La recolección selectiva de leucocitos marginando-pulmonar

Resumen

Los leucocitos pulmonares marginadores exhiben características únicas y funciones inmunológicas distintas en comparación con otras poblaciones de leucocitos. En este trabajo describimos la recolección selectiva de esta subpoblación de leucocitos pulmonares, mediante perfusión forzada de los pulmones en ratas y ratones. Los leucocitos pulmonares marginadores parecen ser fundamentales para determinar la susceptibilidad a las enfermedades transmitidas por la sangre y relacionadas con los pulmones.

Resumen

Los leucocitos pulmonares marginadores (MP) son leucocitos que se adhieren al endotelio interno de los capilares pulmonares. Se demostró que los leucocitos MP exhiben una composición y características únicas en comparación con los leucocitos de otros compartimentos inmunitarios. La evidencia sugiere una mayor citotoxicidad de las células asesinas naturales y un perfil proinflamatorio y antiinflamatorio distinto de la población de leucocitos MP en comparación con los inmunocitos circulantes o esplénicos. El método presentado en este trabajo permite la recolección selectiva de leucocitos MP por perfusión forzada de los pulmones en ratones o ratas. A diferencia de otros métodos utilizados para extraer leucocitos pulmonares, como la molienda de tejidos y la degradación biológica, este método produce exclusivamente leucocitos de los capilares pulmonares, no contaminados con células parenquimatosas, intersticiales y broncoalveolares. Además, la técnica de perfusión preserva mejor la integridad y el entorno fisiológico de los leucocitos MP, sin inducir respuestas fisiológicas debidas al procesamiento de los tejidos. Esta población única de leucocitos MP está estratégicamente ubicada para identificar y reaccionar ante las células circulantes anormales, ya que todas las células malignas circulantes y las células infectadas se detienen mientras pasan a través de los capilares pulmonares, interactuando físicamente con las células endoteliales y los leucocitos residentes. Por lo tanto, la recolección selectiva de leucocitos MP y su estudio en diversas condiciones pueden avanzar en nuestra comprensión de su importancia biológica y clínica, específicamente con respecto al control de las células aberrantes circulantes y las enfermedades relacionadas con los pulmones.

Introducción

Los leucocitos se adhieren a los capilares de los pulmones (es decir, marginando-pulmonar (MP) leucocitos) ¹ se mostraron para exhibir composición de leucocitos distinto y actividad única en comparación con los leucocitos de otros compartimentos inmunes (por ejemplo, la circulación, el bazo, la médula ósea) ^{2- 4.} Por ejemplo, exhiben MP-leucocitos superior natural killer (NK) citotoxicidad frente a varias células tumorales, en comparación con circulantes y esplénicas células NK, así como los niveles diferenciados de ARN mensajero (ARNm) y aumento de la secreción de citoquinas pro- y anti-inflamatorias. La composición de células....

Protocolo

Los procedimientos que implican sujetos animales han sido aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional (IACUC) de la Universidad de Tel-Aviv.

1. Protocolo de rata

1. Preparativos
   1. Organizar 2 mariposa 21 G agujas. Opcionalmente, se preparan 2 mariposa 21 G-agujas romas filo presentando el borde afilado de la aguja.
   2. Esterilizar instrumentos quirúrgicos: 2 pares de tijeras, pinzas afiladas embotado, pinzas hemostáticas, pinzas de dientes de tejidos esterilizados en autoclave a 121 ° C durante al menos 30 minutos en el establecimiento de la gravedad (en seco).
   3. Preparar heparinizada PBS (30 unidades / ml) ....

Resultados

La exposición MP-compartimiento de una composición de leucocitos subconjunto diferente en comparación con los leucocitos circulantes. Utilizando el análisis de citometría de flujo, se identificaron y se cuantificaron las subpoblaciones de leucocitos para caracterizar la composición de ambos leucocitos circulantes y MP. Granulocitos y linfocitos fueron identificados en base a primero y la cara dispersa. Dentro de los linfocitos, se identificaron NKRP-1 células ^brillantes como l.......

Discusión

El método presentado en este documento permite la recogida selectiva y el estudio de la población única de MP-leucocitos. En comparación con los leucocitos esplénicos o circulante, la población MP se caracteriza por una composición distinta de subpoblaciones de leucocitos, los niveles de activación más altos, mayor liberación de varias citoquinas, y más altos niveles de ARNm de pro- y citocinas antiinflamatorias ^2,3. Específicamente, hemos demostrado que las células MP-NK son más citotóxicos que las células N.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Autoclud Bomba
Aguja de mariposa	OMG		26G
Aguja de mariposa	OMG		21G*3/4"
Jeringa	Pic solución		1 ml
Jeringa	Pic solución		2,5 ml
Jeringa	Pic solución		5 ml
Jeringa	Pic solución		10 ml
Jeringa	Pic solución		25 ml
Pinzas
			Tijeras
hemostático
(sin conservantes)	Sigma Aldrich

peristálticade borde romo Pinza de tejido Heparina sódica mucosa porcina