Fémur Window Cámara Modelo de<em&gt; En Vivo</em&gt; Seguimiento de la célula de la médula ósea murina

Yonghong Chen; Azusa Maeda; Jiachuan Bu; Ralph DaCosta

doi:10.3791/54205

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Artículo de método

Fémur Window Cámara Modelo de

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DOI:

10.3791/54205

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28 de julio de 2016

Yonghong Chen^*¹ , Azusa Maeda^*¹^,² , Jiachuan Bu¹ , Ralph DaCosta¹^,²^,³

¹Princess Margaret Cancer Centre, ²Department of Medical Biophysics, University of Toronto, ³Techna Institute, University Health Network

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El protocolo describe un novedoso modelo de cámara de ventana de fémur murino que se puede utilizar para rastrear el movimiento de las células en la médula ósea femoral in vivo. La microscopía de fluorescencia multifotónica intravital se utiliza para obtener imágenes de tres componentes de la médula ósea femoral (vasculatura, matriz de colágeno y neutrófilos) a lo largo del tiempo.

Resumen

La médula ósea es un órgano complejo que contiene varias células hematopoyéticas y no hematopoyéticas. Estas células participan en muchos procesos biológicos, como la hematopoyesis, la regulación inmunitaria y la regulación tumoral. Los métodos comúnmente utilizados para comprender las acciones celulares en la médula ósea, como la histología y los recuentos sanguíneos, proporcionan información estática en lugar de capturar la acción dinámica de múltiples componentes celulares in vivo. Para complementar los métodos estándar, se desarrolló un modelo basado en cámara de ventana (CC) para permitir la obtención de imágenes in vivo en serie de células y estructuras en la médula ósea murina. Este protocolo describe un procedimiento quirúrgico para instalar el CC en el fémur, con el fin de facilitar el acceso óptico a largo plazo a la médula ósea femoral. En particular, para demostrar su utilidad experimental, este enfoque de WC se utilizó para obtener imágenes y rastrear neutrófilos dentro de la red vascular del fémur, proporcionando así un método novedoso para visualizar y cuantificar el tráfico y la regulación de las células inmunitarias en la médula ósea. Este método se puede aplicar para estudiar diversos procesos biológicos en la médula ósea murina, como la hematopoyesis, el trasplante de células madre y las respuestas inmunitarias en condiciones patológicas, incluido el cáncer.

Introducción

La médula ósea es un órgano importante que participa en la hematopoyesis y la regulación inmune. Se compone de un componente hematopoyético que contiene las células madre y progenitoras hematopoyéticas (hspCs), y un componente del estroma que contiene células progenitoras no hematopoyéticas que dan lugar a células mesenquimales ^1. Dos tercios de la actividad hematopoyética se dedica a la generación de células mieloides ^2. En particular, un gran número de neutrófilos se producen en la médula ósea, con 1-2 x 10 ¹¹ células generadas por día en un ser humano adulto normal ^2. Los neutrófilos son la primera línea de defensa contr....