La recolección selectiva de leucocitos marginando-hepáticas

Resumen

Los leucocitos hepáticos marginadores exhiben características únicas y funciones inmunológicas distintas en comparación con otras poblaciones de leucocitos. En este trabajo describimos un método para la recolección selectiva de esta población específica de células hepáticas, mediante perfusión forzada del hígado de ratas o ratones. Los leucocitos hepáticos marginadores parecen ser fundamentales para determinar la susceptibilidad a las enfermedades y metástasis relacionadas con el hígado.

Resumen

Los leucocitos hepáticos marginadores (MH) (leucocitos que se adhieren a los sinusoides del hígado) mostraron una composición y características únicas en comparación con los leucocitos de otros compartimentos inmunes. Específicamente, la evidencia sugiere un perfil proinflamatorio y antiinflamatorio distinto de la población de leucocitos MH y una mayor citotoxicidad de las células NK específicas del hígado (es decir, células pit) en comparación con los inmunocitos circulantes o esplénicos tanto en ratones como en ratas. El método presentado en este trabajo permite la recolección selectiva de leucocitos MH por perfusión forzada del hígado en ratones y ratas. A diferencia de otros métodos utilizados para extraer leucocitos hepáticos, como la molienda de tejidos y la degradación biológica, este método produce exclusivamente leucocitos de los sinusoides hepáticos, no contaminados por células de otros compartimentos hepáticos. Además, la técnica de perfusión preserva mejor la integridad y el entorno fisiológico de los leucocitos MH, evitando las respuestas fisiológicas conocidas al procesamiento tisular. Dado que muchas células malignas circulantes e infectadas se detienen mientras pasan a través de los sinusoides hepáticos, interactuando físicamente con las células endoteliales y los leucocitos residentes, la población única de leucocitos MH está estratégicamente ubicada para interactuar, identificar y reaccionar hacia las células circulantes aberrantes. Por lo tanto, la recolección selectiva de leucocitos MH y su estudio en diversas condiciones puede avanzar en nuestra comprensión de la importancia biológica y clínica de los leucocitos MH, específicamente con respecto a las células aberrantes circulantes y las enfermedades relacionadas con el hígado y las metástasis cancerosas.

Introducción

Los sinusoides hepáticos contienen numerosos subtipos de leucocitos de diversas actividades inmunes críticos para el organismo. Por ejemplo, las células marginando hepática (MH) asesinas naturales (NK), también conocidas como células de pozo, se caracterizan morfológicamente como linfocitos granulares grandes (LGLs) y funcionalmente como leucocitos con capacidad citotóxica espontánea, lo que permite hepática resistencia contra el establecimiento de sangre metástasis tumorales Borne. El objetivo del método presentado en este documento es para permitir la recolección selectiva de leucocitos MH, con el fin de estudiar esta población celular importante y única (y el comp....

Protocolo

Declaración de Ética: Los procedimientos que implican sujetos animales han sido aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional (IACUC) de la Universidad de Tel-Aviv.

Protocolo 1. Las ratas

1. Preparativos
   1. Preparar la solución heparinizada PBS (30 unidades / ml) para ser usado a temperatura ambiente (RT) mediante la adición de 30 unidades de heparina libre de conservantes por ml de solución salina tamponada con fosfato 1x solución (PBS). Calcula 35 ml por animal.
   2. Pase heparinizada PBS a través de las líneas de bomba peristáltica y las agujas de mariposa para eliminar burbujas de aire.

Resultados

En las ratas F344 se comparó la citotoxicidad de células NK-MH (recogido de los sinusoides hepáticos por perfusión del hígado forzado) a la citotoxicidad de la totalidad de la población de células de hígado después de trituración mecánica del tejido del hígado, y a la citotoxicidad de los leucocitos circulantes. Todas las preparaciones celulares se lavaron al menos 3 veces, como rutina en ensayos inmunológicos, y como líneas de células diana que utilizan las líneas de la célula diana sin.......

Discusión

El método de perfusión hepática que aquí se presenta permite una recolección selectiva y el estudio de la población única de marginando leucocitos hepáticas. Células hepáticas NK, también llamadas células de pozo ^3, constituyen una población de células NK distintivo que residen en los sinusoides hepáticos. Se encuentran en ratas, ratones y ¹⁷ en los seres humanos ^18,19. En comparación con las células NK periféricas aisladas, células de pozo demostrado mayor citotoxicidad contra líneas de.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Autoclud Bomba
Aguja de mariposa	OMG		26 G
Aguja de mariposa	OMG		21 G*3/4"
Jeringa	Pic solución		1 ml
Jeringa	Pic solución		2,5 ml
Jeringa	Pic solución		5 ml
Jeringa	Pic solución		10 ml
Jeringa	Pic solución		25 ml
Pinzas
			Tijeras
hemostático
Pinzas
22 W Lámpara

peristálticade borde romode tejido de lupa fluorescente de luz diurna