Aislamiento de CD146<sup&gt; +</sup&gt; Las células estromales mesenquimales de pulmón Residente de los pulmones de ratas

Jennifer J.P. Collins; Marius A. Möbius; Bernard Thébaud

doi:10.3791/53782

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Artículo de método

Aislamiento de CD146

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DOI:

10.3791/53782

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17 de junio de 2016

Jennifer J.P. Collins¹^,² , Marius A. Möbius¹^,³^,⁴ , Bernard Thébaud¹^,²^,⁵

¹Sinclair Centre for Regenerative Medicine, Ottawa Hospital Research Institute, ²University of Ottawa, ³Department of Neonatology and Pediatric Critical Care Medicine, Medical Faculty and University Hospital Carl Gustav Carus, Technische Universität Dresden, ⁴DFG Research Center and Cluster of Excellence for Regenerative Therapies (CRTD), Technische Universität, Dresden, ⁵Children's Hospital of Eastern Ontario Research Institute

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe una técnica de aislamiento para obtener células mesenquimales del estroma residentes de pulmón primarios de ratas, mediante el uso de la digestión enzimática, la separación por gradiente de densidad, la adherencia de plástico y CD146 ⁺ selección de perlas magnéticas.

Resumen

las células estromales mesenquimales (MSC) son cada vez más reconocidos por su potencial terapéutico en una amplia gama de enfermedades, incluyendo enfermedades pulmonares. Además del uso de la médula ósea y las MSC del cordón umbilical para la terapia celular exógena, hay también un creciente interés en la reparación y el potencial regenerativo de las MSC de tejido residentes. Por otra parte, que probablemente tienen un papel en el desarrollo normal de órganos, y se han atribuido funciones en la enfermedad, en particular aquellos con una naturaleza fibrótica. El obstáculo principal para el estudio de estos MSC de tejido residentes es la falta de un marcador claro para el aislamiento e identificación de estas células. La técnica de aislamiento descrito aquí se aplica múltiples características de las MSC residentes de pulmón (L-MSC). Después del sacrificio de las ratas, los pulmones se retiran y se enjuagan varias veces para eliminar la sangre. Tras la disociación mecánica por bisturí, los pulmones se digieren durante 2-3 hr usando una mezcla de colagenasa tipo I, proteasa neutra y el tipo de DNasa I. El obtainesuspensión de células individuales d se lava posteriormente y en capas sobre medio de gradiente de densidad (densidad 1,073 g / ml). Después de la centrifugación, las células de la interfase se lavaron y se sembraron en frascos de cultivo tratadas. Las células se cultivan durante 4-7 días en fisiológica _5% de O2, 5% _de CO 2 condiciones. Para agotar los fibroblastos (CD146 ^{-) y} para asegurar una población de sólo la selección L-MSC (CD146 ^+), positivo para las células CD146 ⁺ se lleva a cabo a través de la selección de perlas magnéticas. En resumen, este procedimiento fiable produce una población de primaria L-MSC para su posterior estudio y manipulación in vitro. Debido a la naturaleza del protocolo, que puede ser fácilmente traducido a otros modelos animales experimentales.