La activación inmunitaria materna (MIA) es un modelo para un factor de riesgo ambiental de autismo y esquizofrenia. El objetivo de este artículo es proporcionar un procedimiento paso a paso de cómo inducir MIA en ratones preñados con el fin de mejorar la reproducibilidad de este modelo.
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Artículo de método
La inducción de la activación inmune materna en ratones en la etapa mitad de la gestación con Viral Mimic poli (I: C)
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Resumen
Resumen
El modelo de activación inmunitaria materna (MIA) es cada vez más apreciado como modelo de roedores para el factor de riesgo ambiental de diversos trastornos psiquiátricos. Numerosos estudios han demostrado que el modelo MIA es capaz de mostrar una validez facial, de constructo y predictiva que son relevantes para el autismo y la esquizofrenia. Para modelar la MIA, los investigadores a menudo utilizan el imitador viral poliinosínico:ácido policitidílico (poli(I:C)) para activar el sistema inmunitario en roedores embarazadas. En general, las crías de la madre activada por el sistema inmunitario presentan anomalías de comportamiento y alteraciones fisiológicas asociadas con el autismo y la esquizofrenia. Sin embargo, la inyección de poli(I:C) con diferentes dosis y en diferentes momentos podría conducir a diferentes resultados al perturbar el desarrollo del cerebro en diferentes etapas. Aquí proporcionamos un método detallado de inducción de MIA mediante inyección intraperitoneal (I.P.) de 20 mg/kg de poli(I:C) a los 12,5 días embrionarios (E12.5) de gestación media. Se ha demostrado que este método induce una respuesta inflamatoria aguda en el eje materno-placentario-fetal, lo que en última instancia da lugar a las perturbaciones cerebrales y los fenotipos conductuales asociados con el autismo y la esquizofrenia.
Introducción
El concepto de la activación inmune materna (MIA) se origina a partir de los estudios epidemiológicos sobre la asociación de la infección materna con el autismo y la esquizofrenia 1. Debido a la ausencia de patógenos virales de replicación detectables en la placenta o el cerebro del feto después de la infección viral de la madre 2,3, el efecto de la infección en la descendencia es la hipótesis de que es causada por la activación del sistema inmune materno en lugar de los propios patógenos .
Para dilucidar la relación causa-efecto entre MIA y los trastornos psiquiátricos, la inyección de sintetizado químicamente, vira....
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Protocolo
Todos los protocolos se realizaron bajo la aprobación del California Institute of Comité de Cuidado y Uso de Animales institucional Tecnología (IACUC).
1. Preparación de pares de temporizado de apareamiento
- Use por lo menos 6 presas para los experimentos de comportamiento y 3 para el análisis de la expresión génica.
NOTA: Utilice el doble del número de ratones hembras estimados, ya que sólo alrededor del 50% de los ratones se conecta desde la cronometrada de apareamiento. - Utilice ratones femenino sin embarazo antes y en 8-16 semanas de edad.
NOTA: Los ratones hembra que tiene la exposición sexual antes d....
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Resultados
La inyección de 20 mg / kg de poli (I: C) en E12.5 podría evocar una respuesta inflamatoria aguda en el eje-materno-fetal de la placenta y precipitar un efecto crónico para el desarrollo del cerebro y fenotipos conductuales 12,13. Los niveles elevados de una citoquina proinflamatoria, interleuquina (IL) -6, es un indicador fiable de la respuesta inflamatoria aguda después de MIA. El tiempo máximo para la expresión del gen IL-6 en la placenta y el cerebro fetal e.......
