Artículo de método

Un modelo murino de isquemia retiniana-reperfusión mediante la elevación de la presión intraocular

DOI:

10.3791/54065

14 de julio de 2016

En este artículo

Resumen

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Este artículo describe un procedimiento para la inducción de la lesión por isquemia-reperfusión de la retina por la presión intraocular elevada en los ratones. lesión de la retina por isquemia-reperfusión por la presión intraocular elevada sirve para modelar patologías humanas caracterizadas por oxígeno comprometida y la entrega de nutrientes en la retina, lo que permite a los investigadores a examinar los posibles mecanismos celulares y tratamientos para las enfermedades humanas de la unidad neurovascular retina.

Resumen

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Retina por isquemia-reperfusión (I / R) es un proceso fisiopatológico que contribuye al daño celular en múltiples condiciones oculares, incluyendo el glaucoma, la retinopatía diabética, y oclusiones vasculares retinianas. modelos de roedores de I / R lesiones están proporcionando importantes conocimientos sobre los mecanismos y estrategias de tratamiento para la lesión I / R humano, especialmente en cuanto al daño neurodegenerativo en la unidad neurovascular de la retina. Se presenta aquí es un protocolo para la inducción de la lesión I / R de la retina en ratones a través de elevación de la presión intraocular (IOP). En este protocolo, la cámara anterior ocular es canulado con una aguja, a través del cual fluye el goteo de un depósito de solución salina elevada. El uso de este goteo para aumentar la PIO por encima de la presión sanguínea arterial sistólica, un practicante detiene temporalmente el flujo sanguíneo de la retina interna (isquemia). Cuando la circulación se restablece (reperfusión) por eliminación de la cánula, el daño celular grave se produce, lo que resulta en última instancia en la neurodegeneración de la retina. espárrago recienteIES demuestran la inflamación, la permeabilidad vascular, y la degeneración capilar como elementos adicionales de este modelo. En comparación con las metodologías de I / R de la retina alternativos, tales como la ligadura arterial de la retina, I retinal / R lesión por PIO elevada ofrece ventajas en su especificidad anatómica, tratabilidad experimental, y la accesibilidad técnica, se presenta como una herramienta valiosa para el examen de la patogénesis y la terapia neuronal en la unidad neurovascular retina.

Introducción

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Retina por isquemia-reperfusión (I / R) caracteriza a muchas patologías de la retina humana, incluyendo el glaucoma, la retinopatía diabética, y oclusiones vasculares de la retina 1. En la retina I / R, reducción del flujo sanguíneo (isquemia) en la vasculatura de la retina crea un estado de hipersensibilidad de la retina al oxígeno y otros nutrientes, precipitando oxidativo severo y daño inflamatorio cuando la circulación se restablece posteriormente (reperfusión) 2. La retina neural parece ser particularmente vulnerables a estos cambios, con la neurodegeneración de la retina siendo quizás la característica más sobresaliente de daño inducido po....

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Protocolo

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Declaración de Ética: Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con las directrices establecidas por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Johns Hopkins.

Nota: Los ratones utilizados durante el rodaje son C57BL / 6 ratones de Jackson, aunque también se pueden utilizar otras cepas de roedores o especies. Al utilizar otras cepas o especies, tenga en cuenta que las dosis de anestesia y cronograma lesiones pueden variar. Es importante adaptar las condiciones de E / R para dar cabida a la cepa, especie, y las variaciones experimentales.

1. Preparar el Cóctel de Anestesia

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Resultados

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Los efectos neurodegenerativos de retina I / R de la PIO elevada comúnmente se evaluó usando dos enfoques estándar. NeuN immunolabeling de núcleos neuronales ha revelado pérdida significativa de células neuronales después de I / R insulto (Figura 1). En pocas palabras, los ojos enucleados 7 días después de I / R se fijaron en paraformaldehído, marcado con el marcador de las células neuronales NeuN, y montado en su conjunto. Las imágenes fueron capturadas usando microscop.......

