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Artículo de método

Un método mejorado para la rápida intubación de la tráquea en ratones

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DOI:

10.3791/53771

22 de febrero de 2016

En este artículo

Resumen

En este artículo se presenta un método rápido y sencillo para la administración de bleomicina directamente en la tráquea ratón a través de la intubación. Las principales ventajas de este método son que es altamente reproducible, fácil de dominar, y no requiere equipo especializado ni largos tiempos de recuperación.

Resumen

A pesar de algunas diferencias anatómicas y fisiológicas, los modelos de ratón siguen siendo una herramienta esencial para estudiar la enfermedad pulmonar humana. La toxicidad de la bleomicina es un modelo comúnmente utilizado para estudiar tanto la lesión pulmonar aguda como la fibrosis, y se han desarrollado múltiples métodos para administrar bleomicina (y otros agentes tóxicos) en los pulmones. Sin embargo, muchos de estos abordajes, como la instilación transtraqueal, tienen inconvenientes inherentes, incluida la necesidad de anestésicos fuertes y cirugía de supervivencia. Este artículo informa sobre un método rápido y reproducible de intubación intratraqueal que implica anestesia inhalada leve, visualización de la tráquea y el uso de un espirómetro sustituto para confirmar la exposición. Como prueba de concepto, se administró a ratones C57BL/6 de 8-12 semanas de edad 2,0 U/kg de bleomicina o un volumen equivalente de PBS, y se midieron tanto el daño como los criterios de valoración fibróticos después de la exposición. Este procedimiento permite a los investigadores tratar a una gran cohorte de ratones en un período relativamente corto con poco gasto y un cuidado mínimo después del procedimiento.

Introducción

A pesar de algunas diferencias anatómicas y fisiológicas, 1 modelos murinos continúan siendo de gran valor para el modelado de la biología humana y la patogénesis de la enfermedad. 2 Desde un punto de vista de la cría, los ratones son fáciles de manejar, tienen un tiempo de reproducción de baja, una esperanza de vida acelerada, y son relativamente baratos a casa. Con el desarrollo de diversas cepas genéticas y estrategias (por ejemplo., Knock-out condicionales, ratones reportero, enfoques de linaje de trazado, etc.), así como la amplia gama de reactivos disponibles (por ejemplo., Anticuerpos, proteínas recombinantes, inhibidore....

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Protocolo

Los Comités Institucionales Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Washington y el Cedars-Sinai Medical Center han aprobado el trabajo con animales necesarios para estos estudios.

1. Preparación

  1. Esterilizar tanto las pinzas de extremos romos y el depresor través de autoclave.
  2. El uso de una cabina de seguridad biológica, preparar una solución de trabajo de la BLM en PBS a partir del polvo liofilizado. Sonicar la solución durante 10 min a 35 Khz para asegurar una mezcla uniforme.
    Nota: Se recomienda un volumen total de entre 30 y 45 l para evitar la variación de pipeteado en el extremo inferior, y la asfixia con volúm....

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Resultados

Ratones intubados se controlaron diariamente para la pérdida de peso y la angustia, y se sacrificaron 4, 10 o 17 días más tarde a través de inyección intraperitoneal de 2,5% 2,2,2 tribromoetanol. Se recogió el lavado broncoalveolar (BAL) en tres lavados de PBS como se describe en otra parte 21 y el pulmón derecho se fijó en formalina al 10%, embebidos en parafina, y se tiñeron con tricrómico de Masson por la Universidad de Washington Histología y Imaging Core.......

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Discusión

En los casos en que la aerosolización es poco práctico debido a la limitada disponibilidad de reactivos, la seguridad, o el coste, la administración directa de la tráquea es un método superior para la administración de agentes exógenos en los pulmones 16 transtraqueal instilación ha sido ampliamente utilizado para lograr esto.; Sin embargo, como con cualquier intervención quirúrgica, sino que también lleva consigo la posibilidad de complicaciones causadas por el procedimiento en sí, y no necesariamente el age.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Los autores agradecen a Brian Johnson, de la Histología y Imaging Core de la Universidad de Washington en busca de ayuda con la tinción de tricrómico y análisis. Este trabajo fue apoyado por el NIH subvenciones y HL098067 HL089455.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Bleomicina inyectable, 30 unidades/vialAPP Pharmaceuticals, LLC103720Para obtener los mejores resultados, BLM debe suspenderse en PBS, alícuota y almacenarse como alícuotas liofilizadas de un solo uso
Pinza
Depresor de lengua (es decir, electrodo de cuchilla Valleylab doblado, 2.4 ") CovidienE1551GAntes de usar, cree una curva de 45 grados a 1,5 cm de la punta de la hoja. También se puede crear un depresor adecuado a partir de cualquier implemento metálico de dimensiones similares.
Catéter Exel Safelet 22G X 1"Exel International26746
1 ml Jeringa de tuberculina desechable de punta deslizante (200/sp, 1600/ca)BD309659
0,2 ml Pipeta y puntas
Iluminador Fiber-Lite. Modelo 181-1: Modelo 180 acoplado con el iluminador estándar de doble cuello de cisnede Dolan Jenner Industries, Inc.181-1No se recomiendan los iluminadores LED de menor potencia, ya que no iluminan suficientemente la tráquea.
Tablero deVer diagrama 1.
Cinta de etiquetas de color: 0.5  en. AnchoFisherbrand15-901-15A
Oxígeno 
Solución salina tamponada con fosfato, 1XCorning21-040-CVproducto debe ser estéril
Bobina de sutura trenzada negra de seda no estéril, 91,4 m, tamaño 4-0Aparato Harvard517698
Máquina de anestesia de mesa IsofluranoHighland Medical Equipmenthttp://www.highlandmedical.net/
Cámara de isoflurano de ratón de inducción con tapa deslizanteMIP / Anesthesia TechnologiesAS-01-0530-SM
FORANE (isoflurano, USP) Líquido para inhalación 100 mL Baxter1001936040
  Sistema de patología digital NanozoomerHamamatsu
IgM ELISA Kit de cuantificación Laboratorios BethylE90-101
de extremo romode filtro intubación El

Referencias

  1. Hyde, D. M., Hamid, Q., Irvin, C. G. Anatomy, pathology, and physiology of the tracheobronchial tree: emphasis on the distal airways. J Allergy Clin Immunol. 124, S72-S77 (2009).
  2. Rosenthal, N., Brown, S. The mouse ascending: perspectives for hum....

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Intubación traquealmodelo de ratónadministración de bleomicinainstilación intratraquealconfirmación mediante espirómetroanestesia con isofluranotabla de procedimientoscolocación de catéterlavado broncoalveolartinción de tricrómico de Masson