Un método mejorado para la rápida intubación de la tráquea en ratones

Resumen

En este artículo se presenta un método rápido y sencillo para la administración de bleomicina directamente en la tráquea ratón a través de la intubación. Las principales ventajas de este método son que es altamente reproducible, fácil de dominar, y no requiere equipo especializado ni largos tiempos de recuperación.

Resumen

A pesar de algunas diferencias anatómicas y fisiológicas, los modelos de ratón siguen siendo una herramienta esencial para estudiar la enfermedad pulmonar humana. La toxicidad de la bleomicina es un modelo comúnmente utilizado para estudiar tanto la lesión pulmonar aguda como la fibrosis, y se han desarrollado múltiples métodos para administrar bleomicina (y otros agentes tóxicos) en los pulmones. Sin embargo, muchos de estos abordajes, como la instilación transtraqueal, tienen inconvenientes inherentes, incluida la necesidad de anestésicos fuertes y cirugía de supervivencia. Este artículo informa sobre un método rápido y reproducible de intubación intratraqueal que implica anestesia inhalada leve, visualización de la tráquea y el uso de un espirómetro sustituto para confirmar la exposición. Como prueba de concepto, se administró a ratones C57BL/6 de 8-12 semanas de edad 2,0 U/kg de bleomicina o un volumen equivalente de PBS, y se midieron tanto el daño como los criterios de valoración fibróticos después de la exposición. Este procedimiento permite a los investigadores tratar a una gran cohorte de ratones en un período relativamente corto con poco gasto y un cuidado mínimo después del procedimiento.

Introducción

A pesar de algunas diferencias anatómicas y fisiológicas, ^{1 modelos} murinos continúan siendo de gran valor para el modelado de la biología humana y la patogénesis de la enfermedad. ² Desde un punto de vista de la cría, los ratones son fáciles de manejar, tienen un tiempo de reproducción de baja, una esperanza de vida acelerada, y son relativamente baratos a casa. Con el desarrollo de diversas cepas genéticas y estrategias (por ejemplo., Knock-out condicionales, ratones reportero, enfoques de linaje de trazado, etc.), así como la amplia gama de reactivos disponibles (por ejemplo., Anticuerpos, proteínas recombinantes, inhibidore....

Protocolo

Los Comités Institucionales Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Washington y el Cedars-Sinai Medical Center han aprobado el trabajo con animales necesarios para estos estudios.

1. Preparación

1. Esterilizar tanto las pinzas de extremos romos y el depresor través de autoclave.
2. El uso de una cabina de seguridad biológica, preparar una solución de trabajo de la BLM en PBS a partir del polvo liofilizado. Sonicar la solución durante 10 min a 35 Khz para asegurar una mezcla uniforme.
   Nota: Se recomienda un volumen total de entre 30 y 45 l para evitar la variación de pipeteado en el extremo inferior, y la asfixia con volúm....

Resultados

Ratones intubados se controlaron diariamente para la pérdida de peso y la angustia, y se sacrificaron 4, 10 o 17 días más tarde a través de inyección intraperitoneal de 2,5% 2,2,2 tribromoetanol. Se recogió el lavado broncoalveolar (BAL) en tres lavados de PBS como se describe en otra parte ²¹ y el pulmón derecho se fijó en formalina al 10%, embebidos en parafina, y se tiñeron con tricrómico de Masson por la Universidad de Washington Histología y Imaging Core.......

Discusión

En los casos en que la aerosolización es poco práctico debido a la limitada disponibilidad de reactivos, la seguridad, o el coste, la administración directa de la tráquea es un método superior para la administración de agentes exógenos en los pulmones ¹⁶ transtraqueal instilación ha sido ampliamente utilizado para lograr esto.; Sin embargo, como con cualquier intervención quirúrgica, sino que también lleva consigo la posibilidad de complicaciones causadas por el procedimiento en sí, y no necesariamente el age.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Bleomicina inyectable, 30 unidades/vial	APP Pharmaceuticals, LLC	103720	Para obtener los mejores resultados, BLM debe suspenderse en PBS, alícuota y almacenarse como alícuotas liofilizadas de un solo uso
Pinza
Depresor de lengua (es decir, electrodo de cuchilla Valleylab doblado, 2.4 ")	Covidien	E1551G	Antes de usar, cree una curva de 45 grados a 1,5 cm de la punta de la hoja. También se puede crear un depresor adecuado a partir de cualquier implemento metálico de dimensiones similares.
Catéter Exel Safelet 22G X 1"	Exel International	26746
1 ml Jeringa de tuberculina desechable de punta deslizante (200/sp, 1600/ca)	BD	309659
0,2 ml Pipeta y puntas
Iluminador Fiber-Lite. Modelo 181-1: Modelo 180 acoplado con el iluminador estándar de doble cuello de cisne	de Dolan Jenner Industries, Inc.	181-1	No se recomiendan los iluminadores LED de menor potencia, ya que no iluminan suficientemente la tráquea.
Tablero de			Ver diagrama 1.
Cinta de etiquetas de color: 0.5  en. Ancho	Fisherbrand	15-901-15A
Oxígeno
Solución salina tamponada con fosfato, 1X	Corning	21-040-CV	producto debe ser estéril
Bobina de sutura trenzada negra de seda no estéril, 91,4 m, tamaño 4-0	Aparato Harvard	517698
Máquina de anestesia de mesa Isoflurano	Highland Medical Equipment		http://www.highlandmedical.net/
Cámara de isoflurano de ratón de inducción con tapa deslizante	MIP / Anesthesia Technologies	AS-01-0530-SM
FORANE (isoflurano, USP) Líquido para inhalación 100 mL	Baxter	1001936040
Sistema de patología digital Nanozoomer	Hamamatsu
IgM ELISA Kit de cuantificación	Laboratorios Bethyl	E90-101

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