurelien Pichon¹^,³^,⁴ , Alain Frugière² , Jean-Paul Richalet¹^,³ , Laurence Bodineau² , Nicolas Voituron¹^,³

¹Sorbonne Paris Cité, Laboratory “Hypoxia & Lung” EA2363, University Paris 13, ²UPMC Univ Paris 06, INSERM, UMR_S1158 Neurophysiologie Respiratoire Expérimentale et Clinique, Sorbonne Universités, ³Laboratory of Excellence GR-Ex, ⁴Laboratory MOVE (EA 6314), University of Poitiers

En este artículo

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo basado en la detección inmunohistológica de proteínas c-FOS, una técnica clásica utilizada para la identificación de poblaciones neuronales involucradas en respuestas fisiológicas específicas in vivo y ex vivo.

Resumen

Muchos estudios tratan de identificar y mapear las regiones del cerebro implicadas en las regulaciones fisiológicas específicas. Los c-fos proto-oncogén, un gen temprano inmediato, se expresa en neuronas en respuesta a diversos estímulos. El producto de proteína se puede detectar fácilmente con técnicas inmunohistoquímicas que conducen a la utilización de la detección de c-FOS para mapear grupos de neuronas que muestran cambios en su actividad. En este artículo, nos hemos centrado en la identificación de poblaciones neuronales del tronco cerebral implicados en la adaptación ventilatoria a la hipoxia o hipercapnia. Se describieron dos enfoques para identificar poblaciones neuronales implicadas en vivo en animales y ex vivo en las preparaciones del tronco cerebral deafferented. En vivo, los animales fueron expuestos a mezclas de gases con hipercapnia o hipoxia. Ex vivo, preparaciones deafferented fueron perfundidas con hipoxia o hipercapnia líquido cefalorraquídeo artificial. En ambos casos, ya sea de control o en los animales in vivo ex preparaciones in vivo se mantuvieron en condiciones de normoxia y normocápnicos. La comparación de estos dos enfoques permite la determinación del origen de la activación es decir, neuronal, periférico y / o central. In vivo y ex vivo, se recogieron brainstems, se fijaron, y cortados en secciones. Una vez que se prepararon secciones, la detección inmunohistoquímica de la proteína c-FOS se hizo con el fin de identificar los grupos de tronco cerebral de células activadas por estímulos hipóxicos o hipercapnia. Las células marcadas se contaron en estructuras respiratorias del tronco cerebral. En comparación con la condición de control, la hipoxia o hipercapnia aumentado el número de células marcadas c-fos en varios sitios del tronco cerebral específicas que son, pues, constitutiva de las vías neuronales implicados en la adaptación de la unidad central de la respiración.

Introducción

El gen c-fos se identificó por primera vez a principios de 1980 ^1,2 y su producto se caracterizó en 1984 como una proteína nuclear que tiene propiedades de gen activador de ^3,4. Participa en los mecanismos a largo plazo asociados con la estimulación de las neuronas. De hecho, los cambios en la actividad neuronal conducen a segundo mensajero de señalización cascadas que inducen la expresión del gen temprano inmediato c-fos, que induce la producción del factor de transcripción c-FOS. Este último inicia la expresión de los genes tardíos y por lo tanto participa en las respuestas de adaptación del sistema nervioso a muchos tipos di....