Las lesiones renales efectuados desde nefrotóxicos, que incluyen medicamentos que van desde antibióticos a los agentes quimioterapéuticos, pueden dar lugar a trastornos complejos cuya patogénesis se conoce por completo. Este protocolo se muestra cómo el pez cebra se puede utilizar para el modelado de la enfermedad de estas condiciones, que se pueden aplicar a la identificación de medidas renoprotective.
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Artículo de método
Nefrotoxina Microinyección en pez cebra para modelar la lesión renal aguda
En este artículo
Resumen
Resumen
Los riñones son susceptibles al daño causado por la exposición a los productos químicos que se filtran desde el torrente sanguíneo. Esto puede conducir a una lesión de órganos asociada con una rápida disminución de la función y el desarrollo del síndrome clínico conocido como lesión renal aguda (IRA) renal. Los agentes farmacológicos utilizados para tratar las circunstancias médicas que van desde la infección bacteriana con el cáncer, cuando se administra individualmente o en combinación con otros fármacos, pueden iniciar AKI. El pez cebra son un modelo animal útil para estudiar los efectos químicos sobre la función renal in vivo, ya que forman un riñón embrionario compuesta de unidades funcionales de nefrones que se conservan con los vertebrados superiores, incluidos los humanos. Además, el pez cebra puede utilizarse para realizar cribados genéticos y químicos, que proporcionan oportunidades para dilucidar los aspectos celulares y moleculares de AKI y desarrollar estrategias terapéuticas tales como la identificación de moléculas nefroprotectores. Aquí, demostramos como la microinyección en elembrión de pez cebra puede ser utilizado como un paradigma para estudios nefrotoxina.
Introducción
AKI es una pérdida abrupta de la función renal que puede conducir a consecuencias devastadoras para la salud 1. AKI es un problema importante de la salud en todo el mundo debido a su alta incidencia de aproximadamente el 20% de los pacientes hospitalizados, con tasas aún mayores de 30-50% en los casos de cuidados críticos y los ancianos, y las tasas de mortalidad de 50-70% 1-3. Desafortunadamente, la prevalencia de la LRA ha ido en aumento y se prevé que agravar más durante la próxima década, debido en parte a la diversidad de factores que pueden inducir lesión renal aguda, que incluyen el estrés post-operatorio, la isquemia, y la exposición a n....
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Protocolo
Los procedimientos para trabajar con embriones de pez cebra que se describen en este protocolo fue aprobado por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional de la Universidad de Notre Dame.
1. Preparación de soluciones
- Hacer una solución 50x social de los medios de embriones E3 mezclando 73,0 g de NaCl, 3,15 g de KCl, 9,15 g de CaCl2, y 9,95 g MgSO4 en 5 litros de agua destilada, y se almacena a temperatura ambiente.
- Para el cultivo de los embriones de pez cebra, se diluye la solución de 50x social de E3 del medio de impresión de embrión a una solución de trabajo 1x con agua destilada, a continuación, añadir ....
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Resultados
Una estación de microinyección configurar incluye un estereomicroscopio, micromanipulador y regulador de presión (Figura 1A). La transiluminación de la placa de inyección es preferible para ver las muestras durante este procedimiento (Figura 1B). Preparación de la aguja de inyección consiste en tirar el vidrio de borosilicato apropiado, seguido de la preparación del borde con el corte y finalmente de vuelta a cargar la aguja. De manera óptima, la punta d.......
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Discusión
Un número diverso de agentes terapéuticos se han asociado con AKI 29. Ha habido avances en la investigación significativo en la comprensión el daño inducido por muchos compuestos individuales, tales como la gentamicina aminoglucósido 30 y el cisplatino quimioterapéutico ampliamente utilizado 31,32. Algunos cambios patológicos implicados en estas condiciones, sin embargo, siguen siendo objeto de estudio en curso. Uno de los retos emergentes sigue siendo la comprensión de cómo múltiples fá.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado en parte por la subvención NIH DP2OD008470. Además, la memoria RAM fue apoyado en parte por los fondos proporcionados por la Universidad de Notre Dame Graduate School. Agradecemos a los funcionarios del Departamento de Ciencias Biológicas, el Centro de Investigación de pez cebra, y el Centro de Células Madre y Medicina Regenerativa de la Universidad de Notre Dame. Agradecemos especialmente a los miembros del laboratorio para enganchar las discusiones acerca de la biología del riñón y sus útiles comentarios sobre este trabajo.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cloruro de sodio | AB01915 Cloruro | ||
| potasio | AB01652 | bioanalítico americano | |
| Cloruro de calcio | AB00366 | bioanalítico americano | |
| N-feniltiourea (PTU) | Aldrich Chemistry | P7629 | |
| 3-aminobenzoato de etilo (tricaína) | Fluka Analytical | A5040 | |
| Vidrio de borosilicato | Sutter Instruments Co. | BF100-50-10 | |
| Tirador de micropipetas Flaming/Brown | Sutter Instruments Co. | Mo. P097 | |
| UltraPure Agarose | Invitrogen | 15510-027 | |
| Sulfato de magnesio | Sigma-Aldrich | M7506 | |
| Azul de metileno | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Falcon Placas de Petri Diposables, Estériles, Corning: | |||
| 60 mm x 15 mm | VWR | 25373-085 | |
| 100 mm x 15 mm | VWR | 25373-100 | |
| ( bandeja de microinyección) 150 mm x 15 mm | VWR | 25373-187 | |
| Incubadora de baja temperatura | Fischer Scientific | 11 690 516DQ | |
| Pinza de microdisección | Roboz Surgical Instruments Co. | Micrómetro RS-5010 | |
| Ted Pella, Inc. | 2280-24 |
Referencias
- Basile, D. P., Anderson, M. D., Sutton, T. A. Pathophysiology of acute kidney injury. Compr. Physiol. 2, 1303-1353 (2012).
- Ostermann, M. Diagnosis of acute kidney injury: kidney disease improving global outcomes criteria and beyond. Curr. Opin. Crit. Care. <....
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Reimpresiones y permisos
