La cría de la mosca de la fruta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Bajo axénicos y Condiciones gnotobióticos

Melinda L. Koyle; Madeline Veloz; Alec M. Judd; Adam C.-N. Wong; Peter D. Newell; Angela E. Douglas; John M. Chaston

doi:10.3791/54219

Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

La cría de la mosca de la fruta

22.4K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/54219

⸱

30 de julio de 2016

Melinda L. Koyle¹ , Madeline Veloz¹ , Alec M. Judd¹ , Adam C.-N. Wong²^,⁴ , Peter D. Newell²^,⁵ , Angela E. Douglas²^,³ , John M. Chaston¹^,²

¹Department of Plant and Wildlife Sciences, Brigham Young University, ²Department of Entomology, Cornell University, ³Department of Molecular Biology and Genetics, Cornell University, ⁴Division of Infectious Diseases, Boston Children's Hospital, Harvard Medical School, ⁵Biological Sciences, SUNY Oswego

En este artículo

Aviso de erratum

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Resumen

Se presenta un método para la cría de Drosophila melanogaster en condiciones axénicas y gnotobióticos. Volar embriones se dechorionated en hipoclorito de sodio, de manera aséptica a la dieta estéril, y se ha criado en contenedores cerrados. La inoculación de la dieta y los embriones con bacterias conduce a asociaciones gnotobióticos, y la presencia bacteriana se confirmó mediante siembra de todo el cuerpo homogeneizados de Drosophila.

Resumen

La influencia de los microbios en una miríada de rasgos y comportamientos animales ha sido cada vez más reconocida en los últimos años. La mosca de la fruta Drosophila melanogaster es un modelo para comprender las interacciones microbianas con los huéspedes animales, facilitado por enfoques para criar muestras de grandes tamaños de Drosophila en condiciones libres de microorganismos (axénicos) o con comunidades microbianas definidas (gnotobióticos). Este trabajo describe un método para la recolección de embriones de Drosophila, la descorionación y esterilización de hipoclorito y la transferencia a una dieta estéril. Los embriones esterilizados se transfieren a una dieta estéril en tubos de centrífuga de 50 ml, y las larvas y los adultos en desarrollo permanecen libres de microbios exógenos hasta que se abren los viales. Alternativamente, las moscas con una microbiota definida pueden criarse inoculando dieta estéril y embriones con especies microbianas de interés. Describimos la introducción de 4 especies bacterianas para establecer una microbiota gnotobiótica representativa en Drosophila. Finalmente, describimos los enfoques para confirmar la composición de la comunidad bacteriana, incluida la prueba de si la Drosophila axénica permanece libre de bacterias en la edad adulta.

Introducción

La mayoría de los animales están íntimamente asociados con las bacterias ( 'microbiota') desde el nacimiento hasta la muerte ^1. Las comparaciones de los animales libres de microorganismos ( 'axénicos') y de microorganismos-asociado ( "convencional") han demostrado microbios influyen en diversos aspectos de la salud de los animales, incluyendo metabólico, nutricional, vascular, hepático, respiratorio, inmunológico, endocrino y la función neurológica ^2. La mosca de la fruta Drosophila melanogaster es un modelo clave para la comprensión de muchos de estos procesos en la presencia de microbios y ^3,4 para el estudi....