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Artículo de método

Nuevo enfoque para la grabación simultánea de la actividad nerviosa simpática Renal y presión arterial con la infusión intravenosa en consciente, libre de ratones.

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DOI:

10.3791/54120

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14 de febrero de 2018

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En este artículo

Resumen

Ratones anestesiados exhiben la presión arterial sistémica no fisiológico, que impide una evaluación significativa del tono autonómico, dada la íntima relación entre la presión arterial y el sistema nervioso autónomo. Así, se describe un método novedoso para la actividad del nervio simpático renal al mismo tiempo récord y la presión arterial con la infusión intravenosa en ratones conscientes.

Resumen

Los nervios simpáticos renales contribuyen significativamente a los fenómenos fisiológicos y patofisiológicos. Evaluación de la actividad nerviosa simpática renal (RSNA) es de gran interés en muchas áreas de investigación tales como la enfermedad renal crónica, hipertensión, insuficiencia cardíaca, diabetes y obesidad. Evaluación inequívoca del papel del sistema nervioso simpático así es imprescindible para la correcta interpretación de resultados experimentales y la comprensión de procesos de la enfermedad. RSNA ha sido tradicionalmente medida en roedores anestesiados, incluyendo ratones. Sin embargo, ratones generalmente exhiben muy baja la presión arterial sistémica e inestabilidad hemodinámica durante varias horas durante la anestesia y la cirugía. Interpretación significativa de RSNA es confundido por esta situación no fisiológica, dada la íntima relación entre tono nervioso simpático y el estado cardiovascular. Para hacer frente a esta limitación de los enfoques tradicionales, hemos desarrollado un nuevo método para medir la RSNA en ratones conscientes, moviéndose libremente. Ratones fueron crónicamente instrumentados con radio telemetría para monitoreo continuo de presión arterial, así como un catéter de infusión venosa yugular y electrodo bipolar diseñado para la grabación directa de RSNA. Después de un período de recuperación de 48-72 horas, la tasa de supervivencia fue del 100% y todos los ratones se comportaban normalmente. En este momento, RSNA se registró con éxito en el 80% de los ratones, con las señales viables adquiridas hasta 4 y 5 días post-cirugía en 70% y el 50% de los ratones, respectivamente. Fisiológica presión arterial se registraron en todos los ratones (116±2 mmHg; n = 10). RSNA registrado aumentó con comer y aseo personal, tan bien establecido en la literatura. Además, RSNA fue validado por bloqueo ganglionar y la modulación de la presión arterial con agentes farmacológicos. En este documento, se describe un método eficaz y manejable para registro claro de RSNA en ratones conscientes, moviéndose libremente.

Introducción

Interés en el uso de ratones en varias áreas de la investigación biomédica continúan expandiéndose con el desarrollo de innumerables modelos genéticamente. En su mayor parte, avances técnicos han mantenido a la par con el aumento del uso de ratones en fisiología y ahora es una impresionante selección de dispositivos miniaturizados desarrollado específicamente para la medición de parámetros fisiológicos importantes en ratones. Aunque dispositivos telemétricos para dirigen medidas de autonómica tono nervioso en ratas conscientes han estado disponibles por más de una década, dispositivos miniaturizados para la evaluación de la actividad nerviosa en ratones conscientes no....

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Protocolo

Todos los procedimientos experimentales están de acuerdo con los institutos nacionales de salud guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio y fueron aprobados por el cuidado institucional del Animal y uso de la Universidad de Mississippi Medical Center.

1. animales y vivienda

  1. Ratones de la casa (24-35 g) a su llegada a las instalaciones de animales de laboratorio institucional.
  2. Ofrecer ratones estándar chow roedor y agua ad libitum en todas las etapas del protocolo experimental en un ambiente controlado de temperatura y humedad.

2. modificado para requisitos particulares fabricación del electrodo Imp....

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Resultados

Siguiendo el protocolo descrito, tasa de supervivencia fue de 100% - todos los ratones instrumentados en este estudio sobrevivió y se recuperó bien tras la intervención quirúrgica. Dentro de las 24 horas de preparación quirúrgica, todos los ratones se comportó normalmente, exposición de comida típica, comportamientos exploratorios y peluquería. Animales no mostraron ningún signo de dolor o angustia en este momento. 48 horas después de la cirugía, una señal clara y verificable de la RSNA s.......

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Discusión

Aquí hemos esbozado, demostrado y validado un nuevo método para la evaluación específica de RSNA en ratones conscientes, libres para moverse y descansar cómodamente en sus jaulas hogar. Después de la implantación quirúrgica de una radiotelemeter de la presión arterial, un catéter de infusión intravenosa permanente y un electrodo RSNA bipolar diseñado, ratones se recuperaron de la cirugía y quedaron inalterados durante 48 a 72 horas. Ratones permanecieron cómodamente asentados en su casa jaula en todo momento (incluyendo .......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