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Discusión

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I retina / R lesión por PIO elevada ha demostrado su utilidad en el modelado de daño celular y la disfunción, en particular la neurodegeneración, en la unidad neurovascular retina de roedores. Este procedimiento proporciona un tejido de control robusto y es fácilmente accesible en términos de sofisticación técnica. Se ha observado en este y otros modelos de lesión I / R que el aumento de la presión y la duración de la isquemia puede aumentar la gravedad de la lesión 24. Por esta razón, algunos médicos han opt.......

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Divulgaciones

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Los autores no tienen divulgaciones.

Agradecimientos

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Este trabajo fue apoyado por becas de investigación de los Institutos Nacionales de Salud (EY022383 y EY022683; EJD) y subvención Core (P30EY001765), imágenes y microscopía módulo principal.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Inyección de heparina sódica, USPAbraxis Productos1,000 USP/ml
BSS Solución de irrigación estéril AlconLaboratories, Inc.9007754-0212500 ml
SC-2 kg Báscula de bolsillo digitalAmerican Weigh Scales, Inc.SC-2 kg
Solución oftálmica de tropicamida USP 1%Bausch + Lomb1% (10 mg/ml)
Clorhidrato de proparacaína solución oftálmica USP, 0,5%Bausch + Lomb0,5% (5 mg/ml)
INTRAMEDIC Tubo de polietilenoBecton Dickinson and Company427400Diámetro interior: 427400
30 g 1/2 Agujas PrecisionGlideBenton Dickinson and Company
BC Jeringa TB de 1 ml, punta delgada con aguja biselada intradérmica, 26 g x 3/8Benton Dickinson and Company309625
BD 60 ml Jeringa Luer-Lok TipBenton Dickinson and Company 309653Microscopio
Carl Zeiss AG000000-1179-101
Filtro de jeringa estérilCorning Inc.CLS4312240,20 y micro; m
Almohadillas DurasorbCovidien103823 x 24 pulgadas
Preparación para el alcoholCovidien68182 capas, mediana
Pinzas para estudiantes Dumont #5 Herramientasciencia fina91150-20
Hemostáticos Hartman Herramientas deciencia fina13002-10
Juego primario, Macrobore, sitio en Y preperforado, 80 pulgadasHospira12672-28
Solución salina tamponada con fosfato pH 7,4 (1x)Invitrogen10010-049500 ml
Agua destiladaInvitrogen15230-204500 ml
C57BL/6J RatonesThe Jackson Laboratory664
AnaSed Inyección: Solución estéril de xilacinaLLOYD, Inc.20 mg/ml
Jalea lubricante, soluble en agua Bacteriostático MediChoicePaquete de 3 gramos
NAMIC Colector de control de presión angiográficaNavilyst Medical, Inc.70039355Colector de 5 válvulas con siete puertos hembra
Goniosoft, solución oftálmica demulcente de hidromemelosa al 2,5%: hidroxipropilmetilcelulosaOCuSOFT, Inc.2.5% (25 mg/ml)
Ketaset CIII: Clorhidrato de ketaminaPfizer, Inc.100 mg/ml
Trans-Pal I.V. Stand Pryor Products372Amueblado con una extensión de acero inoxidable de 60 cm construida en casa
Acepromazine: Inyección de maleato de acepromazina, USPVet One10 mg/ml
Mesa de cirugía V-Top/Ajustable HidráulicaVSSI100-4041-21
Racor de tubo Luer Male a Luer MaleWarner Instruments64-1579
farmacéuticos 305106 Zeiss OPMI Visu 200/S8 de

Referencias

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  1. Osborne, N. N., et al. Retinal ischemia: mechanisms of damage and potential therapeutic strategies. Prog Retin Eye Res. 23 (1), 91-147 (2004).
  2. Bonne, C., Muller, A., Villain, M. Free radicals in retinal ischemia. Gen Pharmacol. 30 (3), 275-280 (1998).
  3. ....

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