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Discusión
MIA inducción en diferentes ventanas de tiempo perturba diferentes eventos de desarrollo cerebral en roedores, y por lo tanto conduce a diferentes alteraciones del comportamiento y neuropatologías en la descendencia. Aquí, se describe un protocolo para inducir MIA en ratones con poli (I: C) de inyección en E12.5. Este método de inducción MIA conduce a comportamiento, neurológicos, inmunológicos y alteraciones gastrointestinales asociados con el autismo y la esquizofrenia en la descendencia 8,10,11,16. Es impo.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Nos gustaría honrar al difunto Dr. Paul H. Patterson por sus contribuciones al progreso del modelo de MIA, el autismo, la esquizofrenia y la investigación. Reconocemos Sarkis K. Mazmanian por su gran apoyo en este protocolo; Ruben M. Bayon, Yvette García-Flores, Karen C. Lencioni, y Leslie A. Neumann por la asistencia administrativa; Ali Khoshnan y Jan C. Ko por la asistencia en el rodaje; Elaine Y. Hsiao y Natalia Malkova por sus consejos sobre la inducción MIA; Jeffrey S. Cochrane, Joaquín Gutiérrez, F. Lee Kwan, Jaime Rodríguez, Lorena C. Sandoval, y Natalie A. Verduzco por su cría de animales experto. Este trabajo fue apoyado por el NIH Premio Conte Centro (NIH 5P50MH086383-04, a Pau....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Poliinosínico– ácido policitidílico sal de potasio | SIGMA | P9582 | |
| Cloruro de sodio al 0,9% INJ. USP | HOSPIRA | NDC 0409-4888-10 | |
| MONOJECT jerinaje de insulina 3/10 ml 29 G x 1/2" | COVIDIEN | 8881600145 | |
| 50 ml tubos cónicos con tapón de rosca | USA SCIENTIFIC | 1500-1211 | |
| espectrofotómetro Nanodrop 1000 | THERMO SCIENTIFIC | 1000 | |
| Microscopio estereoscópico | Wild Heerbrugg | M5A | Opcional |
| Pinzas Dumont #5 Tamaño de la punta de acero inoxidable .10 X .06 mm | Roboz | RS-5045 | Opcional |
| Reactivo de estabilización de ARN RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| Reactivo TRIzol | Life Technologies | 15596-026 | opcional |
| RQ1 DNasa libre de arnasa | Promega | M610A | Kit de |
| síntesis de ADNc iScript | Bio-Rad | 170-8891 | |
| Mezcla maestra verde universal SYBR FastStart opcional con ROX | Roche | 4913922001 | Opcional |
| PCR en tiempo real | ABI | 7300 | Opcional |
| Imprimación: Il6 forward | Life Technologies | TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC | Imprimación opcional |
| : Il6 Reverse | Life Technologies | TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC | Opcional |
| Imprimación: beta-actina forward | Life Technologies | AGAGGGAAATCGTGCGTGAC | Opcional |
| Imprimación: beta-actina Reverse | Life Technologies | CAATAGTGATGACCTGGCCGT | Placa |
| de reacción óptica MicroAmp opcional de 96 pocillos | Life Technologies | 4306737 | |
| Opcional Película adhesiva óptica MicroAmp | Life Technologies | 4311971 | Optionl |
| EthoVision | Noldus | EthoVision | Optionl |
| SR-LAB aparato (PPI) | San Diego Instruments | SR-LAB | Mármoles |
| Optionl PENN-PLAX | Piedras preciosas azules mármoles | ||
| salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS) | Life Technologies | 21600-069 | Optionl |
| Paraformaldehído | MACRON | 2621-59 | Optionl |
| Vibratome | Leica | VT1000 S | Optionl |
| Azida sódica | Sigma | S2002 | Optionl |
| Triton x-100 | Sigma | X100 | Optionl |
| Solución de peróxido de hidrógeno | Sigma | 18312 | Optionl |
| Suero de cabra | Vector Laboratories | S-1000 | Optionl |
| Anticuerpo anti-calbindina de conejo | Abcam | ab11426 | Optionl |
| Biotinlyated cabra anti-conejo IgGantibody | Vector Laboratories | BA-1000 | Opcional |
| VECTASTAIN ABC Kit | Vector Laboratories | PK-4000 | Optionl |
Referencias
- Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).
- Fatemi, S. H., et al.
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Reimpresiones y permisos