S.M.H. fue apoyado por becas postdoctorales de los institutos canadienses para investigación de la salud (CIHR), corazón & Fundación tiempos de Canada (HSFC) y Alberta Innova Health Solutions (AiHS); J.E.H. es apoyado por una donación del corazón nacional, pulmón y sangre Instituto PO1HL-51971.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Alambre trenzado múltiple de acero inoxidable recubierto de teflónA-M Systems7932000.001in de diámetro desnudo; 0.0055in de diámetro recubierto
#11 Hoja de bisturíFisher ScientificALMM9011
Soldador y soldaduraCualquier marca o modelo adecuado
Conectores de clavija miniatura macho A-MSystems520200Latón con baño de oro
Conectores de clavija miniatura hembraA-M Systems520100Latón con chapado en oro
Tubo termorretráctilRadio ShackModelo #: 278-1610 |  Catálogo #: 2781610 Tubo
polietileno 90 (PE90)VWRCA-63018-7030,86 mm de diámetro interior; 1,27 mm de diámetro exterior
Microscopio de disecciónLeica MicrosystemsLeica M80Cualquier marca o modelo también adecuado
Tubo de polietileno 10 (PE10)Braintree ScientificPE10  50 PIES0,28 mm de diámetro interior; 0,61 mm de diámetro exterior
Super GlueLiquid Loctiten/aLiquid Formula; cualquier marca adecuada
Super Glue GelLoctiten/aGel Formula; cualquier marca adecuada
Tubo de polietilenoScientific CommoditiesBB31695-PE/13Para pedestal 2,7 mm de diámetro interior; 4,0 mm de diámetro exterior
Servicios de esterilización hospitalaria & Paquetes de esterilización con ozono Póngasecontacto con los servicios de esterilización del hospital local
Anestesia con isofluranoAbbott05260-05
Almohadillas térmicas isotérmicas Deltaphase y mesa quirúrgicaBraintree Scientific39OPMantenga las almohadillas térmicas calientes en un 37° C baño maría; Mesa quirúrgica correspondiente
esencial GlycopyrrolateAmdipharm Mercury Company Limitedn/a
Sistema de vaporizador de isoflurano y medidor de flujoBraintree ScientificVP IIncluye suministro de oxígeno de grado médico
Tijeras de tejido Herramientas defina14173-12
Tijeras de resorte finasHerramientas de ciencia fina15006-09
Aplicadores pequeños con punta de algodónFisher Scientific23400100
Pinzas rectas finasFine Science Tools11254-20#5, FST by Dumont Biologie
Pinzas angularesFine Science Tools11251-35#5/45 FST by Dumont
Lanzas absorbentes pequeñas FineScience Tools18105-03
ParafilmSigma AldrichBR701605  ALDRICH
Kwik-Sil 2 componentes Polímero de siliconaWorld Precision Instruments (WPI)KWIK-SILCompre puntas extra especializadas de WPI
5-0 Polysorb SutureTyco Healthcaren/a
6-0 Sutura de sedaBraintree ScientificSUT-S  104Marca Deknatel, bobina
Sonda de radiotelemetríaData Sciences International (DSI)TA11-PAC10
Receptor de radiotelemetríaData Sciences International (DSI)PhysioTel RPC-1
Referencia de presión ambiental Data SciencesInternational (DSI)Abr-01
Adaptador de salida de presiónData Sciences International (DSI)R11CPA
Rena Pulse TubingBraintree ScientificRPT-040
Infusion SwivelInstech Solomon375/D/22
Brazo de soporte giratorio & Botón de polisulfonaInstech SolomonSMCLA
 Instech SolomonLW62S/6
Muelle de acero inoxidableInstech SolomonPS62
Vetbond adhesivo quirúrgico3Mn/a
Triple Pomada AntibióticaFougeran/a
PowerLab Sistema de adquisición de datos de 8 canales & SoftwareADInstrumentsPowerLab 8/35
Cable aislado de PVC BeldenCable de conexión de audio de PVC 32 AWG
Headstage de preamplificaciónDagan Corporationmodelo 4002
Amplificador diferencialDagan CorporationEX4-400
Nitroprusside de sodioSigma Aldrich71778-25G
FenilefrinaSigma AldrichP6126-5G
Solución salina fisiológica estéril 0.9% NaClBeckton DickinsonContactar con el proveedor del hospital local
hexametonioSigma AldrichH0879-5G
Mesa antivibratoria superior de acero inoxidablen/an/aDiseñada internamente a medida; La placa de acero sólido en una mesa de trabajo también es adecuada
Jaula de Faradayn/an/aDiseñada y construida a medida en casa
Recortadora de pelo de animales pequeñosn/an/aFarmacia, recortadora de barba para hombres adecuada
Crema dipilatorian/an/aMarca Veet, fórmula para pieles sensibles
10% Povidona Yodada Productosde PurdueBetadiene
70% Etanoln/an/a
Microrretractores de aceron/an/aDe fabricación propia. Dobla un clip de acero y lazo 4-0 seda para formar un retractor
HemostáticosFine Science Tools13011-12
Pistola de calorFisher Scientific09-201-27
de de 1,6 mm de diámetro en ciencia con punta Mount

Referencias

  1. Young, C. N., Davisson, R. L. In vivo assessment of neurocardiovascular regulation in the mouse: principles, progress, and prospects. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 301 (3), H654-H662 (2011).
  2. Kass, D. A., Hare, J. M., Georgakopoulos, D. Murine card....

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